تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش PRIMER SPECIFIC PCR در شهرستان فریمان در سالهای استاد راهنما : جناب آقای دکتر سیدعلی اکبر شمسیان اساتید مشاور : جناب آقای دکتر فتی جناب آقای دکتر رضایی سرکار خانم دکتر جراحی ارائه ‏ دهنده : آتیه ابدالی

مقدمه

لیشمانیازیس آلودگی انسان به تک یاخته لیشمانیا است. لیشمانیا پاتوژن داخل سلولی است که می تواند باعث ایجاد طیف وسیعی از بیماری های انسانی از یک زخم پوستی ساده تا عفونت های احشایی شود. مقدمه روش‏کار نتایج بحث نتیجه گیری موضوع پایان نامه : تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سالهای

توسط گزش پشه خاکی از حیوانات آلوده ( جوندگان و سگ ) و یا انسان مبتلا به انسان سالم منتقل می ‌ شود.

انگل در چرخه زندگی خود به دو شکل مشاهده می شود : 1 - آماستیگوت یا اشکال بدون تاژک که در بدن میزبان مهره دار دیده می شود. 2 - پروماستیگوت یا اشکال تاژکدار که در بدن حشره ناقل و محیط های کشت دیده می شود.

عوامل ایجاد کننده لیشمانیوز پوستی : 1 - لیشمانیا ماژور عامل لیشمانیوز پوستی روستایی ( نوع مرطوب ) 2 - لیشمانیا تروپیکا عامل لیشمانیوز پوستی شهری ( نوع خشک ) 3 - لیشمانیا اتیوپیکا

پس از چند هفته تا چند ماه از گزش پشه خاکی آلوده برجستگی کوچک قرمز رنگی ظاهر شده که به تدریج بزرگ و بزرگتر شده و مرکز آن زخم می گردد. در ضایعه ناشی از لیشمانیا ماژور ترشحات پرکی روی زخم وجود داردو اطراف آن قرمز و برجسته است که به همین دلیل به آن نوع مرطوب گفته می شود. ضایعه ناشی از لیشمانیا تروپیکا معمولا بدون چرک و ترشح است لذا به آن نوع خشک می گویند.

روش های تشخیصی : مشاهده انگل در ضایعات به وسیله روش مستقیم میکروسکوپی PCR PCR-RFLP استفاده از محیط کشت آزمون پوستی لیشمن

تزریق داخل ضایعه گلوکانتیم کرایوتراپی تزریق عضلانی گلوکانتیم درمان :

استان خراسان رضوی یکی از کانون های اصلی لیشمانیوز پوستی در ایران است. برای کاهش سطح ابتلا به بیماری و پیشگیری از آن به اطلاعات کامل و جامعی از اپیدمیولوژی بیماری در مناطق مختلف استان نیاز داریم.

هدف کلی ■ تعیین گونه های عامل لیشمانیوز جلدی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سال

روش‏کار

مقدمه روش‏کار نتایج بحث نتیجه گیری موضوع پایان نامه : تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سالهای نوع مطالعه : بررسي مقطعي جامعه مورد مطالعه : بیماران مشکوک به لیشمانیوز جلدی که از سوی پزشک برای تشخیص قطعی به مراکز تشخیص طبی شهرستان فریمان مراجعه کرده بودند. منطقه مورد مطالعه : شهرستان فریمان

اهداف اختصاصی تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی در شهرستان فریمان برحسب جنس تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی در شهرستان فریمان در گستره منفی تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی در شهرستان فریمان برحسب گروههای مختلف سنی تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی در شهرستان فریمان برحسبمحل ضایعه تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی شهرستان فریمان برحسب تعداد ضایعات تعیین فراوانی گونه های عامل لیشمانیوز پوستی در شهرستان فریمان برحسب اشکال باليني زخم

معيار ورود : کسانی که توسط پزشک به دلیل مشکوک بودن به سالک به آزمایشگاه معرفی شده اند. رضايت بيمار به همکاري در مورد تکميل پرسشنامه و تهیه نمونه. معيار خروج : بیمارانی که قبل از نمونه گیری دارو مصرف کرده باشند. بیمارانی که نسبت به تکميل پرسشنامه و تهیه نمونه رضایت نداشته باشند. رنگ امیزی نامناسب لام یا از بین رفتن لام طی استخراج.

