Дори воситаларининг сифатини назорат килиш ва стандартлашда метрологик ишлашнинг ахамияти

Режа: 1. Метрология тушунчаси 2. Валидация 1. Метрология тушунчаси 2. Валидация 3. Аналитик жараёнларнинг куллаш критерийлари (курсаткичлари) 4. Дори воситалари тахлилида метрологик ишлаш

Метрология (юн. metron – улчов ва logos – таълимот) – улчовлар, уларнинг бир хиллигини таъминлаш усуллари ва воситалар, хамда талаб этилган аникликка эришиш йуллари хакидаги фан. Физика булими.

Метрология муаммолари: Улчашларнинг умумий назарияси Катталиклар бирликларини ва уларнинг тизимларини яратиш Улчаш усуллари ва воситалари Улчашлар аниклиги (улчашлар ноаниклиги назарияси, улчашлар хатолиги назарияси)ни ва бахолаш усуллари ва ифодалаш йуллари Улчашлар бир хиллигини таъминлаш Эталонларни яратиш Улчаш воситалари ва улчаш услубларининг тавсифларини аниклаш ва бирликлар улчамларини эталонлардан колган барча улчаш воситаларига утказиш усуллари

Инсон фаолияти давомида, улчовлар натижасида олинадиган микдорий бахолашсиз бирон бир соха йук. Инсон дунёга келади, хали исми йук, бирок бизга унинг буйи, огирлиги, тана харорати унинг хаётининг биринчи дакикаларидаёк маълум булади. У чизгич (линейка), тороз, термометр билан тукнаш келишига тугри келади. Хар куни эрталаб, уйдан чика туриб, кучадаги хаво хароратини улчаймиз, зарур булса, шляпа, телпак, пальто ёки пустин кийамиз. Кун тартибимизни соат билан режалаштирамиз, ва дам-бадам соатга караб бу режани амалга оширишга харакат киламиз. Кулмак олдида туриб уни сакраб утиш ёки айланиб утишни уйлаб, кулмакнинг узунлигини ва узимизнинг имкониятларимизни чамалаб курамиз. Мана шу эса, улчов, улчанаётган катталик (кулмак узунлиги) ва бу катталик «бирлиги» орасидаги нисбатни топишдир. Метрология – хозирги давримизнинг зарурати хисобланади, ва физик дунёкараш ва мехнаткашларнинг яхши турмуш тарзи унга боглик.

Валидация (Validation) (лот. validus – тугри– танлаб олинган жараён, усул ёки тизим аввалдан белгиланган меъёрий хужжатга мос келиши хакида юкори даражадаги ишончли маълумотлар олишни таъминлайдиган хужжатлаштирилган текширув жараёни.

Аттестация (лот. аttestor – гувохнома) – бирон-бир меъёрий хужжатни ишончлилигини давлат органи томонидан текшириш жараёни

Валидация ёки аттестация узлуксиз жараён; Корхона, муассаса, лаборатория… уз- узини усул, жараён, тизим ва бошкаларни тугрилигини текширади. Аттестация даврий жараён; Корхона, муассаса, лаборатория… га боглик булмаган мутасадди шахслар текширади.

Валидация Хужжатлаштирилмаган – демак килинмаган. Валидация хатоликлардан кафолатламайди, лекин натижаларнинг тугрилигига юкори даражада ишончни таъминлайди. Валидация – бир мротабалик иш эмас. Иш (асбоб)нинг тугрилигини аниклаш –асбоб-ускунанинг эксплуатация муддати тугагунга кадар хар кунлик иш Валидация меъёрий хужжатдан, яъни ушбу махсулотнинг яроклилиги хакида карор кабул килиш учун критерийлар танлаб олишдан бошланади.

Валидация жараёнларини олиб боришда соглом маъно Валидация яхши ташкил этилган, тугри хужжатлаштирилган соглом маънодан бошка нарса эмас.

