实验十四 紫外线灭菌  一、实验背景及目的：  灭菌是一种杀灭微生物的措施。紫外线灭菌 是物理灭菌因素之一。  1. 了解紫外线灭菌的原理；  2. 学习、掌握紫外线灭菌的方法。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌  二、基本原理：  紫外线灭菌是物理灭菌因素之一。波长为 200 ～ 300 纳米的紫外线都有杀菌的能力，以 260 纳米 的杀菌能力最强。  紫外线杀菌的机理主要是：核酸受到紫外线的 照射，形成了嘧啶二聚体，如：胸腺嘧啶二聚 体，抑制了核酸的复制，导致微生物死亡。  这是一种由紫外线造成的 DNA 的损伤。长时间 的、大剂量的紫外线照射可导致微生物的死亡。 短时间、低剂量的紫外线照射有诱变作用。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌  微生物具有对紫外线等对 DNA 造成损伤的修 复机制，即光复活。  光复活一般需在可见光下进行，所以，经紫 外线灭菌处理特别是诱变处理后的微生物细 胞应置于暗处，以避免光复活作用的影响。  紫外线虽有较强的杀菌作用，但其穿透力很 弱，一般物品，如，玻璃、纸张等可阻挡其 的穿过。紫外线一般用于物体表面的消毒处 理。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌  三、实验材料：  1. 实验菌种及培养基：大肠杆菌、金黄色葡 萄球菌；营养琼脂；  2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；酒精灯；接种环；滴 瓶；试剂瓶；镊子； φ90mm 培养皿； 15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花； 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌  四、实验步骤和方法：  1. 制备营养琼脂平板，标记，备用；  2. 制备菌悬液：将约 4ml 无菌水移至菌种斜 面试管中，用无菌接种环刮下菌体，摇匀， 制成菌悬液，备用；  3. 加样液，涂布：用无菌移液管取 0.1ml 菌悬 液，加到平板上，再用无菌玻璃涂棒将样液 涂布均匀；操作方法见图 14-1 ， 14-2.

实验十四 紫外线灭菌 版权所有 未经作者同意 请勿使用 图 14-1 无菌移液管使用方法

实验十四 紫外线灭菌 版权所有 未经作者同意 请勿使用 图 14-2 平板涂布方法

实验十四 紫外线灭菌  4. 加盖小纸片：在平板上加放一张无菌的小 纸片，以验证紫外线的穿透力；  5. 紫外线杀菌处理：拿掉培养皿盖，将平板 直接暴露在紫外灯下，紫外灯功率： 30W ， 平板至紫外灯距离： 30cm ，照射处理时间： 20 分钟；  6. 紫外线照射处理结束后，以无菌操作方法 取出小纸片（勿随意丢弃！），平板倒置于 暗处， 37 ℃，培养 24 小时；  7. 结果观察、记录： 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌  五、实验结果 、  1. 记录、说明实验结果；见图 14-3 、 14-4  2. 整理实验设备，清理实验台。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

实验十四 紫外线灭菌 版权所有 未经作者同意 请勿使用 图 14-3 紫外线杀菌处 理前，放有小纸片的 平板 图 14-4 紫外线杀菌处 理后，只有小纸片下 的存活