تهیه پرسش نامه نمونه برداری از حاشیه زخم ها رنگ امیزی به روش گیمسا بررسی میکروسکوپی جمع اوری نمونه ها برای استخراج DNA

استخراج DNA از نمونه گستره مستقیم با استفاده از کیت Ge Net Bio انجام شد.

Fragment length (base pair) Position on template Length (base pair) Sequence(5'-3')Name 615bp for L.major 682……665 L.major 747……730 L.tropica 18TCGCAGAACGCCCCTACCF 744bp for L.tropica 68………87 L.major 4………23 L.tropica 20AGGGGTTGGTGTAAAATAGGR پرایمرهای مورد استفاده در PCR

دستگاه ترموسایکلر جهت انجام آزمایش PCR

C°95 به مدت 5 دقیقه ( برای جدا شدن رشته های الگو ) C°94 به مدت 30 ثانیه ( برای جدا شدن رشته های ساخته شده ) C°60 به مدت 45 ثانیه ( برای اتصال پرایمرها ) C°72 به مدت 1 دقیقه ( دمای مناسب برای فعالیت DNA پلیمراز ) C°72 به مدت 7 دقیقه ( برای اطمینان از ساخت کامل تمامی قطعات ) در نهایت واکنش تا دمای C°45 سرد می شود. مراحل ب تا د 38 بار تکرار می شود. برنامه دمایی تنظیم شده برای دستگاه :

تانک الکتروفورز

دستگاه UVdoc

نتايج الكتروفورز يكي از ژل هاي PCR

نتایج

مقدمه روش‏کار نتایج بحث نتیجه گیری موضوع پایان نامه : تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سالهای مورد از نمونه های منفی با روش PCR مثبت گزارش شدند که هر دو مورد لیشمانیا ماژور بودند. حساسیت روش مستقیم نسبت به روش PCR تقریبا % 95 محاسبه شد.

توزیع فراوانی گونه های لیشمانیازیس جلدی در رده های مختلف سنی در شهرستان فریمان طی سال های

توزیع فراوانی گونه های لیشمانیازیس جلدی به تفکیک شهر و روستا در شهرستان فریمان طی سال های

توزیع فراوانی گونه های لیشمانیازیس جلدی بر حسب نوع ساختمان مسکونی در شهرستان فریمان طی سال های

توزیع فراوانی زخم های موجود در اندام های مختلف بدن مبتلایان به لیشمانیازیس جلدی در شهرستان فریمان طی سال های

توزیع فراوانی لیشمانیازیس جلدی بر اساس اشکال بالینی مختلف در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی لیشمانیازیس جلدی بر حسب تعداد زخم های موجود در بیماران در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی لیشمانیازیس جلدی بر حسب اندازه زخم های موجود روی بدن بیماران در شهرستان فریمان طی سال های

فراوانی لیشمانیازیس جلدی بر حسب سابقه مسافرت در شهرستان فریمان طی سال های

فراوانی لیشمانیازیس جلدی بر اساس مواجهه با جوندگان در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی بروز زمان زخم ها در مبتلایان به لیشمانیازیس جلدی به تفکیک فصل در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی بروز زمان زخم ها در مبتلایان به لیشمانیازیس جلدی به تفکیک ماه در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی گونه های لیشمانیازیس جلدی بر حسب شغل مبتلایان به لیشمانیازیس جلدی در شهرستان فریمان طی سال های

پراکندگی لیشمانیازیس جلدی به تفکیک روستاها در شهرستان فریمان طی سال های

بحث

در این مطالعه 54.8 % از بیماران را مردان و 45.2 % از آنها را زنان تشکیل می دهند. درصد بالای ابتلا به این بیماری در مردان نسبت به زنان می تواند به دلیل مصونیت کمتر، شغل های آنان ،پوشش لباسی کمتر، آب و هوای گرم منطقه و امکان بیشتر تماس با پشه خاکی باشد. مقدمه روش‏کار نتایج بحث نتیجه گیری موضوع پایان نامه : تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سالهای I. مهاجری و همکاران در سال 1380 II. فتی و همکاران در سال 1380 در مشهد III. شمسیان و همکاران در شهرستان درگز در سال 1394

