Metapneumovirus - greiningaraðferðir Berglind Aðalsteinsdóttir 18. apríl 2005

Metapneumovirus Fyrst uppgötvaður í Hollandi 2001 hefur verið til í áratugi! Tilheyrir Paramyxoviridae er náskyld RS veirunni 7-10% af bráðum öndunarfærasýkingum í ungum börnum. 3. algengasta orsök bronchiolitis á eftir RS og rhinovirus Hefur fundist í frystum sýnum Ástæðan fyrir því að hefur ekki fundist fyrr er hve erfitt er að rækta veiruna Einkenni eru svipuð og hjá RS og árstíðarsveiflan svipuð þeas tíðni hæst Eftir að veiran greindist fyrst hafa margar rannsóknir á mismunandi greiningaraðferðum farið af stað

Til eru fjórir hópar A1 A2 og B1 og B2

Greining veirusýkingar Frumuræktun og einangrun veiru erfitt að rækta og einangra Metapneumovirus, tekur 1-2 vikur, lélegt næmi. Leit að Antigeni ELISA, IFA (Immunofluorescent-antibody test) Fljótlegar og tiltölulega einfaldar greiningaraðferðir IFA næmi 73% f. metapneumovirus mv. PCR Leit að RNA og DNA PCR, næmasta og sértækasta greiningarprófið til að greina metapneumovirus í dag Serologia Mikilvæg til að greina á milli frumsýkingar og endursýkingar Ekki gagnleg í bráðafasa mtt metapneumovirus

PCR- Polymerase Chain Reaction Aðferð til að magna upp DNA Þarf lítið magn sýnis (1-10ng DNA) Tekur u.þ.b. 4-6 klst Þarf sérstakar “græjur”, ekki hægt að framkvæma á öllum rannsóknarstofum

Reverse Transcriptase PCR Aðferð til að magna upp RNA, notað við greiningu RNA veira og til að meta veirumagn Næmasta aðferðin til að greina og meta magn mRNA Reverse transcriptasi er ensím sem retróveirur nota til að umbreyta RNA erfðamengi yfir í DNA copiu (cDNA) RT- PCR: mRNA er einangrað, Reverse Transcriptasi notaður til að búa til cDNA sem er svo magnað upp með PCR með aðstoð sértækra primera.

Til að geta framkvæmt PCR þurfum við að þekkja hluta erfamengis þess er leitum að því við þurfum að nota primera sem eru oligonucleotide (basi, sykra og fosfat) sem þurfa að parast við DNA strenginn sem við ætlum að magna upp. Primerarnir eru bundnir hitaþolnum poymerasa og er bætt út í sýnið Fyrst er sýnið hitað upp í ca 90°C til að DNA tvístrendingarnir klofni í sundur, svo kælt niður í ca 60¨C til að primerarnir bindist DNA-einstrendingunum og polymerasinn vinnur vinnu sína Endurtekið 20-30 sinnum, fáum þá 2 í 20-30 veldi Svo er sýnið rafdregið á agarosagel og litað.

Greining metapneumovirus Hafa í huga að til eru 4 genaafbrigði veirunnar A1, A2, B1 og B2 Viljum að greiningarprófið nái til þeirra allra Þarf að finna réttan primer Real time RT-PCR (NL-N) næmasta og fljótlegasta leiðin sem höfum í dag

Skyndigreining Ekki enn búið að þróa fyrir metapneumovirus Í ljósi þess hve algeng hMPV sýking þykir mikilvægt að hanna einfalda greiningaraðferð til að sjúklingar fái meðferð við hæfi ? Einangrun ? Ribavirin Byggjast á því að þekkja/merkja viral antigen Þarf að vera nægilegt magn antigena í sýnum, t.d. nefkokssogi Rannsóknir hafa sýnt að veirumagn MPV mest í bifhærðu þekju öndunarvegs og að nefkoksslím innhaldi nægilegt magn antigena fyrir ELISA. Í ljósi þess að -

Heimildir Ebihara T, Endo R. Detection of hMPV antigens in Nasopharyngeal Secretions by an Immunofluorescent-ANtibody Test. J Clin Microbiol; 2005. Landry ML et al. Detection of hMPV in Clinical Samples by Immunofluorescene Staining. J Clin Microbiol; 2005. Maertzdorf et al. Real-Time RT- PCR Assay for Detection of hMPV from ALl KNown Genetic Lineages. J Clin Microbiol; 2004. Bouscambert-Duchamp M et al. Detection of hMPV RNA Sequences in Nasopharyngeal Aspirates of Young French Childrenwith Acute Bronchiolitis. J CLin Microbiol; 2005. Ishiguro N et al. Immunofluorescene Assy for detection of hMPV-specific Atibodies by Bac-F. Clin Diagn LAb Immunol; 2005.