Clinical Biochemistry 2013 / 9 / 24 HDL – Cholesterol Clinical Biochemistry 2013 / 9 / 24

Introduction HDL-cholesterol HDL은 liver나 mucosal endothelial cell(gut)에서 생성 HDL molecule은 apolipoprotein AI, AII와 complex (LDL과 차이) HDL-cholesterol의 구조 Hydrophobic core – Ester cholesterol(15%), triglyceride(7%) Hydrophilic surface – Free cholesterol(3%), phospholipid(25%), apolipoprotein .

Introduction HDL-cholesterol function Reverse cholesterol transports Primary major role Free cholesterol ⇒ ester cholesterol (LCAT) Negative risk factor of atherosclerosis

Introduction 임상적 의의 증가하는 경우 체구가 마른 경우 Estrogen 투여 시 Hyper-alpha-lipoproteinemia 감소하는 경우 비대한 경우, 당뇨병 환자, 고지혈증 Androgen 투여 시 an-alpha-lipoproteinemia

Principles 검체 전처리 (침전법) Serum + phosphotungstic acid-Mg2+ Polyvalent anion + apolipoprotein B → complex (침전) LDL-cholesterol, VLDL-cholesterol은 침전 HDL-cholesterol이 상층에 존재 (검체로 사용) Polyanion: heparin, dextran sulfate, phosphotungstate 등 2가 양이온: Mn++, Mg++, Ca++, 등

Principles Enzymatic method (COD-POD method) Ester cholesterol Fatty acid + free cholesterol cholesterol esterase  cholesterol oxidase H2O2 + △4-cholestenon  peroxidase Phenol + 4-Aminoantipyrine Quinone complex (red) 500nm에서 흡광도 측정

Materials and methods Materials 전처리 시액 : phosphotungstic acid, MgCl2 효소 시액 : cholesterol esterase, cholesterol peroxidase, 4-aminoantipyrine 완충용 시액 : phosphate buffer, phenol 표준액 : cholesterol (50mg/dl)

60분 이내에 시약blank를 대조로 파장 500nm에서 흡광도 측정 Materials and methods Methods 검체 표준 Blank 혈청(ml) 0.2 분리시액(ml) 잘 혼합하여 10분간 실온에 방치후 3,000rpm에서 10분간 원심분리 상층액(ml) 0.1 표준액(ml) D.W.(ml) 효소시액(ml) 3.0 잘 혼합하여, 37℃에서 5분간 방치 60분 이내에 시약blank를 대조로 파장 500nm에서 흡광도 측정

Materials and methods 계산법 Standard concentration : 50mg/dl Reference values Male : 30-65 mg/dl Female : 35-80 mg/dl Sample conc. (mg/dl) = Sample Abs. Standard Abs. X 50 X2

Homework Triglyceride (TG) TG 측정법 원리 (효소법) 임상적의의