Кимевий тахлил этаплари намуналар олиниши ва гомогенизацияси Намуналарни сақлаш намуналар олиниши ва гомогенизацияси Намуналарни етказиш Тахлил жараёни Намунани тайерлаш Натижани чиқариш ва сақлаш 0.85 ± 0.03 у.е. Х витамини миқдори

Аналитик услубнинг валидациясигача нима килиниши керак? Дастлаб тахлил услуби танлаб олинган DQ Design Qualification Курилма мавжуд аналитик масалага мувофик танланган. IQ Installation Qualification Курилма урнатилиши тугрилиги тешкирилган OQ Operation Qualification Асбоб талаб этилган спецификациясига мувофик ишлаётганлиги текширилган Мос келадиган асбоб танлаб олинган ва у тугри ишлаяпти PQ Performance Qualification Услубни валидация килиш жараёнида асбобнинг ишлаш кобилияти доимо текширилади Стандарт намуналарнинг квалификацияси утказилган Шак-шубхасиз лаборатория персонали квалификациси!

Улчовларни бажариш усуллари валидацияси Услуб валидацияси - Унинг ушбу хусусий тахлил тури учун кулланиши мумкинлигини хужжатлаштирилган тасдикланиши учун кулланиладиган жараён. GLP тизимининг ажралмас кисми. Масала талаби Усул тавсифи Услуб валидацияси – аналитик услубнинг тавсифини узининг кулланилишига мос келишини лаборатория шароитида текшириш жараёни. Украина Фармакопеяси Масала Усул яроксиз ярокли Аналитик услубнинг валидацияси асосий концепцияси унинг тавсифи (характеристикаси) аналитик масаланинг талабларига мувофик келишини хал килиш. J.K.Taylor. Anal.Chem., 55, 600A-608A (1983)

Услублар валидацияси боскичлари (1) 1) Валидация килиш жараёни тузилади (валидация буйича «Мастер-План») ва валидация баённомасиишлаб чикилади Жавобгарлар белгиланади 2) Услубнинг максади аникланади, Тахлил усули тури ва услубнинг узи танланади. 3) Услубнинг тавсиялари (характеристикаси) ва унинг яроклилиги мезонлари (критерийлари) аникланади 4) Услубнинг валидацияси буйича тадкикотлар кетма-кетлиги аникланади

Услублар валидацияси боскичлари (2) 5) Курилманинг мухим (асосий) характеристикаси белгиланади 6) материаллар, стандартлар, эритмалар, реагентлар ва бошкалар квалификацияланади. 7) Услубнинг валидацияси буйича дастлабки тадкикотлар олиб бориладии 8)Зарур булганда усул курсаткичлари(параметрлари) ва яроклилик критерийлари кайта куриб чикилади. 9) Валидацион текширувларнинг тулик дастури амалга оширилади

Услублар валидацияси боскичлари (3) 10) Доимий тахлиллар олиб бориш учун СОП ишлаб чикилади - Чуккиларнинг ажралиш даражаси - Ноль чизик шовкини даражаси - Эритувчи сотувчиларининг узгариши 11) Кайта валидация олиб бориш зарур булган критерийлар аникланади 12) Доимий тахлиллар олиб боришда хамма тизимни ишлаш кобилиятини текшириш тури ва оралиги аникланади 13) Услуб валидацияси буйича тадкикотлар натижалари валидация буйича хисоботда ёритилади

3) Услублар тавсифи (характеристикаси) ва унинг яроклилиги критерийлари (мезонлари) Саволларга жавоблар: • Кандай моддалар тахлил килинади? • Тахлил килинаётган моддалар кандай концентрацияларда булади? •Тахлил килинаётган моддалар кандай намуналарда (матрицаларда) булади? • Халакит киладиган моддалар борми, агар булса, у холда уларни аниклаш керакми? • Тахлил килинаётган моддалар микдорини белгиловчи расмий хужжатлар борми? • Кандай тахлил тури, сифат ёки микдор? • Кндай аниклаш ва микдорий аниклаш чегараси зарур? • Тахлил килинаётган моддаларнинг концентрациялар диапазони кандай? • Кандай аниклаш хатолиги етарли хисобланади? • Усул канчалик чидамли (robust) булиши зарур? • Кандай турдаги курилма ишлатилиши зарур? Бу универсаль курилма ёки махсус «анализатор»? • Услуб битта ёки бир нечта лабораториларда ишлатиладими? • лабораторияда мутахассисларнинг тайёргарлик даражаси кандай булиши керак?

