血液小组 白血病的免疫分型及临床应用 血小板疾病分类及研究途径 导 师： 胡翊群 汇 报 人：毛彦杰 马玲瑛 小组成员：刘维纯（组长）陈勰 颜佳毅 顾韧赜 林紫薇

白血病的免疫分型及临床应用

1. 细胞免疫标记检查及其白血病分子标记 细胞膜免疫标记 细胞质免疫标记 细胞核标记 2. 免疫标记的临床实际应用（导师小组活动 内容） 3. 白血病的免疫分型研究进展

急性白血病的单克隆分子标记  干细胞 : CD34, HLA-DR, Tdt, CD45  B 细胞 : CD19, CD20, CD22, CD79a  T 细胞 : CD2, CD3, CD5, CD7  髓系 : CD13, CD33, CD117, anti-MPO  巨核细胞 : CD41, CD61

1. 细胞免疫标记检查及其白血病分子标记 2. 免疫标记的临床实际应用（导师小组活动 内容） 免疫组化 流式细胞术 3. 白血病的免疫分型研究进展

原理：直接法或间接法定位特异性的 分子抗原 标记物： 酶类（ AP ）荧光素 (FITC PE) 免疫组化原理概述

免疫组化 实验步骤：  骨髓涂片  样本处理  抗体孵育  染色  镜检

CD3 CD10 CD68 CD20

CD20+ 正常 CD20+ 患者 CD68+ 正常 CD68+ 患者

MPO+ 患者 MPO+ 外周血片

流式细胞术

cd10 – cd13

cd16 – cd56 （ NK ）

cd7 – cd2 T

白血病的免疫分型研究进展 一、诊断  质（ 80 年代 静息的表达）  量 CD 分子表达的量多少 在某一分型中的不同量的表达对于 治疗预后的意义

二、治疗 抗 CD20 抗体 美罗华 有效缓解 B 细胞白血病 启动介导 B 细胞溶解的免疫反应 可能机制： 补体依赖的细胞毒作用（ CDC ） 抗体依赖细胞的细胞毒作用（ ADCC ） 白血病的免疫分型研究进展

数据对比  《急性白血病细胞免 疫表型分析及临床意 义》 ——99 例  《免疫分型在急性淋 巴细胞白血病中的临 床应用》 ——36 例  《急性白血病细胞形 态学与免疫学分型的 关系》 ——2001 到 2005 年 320 例 瑞金医院拥有 89 年至 今 7000 多例首发白血 病例 CD 库，陈竺陈赛 娟院士从中获取研究 数据

 从 1989 年 7 月到 2007 年 12 月底, 共有 7432 例初 发急性白血病病例的免疫标记.  其中髓系白血病 5021 例,B 淋巴 2012 例,T 淋巴 399 例.  髓系中 MPO 表达 89%,CD34 表达 35%,CD13 表达 42%,CD33 表达 38%,CD117 表达 41%.  B 系中 CD19 表达 99%,HLADR 表达 99.8%,CD20 表达 39%,CD22 表达 43%,CD10 表达 25%.  T 系中 CD3 表达 86%,CD7 表达 74%,CD5 表达 52%,CD2 表达 38% 积累的重要性！积累的重要性！

L O G O 探索 血小板 第二部分

血小板 1. 最小的血细 胞 2. 聚集成堆 3. 内含紫红色 颗粒

目录 血小板疾病分类 1 ITP 的研究 2

血小板疾病的分类  数量改变  增多 原发性血小板增多症  减少 生成减少 : 巨大血小板性血小板减少症 破坏增加 : ITP,TTP 分布异常 : 脾亢, 稀释性血小板减少

血小板疾病的分类  质量改变  遗传性 血小板无力症, 巨大血小板综合征  获得性 白血病,MDS

L O G O

 免疫性血小板减少性紫癜（ immune thrombocytopenic purpura, ITP ）  与免疫反应相关的出血性疾病  严重血小板减少和急性淤斑等出血症状  无任何症状的轻、中度血小板减少

分类 急性 ITP 慢性 ITP 发病年龄 2－6岁2－6岁 20 － 40 岁 性别差异无差异女 : 男 1:3 发病前感染史常 1-3 周前常无 起病急缓 严重出血相对较多相对较少 血小板计数 常 <20  10 9 /L 大多 30~80  10 9 /L 嗜酸 / 淋巴细胞增多 较多见罕见 骨髓巨核细胞正常或增多, 不成熟型 正常或明显增多, 产板巨核明 显减少 病程 2~6 周, 最长 6 月 数月到数年 自发缓解 80% 少, 常反复发作

流行病研究 发病率： 1/10000 占总住院患者的 0.18% 儿童患者多为急性，男女无异 成人患者多为慢性，男 : 女约 2.6~3.0:1 老年男女无异 流行病调查 患者无年龄差异患者无年龄差异

临床特点研究 1 起病急骤，出现全身性皮肤 、粘膜出血 。 2 3 ～ 4 ％并发颅内出血 3 多有自限性，少数转为慢性  急性 ITP

临床特点研究 1 30 ％－ 40 ％患者在诊断时无 任何症状 2 一般起病缓慢或隐袭，常表 现为不同程度的皮肤与粘膜 出血，出血症状常呈持续性 或反复发作  慢性 ITP

