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3 杂种植株杂种植株 融合的 原生质 体 AB 再 生 出 细 胞 壁 脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 再分化再分化 复习：植物体细胞杂交 植物细胞的融合植物组织培养 植物细胞 A 原生质体 B 原生质体 A 杂种 细胞 AB 去 壁去 壁 去 壁去 壁 人工诱导人工诱导 方法？ 促进融合 的方法？ 融合 完成 的 标志 植物细胞 B 酶解法（纤维素酶、果胶酶） 物理法：离心、振动、电激等 化学法：聚乙二醇（ PEG ） 原理 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性

4 一、动物细胞融合 1 、概念： 指 ___________ 动物细胞结合形成 ______ 细胞的 过程。 2 、结果：形成单核的杂交细胞 3 、原理：细胞膜的流动性 4 、过程：过程： 5 、意义：突破了 __________ 方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。远缘杂交 6 、应用：成为研究 __________ 、细胞免疫、 _____ 和生 物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制 造 __________ 两个或多个一个 有性杂交 细胞遗传 肿瘤 单克隆抗体

5 4 、过程： 动物细胞 A 动物细胞 B 诱导，融合 2 个完整的杂交细胞 AB 有丝分裂 （ 膜融合、 诱导方法 质融合、 核融合 ） 单核细胞

6 2 、什么是抗体？ 二、单克隆抗体 回顾 3 、抗体的分布？ 抗体是机体受 ______ 刺激后产生的、并能 与该抗原发生 _____ 性结合的具有免疫功能 的球蛋白。 主要分布在血清中。 1 、什么是克隆？ “ 克隆 ” 从英文 “clone” 音译而来，是指从一个共同 祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传 特性相同的 DNA 分子，细胞或个体。在细胞水平 指动物细胞培养. 抗原 特异

7 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低， 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。 且抗体的特异性差、灵敏度低。  阅读 P52 ：抗体的传统生产方法及缺 陷是什么？ 思 考：如何获取某种特定抗体？

8 B 淋巴细胞特点 ３．每一个 B 淋巴细胞只能产生一种抗体。 １． B 淋巴细胞受抗原刺激后，可以 产生抗体。 ２．动物体内的 B 淋巴细胞可以产生 百万种以上的抗体，每种抗体对特定 的抗原具有特异性免疫作用。

9 二、单克隆抗体 由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖（ 克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细 胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗 体 称为单克隆抗体。 1 、概念 :

10 怎样才能大量生产单克隆抗体？ 提示 1 ：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示 2 ：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 提示 3 ：有什么方法能使 B 细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？

11 大量生产单克隆抗体思路 B 淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融 合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞 特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂 交瘤细胞

12 B 淋巴细胞 注射特定 抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合） 培养液中细胞有几 种类型？融合细胞 几种 类型 ？ 骨髓瘤细胞 --- 骨髓瘤细胞 B 淋巴细胞 --- B 淋巴细胞 B 淋巴细胞 --- 骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 2 、单克隆抗体的制备过程 第 1 次筛选目的：得到杂 交瘤细胞（多种）。 第 2 次筛选目的：在杂 交瘤细胞中筛选出能产 生所需抗体的杂交瘤细 胞。 该细胞继承双亲细胞的 遗传特性，既能产生专一 抗体又能迅速大量繁殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高, 并 可大量制备

13 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 骨髓瘤细胞 B 淋巴细胞 注射特定 抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体 检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆 专一抗体，检验阳性细胞 多种杂交细胞 杂交瘤细胞有何特点？ 本过程利用的那些技术？ 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 是否注射抗原 （只考虑两两融合）培养 液中细胞有几种类型？几 种融合细胞？ 两次筛选的目的 分别是什么？ 2 、单克隆抗体制备过程 与传统制备的抗体相 比具有什么特点？

14 3. 单克隆抗体的应用： ① 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质并特异 性结合 优点： 准确、高效、简易、快速 ② 用于 运载药物：制成 “ 生物导弹 ” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 资料 ：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗 体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、 内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个 必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定 位体内 “ 病灶 ” 也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪 及心肌梗塞的诊断。

15 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个 “ 一 ” 一个诱导细胞融合的新方法 一个新细胞 一个优势 课堂小结 －－灭活的病毒 －－杂交瘤细胞 －－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势

16 形成杂种细胞 获得杂种植株 结果 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原 理 动物细胞融合植物体细胞杂交 比较项目 1 、植物、动物细胞融合的比较 课堂小结 融合前处理 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散

17 2 、单克隆抗体制备过程 B 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导 融合 B-B 细胞 B- 瘤细胞 瘤 - 瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞 （ B- 瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 产生所需 抗体的杂 交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 课堂小结

18 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 1. 右图为某同学根据杂交瘤技术的 方法，设计的生产破伤风杆菌抗 体的实验方案 制备单克隆抗体 不能，没有将抗原注入小鼠体内， 无法获得产生单一抗体的 B 淋巴 细胞。 (1). 该实验方案的目的是： ________________ (2). 该方案能达到预期效果 吗？为什么？

19 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C (3).A 是从小鼠的脾脏中取 得 __________ 该细胞能够 产生 ______ 。 (4). 图中 B 为 ________________ 过程， 常用 _________________ 作 为诱导剂，该细胞继承 ___________ 的遗传特性， 既能 __________, 又能 ___________ 。 B 淋巴细胞 抗体 细胞融合 灭活的病毒 双亲细胞 产生专一抗体 无限增殖

20 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C (5).__________ 技术 是单克隆抗体的技术支持。 动物细胞培养 （ 6 ）单克隆抗体的特点 ________________ ，并 可大量制备。 特异性强，灵敏度高

21 2 、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正 确的是（ ） A. 诱导融合的方法完全相同 B. 所用的技术手段完全相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞 D

22 ３. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③ B 淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A ． ②④ B ．①③⑤ C ． ①②③④ D ．②③ C

23 4 、用 a 表示骨髓瘤细胞，用 b 表示 B 淋巴细胞， 则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（ ） A.a 、 aa 、 ab 、 bb 、 b a 、 aa 、 ab ab B. a 、 aa 、 ab 、 bb 、 b ab 、 bb 、 b ab C. a 、 aa 、 ab 、 bb 、 b ab 产生特定抗体的 ab D. a 、 aa 、 ab 、 bb 、 b aa 能无限增殖的 aa C 《导与练》 P 动物细胞融合与单克隆抗体

24 已成功的动物细胞融合实例还有哪些？ 生物种类 成功年代 酵母菌 — 鸡 1975 年 人 — 胡萝卜 1976 年 人 — 小鼠 1978 年 要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。