Валидацион тавсифлар Микдорий аниклаш Аралашмалар Чинлик меъёр микдор + - Тугрилик (Accuracy) Аниклик (Precision) Хусусийлик (Specificity) Аниклаш чегараси (Detection Limit) Микдорий аниклаш чегараси (Quantitation Limit) Чизиклилик (Linearity) Range Ишончлилик (Robustness)

Валидация тавсифларининг мухимлик даражаси №13 Валидация тавсифларининг мухимлик даражаси № Аналитик тавсиф Чинлигини аниқлаш Тозалигини аниқлаш Миқдорини аниқлаш 1 Тўғрилиги + +++ 2 Қайтарувчанлиги 3 Танланганлиги 4 Идентификациялаш чегараси 5 Миқдорини аниқлаш чегараси - 6 Чизиқли боғланганлиги ++ 7 Аналитик сохаси 8 Лабораториялараро қайтарувчанлиги +++ - - Эслатма: - мухим эмас

Валидацион параметрлар. Танланганлиги (Селективность). Хусусийлик - специфичность (битта бирикма), Танланганлиги - селективность (бир нечта бирикмалар) Селектив детекторлар:MSD, DAD. бензоат ва сорбат Кислоталар аралашмаси чуккиси тозалигини аниклаш ва чукки боши, уртаси ва охирида УБ-спектрлар

Жуда якин ёт аралашмаларни ажратиш (Separation of very closely related analytes) Хусусийлик

Хусусийлик (specificity) Ёт аралашмалар эритмасининг текширилаётган эритма билан устма-уст хроматограммалари Source: Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification, Edited by Chung Chow Chan, Herman Lam, Y.C. Lee, and Xue-Ming Zhang ISBN 0-471-25953-5 Wiley & Sons

Валидацион параметрлар. Хусусийлик (специфичность). Текширилиётган модданинг намунада мавжуд булиши мумкин булган бошка компонентлар орасида аниклаш кобилияти.

Тугрилик (аccuracy) ва аниклик (precision) Тугри ва аник Тугри ва ноаник Нотугри ва аник Нотугри ва ноаник

Валидацион параметрлар.. Аниклик (точность). аниклик (точность): - ухшашлик (сходимость) - лаборатория ичи ухшашлиги (внутрилабораторная точность) - кайтарилувчанлик (воспроизводимость) . . концентрация 100 % 10 % 1 % 0,1 % 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb 1,3 2,8 2,7 3,7 5,3 7,3 11 15 21 30 ОСКО % Концентрация канча кам булса, аниклик шунча кам булади. Отишда – ораликдан мулжалгача худди шундай богликлик. Жадвалда текширилаётган концентрациядан келиб чиккан холда услублар аниклигининг минимал бахоланиши келтирилган. ppb ва хатто ppm концентрациялар билан ишлаб, улчовлар хатолигини масалан, 1-2% деб келтириш гунох. Бу юзлаб турли –туман услубларнинг натижалари. AOAC Peer-Verified Methods Program, Manual on Policies and procedures, Arlington, Va., USA (November 1993).

Аниклик (точность, precision). Аналитик услубнинг аниклиги ушбу услуб билан турли пробаларда айнан бир хил намунада бажарилган бир катор улчовлар учун якинлик даражасини (ёки таркалганлик даражасини) билдиради. Аналитик услубнинг аниклиги одатда бир катор улчовлар учун дисперсия, стандарт силжий ёки нисбий стандарт силжиш билан характерланади.