病因研究  病因未明  急性：上呼吸道感染  慢性：起病隐匿

病因研究  研究的病毒 疱疹类病毒、麻疹病毒、人类微小病毒 B19 、风疹病毒、 流行性腮腺炎病毒、 EB 病毒和肝炎病毒等  研究对象  研究方法  结果  讨论

病因研究  研究的病毒  研究对象 6O 例 ITP 住院确诊为 ITP 患儿，男 36 例，女 24 例；年龄 3 个月～ 13 岁，平均为 4.2 岁，病前 3 一 lO 天均有上呼吸 道感染史。  研究方法  结果  讨论

病因研究  研究的病毒  研究对象  研究方法 清晨空腹采集患儿静脉血 2ml 于抗凝管内，用 ELISA 法 检测患儿血清中的 CMV—IgM 、 IgG 、 EBV—IgM 、 HSV—IgM 、 RSV—IgM 、麻疹一 IgM 抗体等。  结果  讨论

病因研究  研究的病毒  研究对象  研究方法  结果 (1)6O 例患儿血清中检测出 6 种病毒抗体阳性 25 例，占 41 ． 7 ％ 。其中 CMV—IgM 、 igG 10 例， EBV—IgM 3 例，风疹一 IgM 4 例，合胞一 IgM 3 例， Adv- 一 IgM 3 例、 麻疹抗体 2 例。 (2)60 例中有 7 例属于慢性 ITP ，均未检测出病毒抗体。  讨论

机制研究  主要发病机制： 针对血小板的自身抗体与血小板结合 后导致单核一巨噬细胞系统 ( 主要是脾脏 ) 对血小板吞噬破坏增加，血小板寿命缩短。

机制研究 血小板膜 受到损伤 抗体与血小板膜 发生交叉反应 机体产生相应抗体 病毒感染 血小板被单核一巨 噬细胞系统清除

机制研究 Phase 1 Phase 2 Phase 3 病毒感染 后形成抗 原－抗体 复合物 复合物附 着于血小 板表面 血小板易 被单核一 巨噬细胞 系统吞噬 和破坏

冻干人纤白蛋白微球 1. 以白蛋白制成血小板 类似的体积和形状 2. 以 Fg( 人纤维蛋白原 ) 包裹上述白蛋白微球 3. 以这种微球模拟人体 内已激活的表达有特 殊蛋白及其与 Fg 形成 的复合物

基因研究  目的 CD 4 + CD 25 + 调节性 T 细胞 (regulation T cell ， Tr 细胞 ) 及相关基因 Foxp3 的表达.  方法  结果  结论

基因研究  目的  方法 外周血 T 细胞的分离, 采用流式细胞术检测 CD 4 + CD 25 + Tr 和 RT-PCR 测定 Foxp3 mRNA 的表 达水平。  结果  结论

基因研究  目的  方法  结果  1 ． ITP 组外周血 CD 4 + T 、 CD 25 + T 和 CD 4 + CD 25 + T 细胞的 百分率均低于对照组，差异有统计学意义 (P<0.01) 。  2 ． ITP 组外周血 T 细胞 Foxp3 mRNA 的比值为 (0.76±0.14) ，对照组外周血 T 细胞 Foxp3 mRNA 的比值 为 (0.35±0.07) ，差异有统计学意义 (P<0.05) 。  3 ． ITP 组外周血 CD 4 + CD 25 + Tr 的数量变化与 Foxp3 mRNA 水平呈正相关 (r=0.786 ， P<0.05) ，而对照组则无  结论

基因研究  目的  方法  结果  结论  转录因子 Foxp3 可特异表达于 CD 4 + CD 25 + Tr 细胞亚群上 可认为 Foxp3 是调节 CD 4 + CD 25 + Tr 细胞发育的一个重要 开关。  ITP 患儿体内 Tr 细胞的免疫抑制功能下降，细胞免疫失 调，免疫耐受机制被打破，导致 T 、 B 细胞活化，引起 患儿体内血小板的损伤。

诊断  排除性诊断 ( 一 ) 多次化验血小板减少。 ( 一 ) 多次化验血小板减少。 ( 二 ) 脾脏不大或轻度增大。 ( 二 ) 脾脏不大或轻度增大。 ( 三 ) 骨髓巨核细胞增多或正常，有成熟障碍。 ( 三 ) 骨髓巨核细胞增多或正常，有成熟障碍。 ( 四 ) 以下五项中至少一项： ( 四 ) 以下五项中至少一项： 1. 肾上腺糖皮质激素治疗有效； 2. 脾切除治疗有效； 3. PAIg 增多； 4. PAC3 增多； 5. 血小板寿命缩短。 ( 五 ) 排除继发性血小板减少症。 ( 五 ) 排除继发性血小板减少症。

诊断  鉴别诊断  血小板生成障碍性疾病  其它血小板破坏增多的疾病  血小板消耗增多的疾病

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