120507 Total Iron Binding Capacity (TIBC) Clinical Chemistry

Introduction Iron Total iron in body : 4-5 g Distribution of iron in body Active form (70-75%) : Hemoglobin, Myoglobin, Transferrin Storage form (25-30%) : Ferritin, Hemosiderin

Introduction Pathway of iron Figure 1Main pathways of iron metabolism in mammals. Ferrireductase Divalent metal transporter (DMT1) Haem protein carrier 1 (HPC1) Haem oxygenase Haem exporter Ferroportin (Ireg-1) Hephaestin/caeruloplasmin Transferrin receptor-1 (TfR1) Diferric transferring–TfR1 complex Natural resistance macrophage protein (Nramp-1) Mitoferrin Mitochondrial haem exporter (Abcb6) Others : bacteria, lactoferrin, haemoglobin–haptoglobin, haem–haemopexin, etc. Caeruloplasmin Transferrin receptor-2 (TfR2) Disorders of iron metabolism. Part 1: molecular basis of iron homoeostasis. Manuel M. et. al., J. Clin. Pathol. 2011;64:281-286

Introduction Total iron binding capacity (TIBC) The total amount of transferrin in serum TIBC = UIBC + serum Fe Unsaturated iron binding capacity (UIBC)

Clinical significance Reference value Male : 250 - 380 ug/dl Female : 250 – 450 ug/dl Pathological conditions

Principle Iron (Fe3+) saturation Iron (Fe3+) extrication FeCl3 solution in serum TIBC saturated by Fe3+ Excess Fe3+ + MgCO3 → precipitation Iron (Fe3+) extrication Acetic acid

Principle Iron (Fe3+) reduction Formation of chelate complex Ascorbic acid Fe3+ + e- → Fe2+ Formation of chelate complex 2-(5-Nitro-2-pyridylazo)-5-(N-propyl-N-sulfopropylamino)-phenol Formation of brown chelate complex

Method 시험관 Test serum 0.2 ml 철용액 0.4 ml 혼합 흡착제 한 스푼 (대략 50 mg) 잘 혼합하고 실온에 5 min 이상 방치 후 3000 RPM 10 min 원심분리 상층액을 0.1 ml 취하여 TIBC의 검체로 아래 방법과 동일하게 실행함   serum standard Blank 시료(ml) serum 0.1 표준액 0.1 증류수 0.1 사용완충액(ml) 2.0 잘 혼합하여 37 ℃에서 5 min 가온 정색시액(ml) 0.5 잘 혼합하여 37 ℃에서 5 min 간 가온 한 후, 실온에 5 min 이상 방치하여 2 hrs 이내에 blank를 대조로 590nm에서 흡광도 측정

Absorbance of standard Method Calculation TIBC Standard Conc. : 200 ug/dl Dilution of the serum : 3* UIBC = TIBC – serum iron (SI) Saturation ratio (%) = SI / TIBC X 100 TIBC (ug/dl) = Absorbance of serum X standard Conc. X 3* Absorbance of standard

주의사항 조기 공복 시 채혈 용혈 검체는 부적합 탈철처리 된 용기 사용 음식물 섭취에 따라 serum Fe가 달라짐 TIBC에는 변화가 없음 용혈 검체는 부적합 Hemoglobin 내 heme에 결합된 Fe에 의한 간섭현상 탈철처리 된 용기 사용 HCl 이나 HNO3를 이용하여 철을 유리시켜 제거

Homework Electrophoresis 원리 Serum protein electrophoresis 임상적 의의