Аниклик (точность, precision). Ухшашлик (сходимость, repeatability) – услубнинг айнан бир хил шароитда (хусусан, айнан битта аналитик ёки аналитиклар гурухи томонидан)кичик вакт оралигида бажарилганда унинг аниклигини билдиради. Лаборатория ичи аниклиги (внутрилабораторная прецизионность, intermediate precision) – лаборатория ичидаги турли вариацияларнинг: турли кунлар, турли аналитиклар, турли асбоб-ускуналар ва бошкаларнинг таъсирини билдиради. Кайтарилувчанлик (воспроизводимость, reproducibility) – лабораториялараро экспериментларда (одатда, усулни стандартлаш учун кулланиладиган кушма тадкикотларда) аникликни билдиради.

Лаборатория ичи аниклиги (Intermediate Precision) Лабораториядаги аниклашнинг узгариши Турли кунлар, турли аналитиклар, турли асбоб-ускуналар ва бошкалар. Peak area analyst 3 Peak area analyst 2 Peak area analyst 1 Injection 177965 175656 173865 1 178556 175878 174926 2 177342 176004 172933 3 178011 176344 175011 4 179466 175332 179557 5 179688 174959 176425 6 178504 175695 175453 Mean 918 495 2329 SD 0.51% 0.28% 1.32% RSD Mean ± 3 SD: (177252  100%) Analyst 1: 98.96% ± 3 x 1.32% Analyst 2: 99.12% ± 3 x 0.28 Analyst 3: 100.70% ± 3 x 0.51 Average of 3 analysts ± 3SD: 95% - 102.23%

Ухшашлик (Repeatability) Тайёр дори воситаси (таблетка)да АФИни аниклаш: Таблеткадан тайёрланган гомоген текширилаётган эритмани олти марта текшириш (nominal value of API 150 mg) Assay Peak area Injection 147.10 mg/98.06% 173865 1 148.00 mg/98.66% 174926 2 146.32 mg/97.54% 172933 3 148.08 mg/98.72% 175011 4 151.95 mg/101.30% 179557 5 149.28 mg/99.52% 176425 6 148.45 mg/98.96% 175453 Mean 1.98 mg/1.32% 2329 SD 1.32% RSD Mean ± 3 SD = Confidence interval of 99.73% 98.96 ± 3x1.32% = 95% - 102.92%

Валидацион параметрлар. Тугрилик (правильность). №16 Валидацион параметрлар. Тугрилик (правильность). . Услубнинг тугрилигини (систематик хатоликларнинг йуклигини) куйидагича аниклаш мумкин: тугрилик ва кайтиш Умумий кабул килинган «стандарт» усуллар ёрдамида олинган натижалар билан киёслаб концентрация 100 % 10 % 1 % 0,1 % 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb 98-102 97-103 95-105 90-107 80-110 60-115 40-120 возврат % (коэфф. извлечения) Стандарт намуналардаги модда концентрациясини улчаб (лабораториялараро раундларда катнашиш) Проба тайёрлашнинг оддий холларида ички ёки ташки стандартлар куллаб (фармацевтик препаратлар) Кушимчалар усулини куллаб ва кайтиш %ини аниклаб Доимо услубда кулланилаётган бирикмалар баркарорлиги хакида маълумотга эга булиш керак. Реагент ёки стандарт намунанинг парчаланиши нотугри натижаларнинг кенг таркалган манбаи. AOAC Peer-Verified Methods Program, Manual on Policies and procedures, Arlington, Va., USA (November 1993).

Тугрилик (правильность, accuracy, trueness). Маълум булган хакикий курсаткич ёки маълумотномалардаги (справочая) катталик ва ушбу услуб оркали олинган курсаткич орасидаги мувофиклик даражасини белгилайди.

