قياس متوسط الجرعة القاتلة أو التركيز القاتل THE MEASUREMENT OF LD50 or LC50

مـقدمة لمعرفة مدى فاعلية عقار أو دواء معين أو المقارنة بين فعالية عدة عقاقير يجرى اختبار تقييم لهذه العقاقير على نفس النوع من الحيوانات وبتركيزات مختلفة ثم المقارنة بينهما على أساس قيمة الجرعة اللازمة لقتل 50 ٪ من الآفة. إن الغرض من استخدام قياس الجرعة القاتلة هو تحقيق الهدف في مكافحة (الآفة المستهدفة) بأقل قدر ممكن من العقار (المبيد) المستخدم.

تعـريفات الجرعة القاتلة : Lethal Dose LD50  متوسط الجرعة القاتلة للمادة و التي تؤدي إلي وفاة 50 %من حيوانات التجارب ، وتقدر الجرعة القاتلة بعدد " ملغم / كجم" من وزن الجسم المتسم .  التركيز القاتل : Lethal Concentration LC50  متوسط التركيز القاتل للمادة السامة التي تدخل الجسم عن طريق الجهاز التنفسي وتؤدي في وقت معين إلي وفاة 50% من حيوانات التجارب، وتقدر بـ mg/liter مع تحديد الوقت!

الهـدف من التجربة: التعرف على طريقة Karbar في قياس متوسط الجرعة القاتلة LD50 أو التركيز القاتل LC50. التـعرف على كيفية تحديد المجموعات الحيوانية لتنفيذ التجربة. التسلسل في تنفيذ التجربة للوصول إلى تحديد متوسط الجرعة القاتلة أو التركيز القاتل.

Experimental methods There are many methods in determining LD50 such as Bliss, sequential method, grouping method ect. The most classic and precise method is Bliss method which is used in this experiment. But it needs to use computer and corresponding software. It is more complicated, so we often use Karbar's method.

ما هي الظروف الخاصة في تنفيذ التجربة؟ يجب زيادة الجرعة dose تدريجيا وفق تسلسل معين. يجب أن يكون عـدد أفراد كل مجموعة متساوي في العدد والوزن (±5غم للفئران) ويزيد عن عـدد المجموعات المختارة. يجب أن تكون إستجابة الحيوان للعقار منطقية ووفقا للتوزيع الطبيعي (إحصائيا). وعند اجراء الاختبارات المعملية لسمية العقار: يجب تثبيت جميع العوامل الخاصة بالحيوانات (العمر، الوزن ، الجنس ، …. ألخ ) والعوامل الخاصة بالبيئة (حرارة ، رطوبة، ضوء).

ما هي الفائدة من تحديد قيمة الجرعة القاتلة؟ التقدير الكمي للعقاقير أو متبقياتها بمقارنتة هذه القيم مع قيم ناتجة من استخدام عقار نقي بتركيزات قياسية. تتبع التغيرات التي تطرأ على استجابة حيوان التجارب للعـقار (استجابة آفة معينة للمبيد). دراسة ميكانيكية (عمل) التأثير السام للعقار على وظائف الأعضاء الحيوية لحيوان التجارب. دراسة الأعراض السُّمية (toxicology) الناتجة عن كل عقار أو مبيد.

Experimental animals

Experimental drugs أي مبيد حشري مناسب للحشرات المستهدفة

Experimental drugs العـقار المستخدم: Thymoquinone, an extract of seed oil: Nigella sativa (زيت حبة البركة) http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2352241015000286

الأدوات اللازمة لتجربة الفئران أقفاص للفئران بعـدد المجموعات المطلوب عملها أبر طبية للحقن بحجم 1 مل ، حجم الأبرة 26 gauge ميزان كهربائي آلة حاسبة

Experimental procedure

كيفية إعـطـاء الجرعة dose للفأر؟ كما هو موضح في الصور التالية : يمسك ذيل الفأر بيد. يمسك من رقبته باليد الآخرى. يقلب ويثبت الذيل بينفس اليد الماسكة بالرقبة من الخلف. يحقن الفأر في أسفل بطنه ، وتسمى: (intraperitoneal injection)

امسك الفأر من خلف الرقبة ، ميّل الرأس إلى الأسفل بدرجة 30- 45˚ امسك الفأر من خلف الرقبة ، ميّل الرأس إلى الأسفل بدرجة 30- 45˚. حتى تتحرك الأحشاء بعيدا عن مكان الحقن. ضع الحقنة موازية إلى خط منتصف الجسم linea alba. إحقن الأبرة في أحد الجانبين السفليين، تفحص مكان الحقن بسحب الأبرة قليلا حتى ترى شيئا في الإبرة.

المراقبة بعـد الحقن توضع الفئران بعد الحقن في مجموعاتها المقسمة. يتم مراقبتها وتسجيل العوارض المحتملة عليها كل: 2 ، 4 ، 6 ، 24 ساعة. بعد ال 24 ساعة يتم إحصاء وعدد الفئران الميتة في كل مجموعة وتدوينها في الجدول التالي:

Corrected % formula for 0 and 100% mortality. For 0% dead = 100(0.25/n) For 100% dead = 100(n-0.25/n)

يتم تحويل النسبة المئوية للوفيات إلى قيم إحتمالية وذلك من خلال استخدام الجدول التالي

يتم رسم منحنى خطي لقيم log تركيز العـقار والنسب الاحتمالية للوفيات بيانيا ًومن ثم التعرف على LD50 Anti-log

Calculation of Standard Error (SE) for LD50 95％ confidence level… Approx. SE. of LD50 = (LogLD84 – LogLD16)/

الأسـئلة ... ما هي أهم العـوارض التي ظهرت على الفئران بعد الحقن خلال ال 24 ساعة؟ ما المقصود بـ 95% نسبة الثقة؟ 95％ confidence level…

أخـــيرا ً... يرجى الاطلاع على البحث التالي لفهم منهجية الدراسة وكيفية تطبيقها وطريقة الحصول على النتائج وكيفية تفسيرها من خلال بند المناقشة.... http://www.toxicologyinternational.com/article.asp?issn=0971-6580;year=2013;volume=20;issue=1;spage=1;epage=5;aulast=Raj

أخـــيرا ً... يرجى الاطلاع على الروابط التالية للتعرف على مايلي: 1- طريقة تثبيت الفأر قبل الحقن: https://www.youtube.com/watch?v=iXAE5YQyCes&feature=iv&src_vid=Yi13OAshhSk&annotation_id=annotation_2991325689 2- طريقة حقن الجرعة بالفأر (أسفل البطن): https://www.youtube.com/watch?v=Yi13OAshhSk https://www.youtube.com/watch?v=6CPJamW1Ah8

أخـــيرا ً... 3- طريقة حقن الجرعة بالفأر (تحت الجلد): https://www.youtube.com/watch?v=f7MJUTiAqs0 4- الأماكن المحددة من جسم فئران التجارب لحقنها: http://www.theodora.com/rodent_laboratory/injections.html 5- كيفية التعامل مع فئران التجارب: https://www.mcgill.ca/cmarc/files/cmarc/handout_mouse_module_2_sept-09_0.pdf

مثال افتراضي للتطبيق :