گروه سنی 11 تا 20 سال با 28.6 % بیشترین آمار ابتلا به بیماری را داشته است. شیوع این بیماری در سنین جوانی می تواند به این دلیل باشد که این گروه سنی اکثرا شب ها در محیط و معرض گزش پشه ها می باشند. I. مهاجری و همکاران در سبزوار II. دلویی و همکاران در سال 1394 III. شمسیان و همکاران در درگز در سال 1394

بیشترین محل ضایعات مربوط به ناحیه دست و سپس ناحیه صورت بود و کمترین درصد زخمها در پا، تنه و سایر اندامها مشاهده گردید. به طورکلی ضایعات پوستی سالک معمولاً در نقاط باز بدن و جاهایی که بیشتر در معرض گزش پشه خاکی است به وجود می آیند به خصوص که پشه خاکی ها به دلیل داشتن ضمائم دهانی کوتاه قادر به خونخواری از روی لباس نیستند. I. شمسیان و همکاران در درگز II. شریفی و همکاران در شهرستان بم III. فاضلی و همکاران در میرجاوه از توابع زاهدان

در این بررسی 64.3 % از بیماران ساکن مناطق روستایی بودند. از دلایل این امر می توان به وجود اماکن قدیمی و کاهگلی در مناطق روستایی، عدم دسترسی به امکانات پزشکی و تشخیص دیر هنگام بیماری و شغل افراد در بیرون از خانه که احتمال مواجهه با مخازن را افزایش می دهد اشاره کرد. I. پقه و همکاران II. دهقان و همکاران در شهرستان لارستان

نتیجه‏گیری

عامل اصلی و غالب لیشمانیازیس جلدی در شهرستان فریمان لیشمانیا ماژور می باشد. نتایج حاصل از بررسی های مولکولی نشان می دهد که لیشمانیا تروپیکا را نیز می توان از عوامل دیگر این بیماری در شهرستان در نظر گرفت که به عنوان یک تهدید بهداشتی مطرح است. تغییرات اپیدمیولوژی بیماری در شهرستان فریمان قابل توجه بود به صورتی که در برخی روستاها مانند سفیدسنگ، رخنه و شاهان گرماب، لیشمانیا ماژور تنها عامل بیماری در بین مبتلایان مورد بررسی بود. مقدمه روش‏کار نتایج بحث نتیجه گیری موضوع پایان نامه : تعیین گونه های عامل لیشمانیوز پوستی به روش Primer Specific PCR در شهرستان فریمان در سالهای

پیشنهادات با توجه به مخازن بیماری که شامل سگ در لیشمانیا تروپیکا و جوندگان در لیشمانیا ماژور می باشد، جمع نمودن سگ های ولگرد، درمان سگ های خانگی و تله گزاری برای به دام انداختن جوندگان برای کاهش احتمال ابتلابه این بیماری و پیشگیری از آن حائز اهمیت است. مراکز بهداشت و درمان شهرستان می توانند در فصل شیوع این بیماری جزواتی در خصوص بیماری سالک و چگونگی ابتلا به آن و راه حل هایی برای پیشگیری از آن تهیه کرده و در اختیار مردم قرار دهند تا سطح آگاهی افراد در این مورد افزایش یابد. با توجه به عدم دسترسی به امکانات پزشکی در مناطق روستایی، مراکز بهداشت و درمان شهرستان می تواند افراد آموزش دیده ای را به منظور سرکشی به صورت دوره ای به این مناطق بفرستد و تا در صورت وجود بیماری آن را در مراحل اولیه تشخیص داده و اقدامات درمانی سریع تر شروع شود. علی رقم اینکه PCR روشی پرهزینه است، اما پیشنهاد می گردد در مواردی که منفی مشکوک گزارش می شوند به عنوان تشخیص قطعی بیماری از این روش استفاده گردد. در زمان های غروب آفتاب و در شب لباس های پوشیده و آستین بلند پوشیده شود، از پماد های دور کننده حشرات استفاده شود و از رفت و آمد به محل های آلوده اجتناب شود.

با سپاس از توجه شما