Чизиклилик – линейность Валидацион параметрлар. Чизиклилик - Линейность, куллаш чегараси - диапазон применения. Чизиклилик – линейность «Услубнинг. танланган ораликда модда концентрациясига тугри пропорционал (ёки бошка оддий) богликликда буладиган улчовлар натижаларини намоён килиш хусусияти». Чизиклилик кутилган 100% курсаткичдан паст ва баланд диапазонда аникланиши керак. Турли муаллифларда турли диапазонлар. Аралашмаларни текширишда диапазон 0 -150% ни ташкил килади. диапазон применения «услубнинг куллаш оралиги – намунадаги аникланаётган модданинг максимал ва минимал концентрацияси орасидаги интервал. Бу интервалда ушбу услуб талаб этилган аниклик, тугрилик ва чигиклиликка эга эканлиги курсатилган». Микдорий улчовлар учун услубнинг куллаш оралиги максимал меъёрлаш оралигидан тахминан 10% га куп булиши лозим. Яъни микдорий тахлилда меъёрлаштириш 100% номинал курсаткичдан +/-10% булса, куллаш оралиги +/-20% яъни 80дан 120%гача булиши лозим». «аналитик услубни юкори самарадор суюклик хроматографияси усулинини куллаб валидация килиш» Куликов А.Ю., Верушкин А.Г. Научно-экспертный фармакопейный центр. Харьков.

Аниклаш чегараси (Предел обнаружения, Limit of Detection) ва Микдорий аниклаш чегараси (Предел количественного определения, Limit of quantitation) LOD - Текширилаётган модданинг аниклаш мумкин булган энг кичик (минимал) микдори. LOQ - Текширилаётган модданинг микдорий аниклаш мумкин булган энг кичик (минимал) микдори.

Валидацион параметрлар. LOQ, LOD.

LOQ ва ёт аралашмалар Аниклаш API test concentration (normalised) 0.1 mg/ml (100%) Impurity spiking concentrations 0.001 mg/ml (1%) – specification limit 0.0001 mg/ml (0.1%) – limit of quantitation (minimum requirement)

Валидацион параметрлар. Баркарорлик (устойчивость). №19 Валидацион параметрлар. Баркарорлик (устойчивость). (продолжение) равшанлиги контрастлиги баландлиги Янги услуб янги телевизор каби… Температура оралиги Чукки симметрияси Буфер концентрацияси Намуна тортмаси min mах баркарорлик (устойчивость, robustness) Ёзилган услубни биринчи маротаба укий туриб, одатда тавсия этилаётган параметрларни «созлаш» канчалик «четга» якинлиги тушунарсиз колмокда. Услублар баркарорлигини урганиш уни ушбу масалани хал килишга яроклилигини бахолаш ва у ёки бошка параметрларни калтислигини (калтис нукталарини) аниклашни имкониятини хам беради. Масалан, колонкани bikfnbi жараёнида аналит чуккиси симметриясининг бироз узгариши, услуб аниклигини рухсат этилган ораликдан хам пасайиб кетишига олиб келиши мумкин. Ёки буфер концентрациясининг, унинг температурасининг бироз epufhbib суюклик хроматографида чукма тушишига сабаб булади. Умуман олганда хар кандай параметр, тасдикланган аттестацияланган, «стандартланган» услублар киёслашда сезиларсиз туюладиган узгаришларда услублар бирдан «ишламай» колганжа хавфли ораликка якин булиб колиши мумкин.

Валидацион параметрлар. Кайтарилувчанлик (Живучесть). Валидацион параметрлар. Кайтарилувчанлик (Живучесть). Кайтарилувчанлик (ruggedness) Услубнинг рус тилидаги «живучесть» ёки «выносливость» курсаткичлари умум кабул килинган хисобланмайди. Бундан ташкари ICH инглиз тилидаги “ruggedness” ибораси урнига «воспроизводимость» иборасини ишлатади. USP услубнинг «хаётчанлигини» турли лабораторияларда, турли аналитиклар, турли курилмалар, материаллар, стандарт намуналар ва бошкаларни куллаб олинган натижаларнинг кайтарилувчанлик даражасини билдиради. Шундай килиб, услубнинг «хаётчанлиги» унинг кайтарилувчанлиги улчами сифатида юритилади. Лабораториялараро текширувларда аникланади.

Валидацияланган услубнинг хар кунлик амалиётга тадбик этиш. Услуб битта лабораториянинг хар кунлик ишида узлаштирилади Услуб текширув лабораториясида валидацияланган Валидация хакидаги хисобот сифатни назорат килиш лабораториясига берилади Валидацияланган услубнинг кундалик амалиётга тадбик этиш - мухим ва тугри кадам. Сифат назорати лабораторияси ходимлари томонидан услуб узлаштириш жараёнида унинг яратувчилари билан доимий алока зарур. Услуб кулловчилари унинг калтис параметрлари хакида аник маълумотга эга булишлари мухим. Агар услуб бир нечта лабораторияларда ишлатиладиган булса, тажрибани купайтириш ва кийинчиликлар юзага келишидан олдин уни битта лабораторияда яхшилаб кили куриш максадга мувофик. Узлаштириш тажрибаси бир неча лабораторияларга купайтирилади

Улчов идишлари, торозлар ва асбоб-ускуналарга рухсат этилган хатоликларга талаблар Торозлар Тортиш ноаниклиги 0,2 мг Улчов колбалари Колба хажми, мл Ноаниклик, % 10 0,5 25 0,23 50 0,17 100 0,12 250 0,08 500 0,07 0,05 Пипеткалар Пипетка хажми, мл Ноаниклик мл % (хамма хажм учун) 0,005 1 0,006 0,6 2 0,01 5 0,03 0,1 0,4

№ хроматограммалар учун чуккилар юзаси (S ва Sst) Тайёр дори препарати ЮССХ (ВЭЖХ) тахлили ноаникликларини хисоблаш 0,50 г уртача огирликдаги таблетка 0,05 г А модда саклайди. ЮССХ усули билан микдорий тахлил килинганда кукун холига келтирилган таблеткадан m = 0,5052 г тортма олиб, 50 мл сигимли улчов колбасига солинди ва белгисигача эритувчи солинди. Параллел равишда киёсий эритма тайёрланди: 0,0508 г стандарт намуна 50 мл сигимли улчов колбасига солинди ва эритувчи билан белгисигача суюлтирилди. Текширилувчи ва киёсий эритма навбатма-навбат хроматография килинди, 5 тадан хроматограмма олинди. Куйида олинган чуккилар юзаси келтирилган: № хроматограммалар учун чуккилар юзаси (S ва Sst) 1 2 3 4 5 Текширилувчи эритма 13957605 13806804 13924245 13715195 14059478 Киёсий эритма 14240777 14102192 14316388 14205217 14409585 Охирги аналитик жараён Охирги аналитик жараёнда А модданинг битта таблеткадаги микдорини ва текширилаётган ва киёсий эритма чуккилариюзасининг нисбий стандарт силжишини хисобланади. 1. Чуккилар юзасининг уртача курсаткичи: Текширилаётган эритма: (13957605 + 13806804 + 13924245 + 13715195 + 14059478)/5 = 13892665. Киёсий эритма: (14240777 + 14102192 + 14316388 + 14205217 + 14409585)/5 = 14254832.

2. Текширилаётган А модданинг таблетканинг уртача огирлигига нисбатан микдори, граммларда: 3. Чуккилар юзаси нисбий стандарт силжиши Текширилаётган эритма: Киёсий эритма учун худди шундай:

RSDst = 0,81%. Проба тайёрлашнинг умумий ноаниклиги SP,r Юкорида келтирилган ноаникликлар куйидагилардан ошмаслиги керак: 50 мл сигимли улчов колбаси – 0,17% дан кам; Аналитик торозларда улчаш ноаниклиги – 0,2 мг (0,0002 г) дан кам: - 100 * 0,0002/0,5052 = 0,04% текширилаётган намуна учун - 100 * 0,0002/0,0508 = 0,39% стандарт намуна учун Бу ноаникликларни 95% эхтимолликда ишонч оралиги деб хисоблаш мумкин. Проба тайёрлашнинг умумий ноаниклиги куйидаги формула билан хисобланади: Тахлилнинг умумий ноаниклигини хисоблаш Текширилаётган ва киёсий эритма учун охирги аналитик жараённинг ноаниклигини FAO,r хисоблаймиз: Охирги аналитик жараённинг умумий ноаниклиги : Тахлилнинг умумий ноаниклигини As,r аниклаймиз

Weighed Ciprofloxacin (mg/Tb) 3.2.P..5.3.4. Validation of Dissolution test method 3.2.P.5.3.4.I. Accuracy 80% of the labeled amount of ciprofloxacin was placed in the dissolution apparatus and proceeded the dissolution test method given under 3.2.P.5.2.7 item. Same study is performed 100 % and 120 % of the labeled amount of ciprofloxacin and calculated recoveries. Sample number % Weighed Ciprofloxacin (mg/Tb) Measured: Ciprofloxacin (mg/Tb) Recovery 1 80 601.39 600.29 99.85 2 602.41 597.81 99.24 3 602.04 602.76 100.2 4 599.69 594.08 99.06 5 604.22 604.00 99.96 6 601.45 99.36 7 100 751.18 750.05 8 752.08 752.52 100.06 9 754.65 747.57 99.70 10 752.69 755.00 100.30 11 753.76 756.24 100.33 12 750.89 99.55 13 120 902.64 899.81 99.69 14 901.78 887.43 98.41 15 903.02 889.91 98.54 16 901.74 903.52 100.20 17 903.81 901.04 18 903.99 892.39 98.78

Mean recovery : 99.59 % Standard deviation : 0.59 Relative standard deviation : 0.59 % Confidence interval (p= 0.05) t(17) :2.11 x + [S.Sx t(17)/ 8] : 99.59% ±0.30 As calculated RSD is < 2 %, the method is suitable for determine assay in confidence interval.

Dissolved Ciprofloxacin 3.2.P.5.3.4.2. Precision 3.2.P.5.3.4.2.I. Repeatability The dissolution test method was proceeded with six test solutions prepared from the same dissolution vessel. Sample Number Dissolved Ciprofloxacin 1 100.6 2 98.7 3 101.1 4 100.1 5 6 100.7 Mean : 100.40% Standard deviation : 0.92 Relative standard deviation : 0.92 % Confidence interval (p= 0.05) t(5) :2.57 x±[S.S. x t(5)/ V6] : 100.49% ±0.97 As calculated RSD is < 2 %, the method is suitable for determine assay in confidence interval

% Dissolved Ciprofloxacin 3.2.P.5.3.4.2.2. Reproducibility: The dissolution test method was proceeded with six test solutions prepared from the different six dissolution vessel. Sample Number % Dissolved Ciprofloxacin 1 101.6 2 100.6 3 100.1 4 98.1 5 100.9 6 100.2 Mean : 100.27% Standard deviation : 1.18 Relative standard deviation : 1.18% Confidence interval (p= 0.05) t (5) : 2.57 x±[S.S. x t(5)/ V6] : 100.27% ±1.24 As calculated RSD is < 2 %, the method is suitable for determine assay in confidence interval.

% Dissolved Ciprofloxacin 3.2.P.5.3.4.3. Linearity: The absorbance values of the test solutions prepared according to Dissolution test method with 20 % - 120 % concentration of the test solution were measured by UV-Spectrophotomety. % Concentrations % Dissolved Ciprofloxacin Absorbance (AU) 20 1.02 0.123 40 2.04 0.247 60 3.07 0.370 80 4.09 0.494 100 5.11 0.617 120 6.13 0.739 Linear regression: Y= 0.00050 + 0.0120436X Correlation coefficient: r2: 0.9999

3.2.P.5.3.4.4. Specificity: The specificity of the dissolution test method is the ability of the discrimination of the drug substance in the presence of the matrix components (placebo) and in dissolution medium using in the method. The spectrums obtained from the test solution showed that there was no interference between the peak of Ciprofloxacin hydrochloride and the other peaks.