روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری هموگلوبين ، PCV و شمارش سلولی

Measurement of Blood Hemoglobin using Hemiglobincyanide(HiCN) Method

اصول ابتداآهن هموگلوبين توسط فري سيانيد پتاسيم اكسيده شده (همي گلوبين) سپس همي گلوبين توسط سيانيد پتاسيم تبديل به همي گلوبين سيانيد ميشود. واكنش در حرارت اتاق زمان لازم براي ايجاد واكنش 5 دقيقه يا كمتر

معرف KCN 0.05g K3Fe(CN) 6 0.2g KH2PO4(Anhydrous) 0.140g Detergent 0.5-1ml Reagent water(Type 1) 1000ml

مشخصات معرف شفاف وزرد رنگ زمان لازم براي ايجاد واكنش 5 دقيقه يا كمتر دترژانها ليز گلبول هاي قرمزورسوب پروتئين ها را افزايش مي دهند. در طول موج بيشتر از 480 نانومتر جذب نوری ندارد. pH=7-7.4 در صورت كدورت دور ريخته شود. هرماه بصورت تازه تهيه شود.

Sampling Venipuncture K2EDTA or Na2EDTA(1.5-2.2mg/ml blood) Fresh sample Solution of sample &Reagent is stable K3EDTA

مواد؛ وسايل وتجهيزات كليه وسايل شيشه اي مثل پي پتها ولوله ها استاندارد وكاليبره از لحاظ شيميايي تميز باشند. اسپكتروفتومتر كاليبره استانداردهموگلوبين

Reference Method Macrodilution 100ميكروليتر خون با 25 ميلي ليتر معرف 4/0 يا5/0 ميلي ليتر خون با 100 ميلي ليتر معرف 04/0 ميلي ليتر خون با 10ميلي ليتر معرف

Routin procedure 20ميكروليتر خون + 5ميلي ليتر معرف

روش آزمايش

غلظت هموگلوبين نمونه با استفاده از جذب نوري نمونه در طول موج 540 نانومتر در مقابل بلانك با كمك جذب نوري و غلظت استانداردو يا با كمك منحني استاندارد محاسبه ميشود. واحد اندازه گيري گرم در ليتر

تداخلات Lipoproteinemia Lipemia WBC>20×109/L Plt>700×109/L Hb S

خطا ها خطا هاي نمونه گيري خطا هاي روش انجام آزمايش خطا هاي مربوط به مواد و تجهيزات خطا هاي آزمايشگر

Procedure For Determining Packed Cell Volume By Microhematocrit Method

نسبت حجم گلبولهاي قرمز به حجم خون كامل ميباشد. PCV

اصول آزمايش خونگيري مويرگي؛ وريدي وشرياني K2EDTA ضد انعقاد مناسب جهت كاليبراسيون K3EDTA به علت ايجاد چروكيدگي در گلبول هاي قرمزMCV را 2% كاهش وMCHC را به همين ميزان افزايش ميدهد.

اصول آزمايش نگهداري نمونه در دماي° 26-18 آزمايش حد اكثر 6 ساعت پس از نمونه گيري انجام شود. خطاي قابل قبول دراين روش1% ±ميباشد. انجام آزمايش بصورت دو تايی

مشخصات لوله جنس از شيشه مخصوص طول لوله 5/0± 75ميليمتر ضخامت جداره 2/0 ميليمتر قطر داخلي 0.085 +ـ 55/1 داراي باند آبي در يك انتها

مشخصات دستگاه ميكروسانتريفوژ شعاع چرخش بيشتر از 8سانتيمتر در عرض 30 ثانيه به حداكثر سرعت برسد RCF حدود 10-15 هزارg در محيط بمدت حداقل 5 دقيقه بدون افزايش دما از 45 درجه داراي زمان سنج اتوماتيك .(با قابليت تنظيم حداقل 30ثانيه)

× RCF=Relative Centrifugal Field RPM=Relative Per Minute RCF=0.00001118 × r × N 2

روش آزمايش 50ميكروليتر خون 3/2-4/3طول لوله از خون پرشود. روش آزمايش 50ميكروليتر خون 3/2-4/3طول لوله از خون پرشود. طول خمير مسدود كننده كمتراز 4 ميليمتر نباشد. نمونه ها بصورت مضاعف آزمايش شوند. نتايج حداكثر پس از 10دقيقه خوانده شوند. تفاوت نمونه هاي مضاعف از 05/0بيشتر نباشد.

ميانگين ودامنه مرجع مردان (0.54-0.4)0.47 زنان(0.47-0.37)0.42

منابع خطا خطاهاي نمونه گيري خطاهاي لوله خطاي خواندن خطاي بدام افتادن پلاسما

افزايش كاذب: هيپو ناترمي بدام افتادن پلاسما كاهش كاذب: ضد انعقاد اضافي هموليز هيپرناترمي

كاليبراسيون و کنترل کيفی دستگاه ميکروهماتوکريت 1-بررسي سرعت 2-بررسي زمان سنج 3-بررسي صحت ابزار خوانش

روش غير مستقيم بررسی كاليبراسيون چند نمونه خون با PCVکمتر از 5/0 و حاوی ضدانعقاد (K2EDTA را پس از بيست بار سروته نمودن به صورت دوتايی به مدت 3 ، 5 ، 7، 9 و 11 دقيقه سانتريفوژ کرده و نتايج ثبت مي گردد که در صورت مناسب بودن توان دستگاه (g) نتايج حاصله از دقيقه 5 به بعد می بايست بدون تغيير باقی بماند .

Blood Cell Counting

Leukocyte Counting By Manual method

عدم دقت اين روش 5/6% كه در موارد لكوپني به 15% ميرسد. از خون حاوي EDTA استفاده ميشود. مايع رقيق كننده اسيد استيک 2% (رقت 20/1 ) گلبولهاي قرمز را ليز ميكند. در موارد لكوسيتوز رقت 100/1 يا 200/1 در موارد لكوپني رقت 10/1

منابع خطا مخلوط نکردن به ميزان کافی خطاي آزمايش كننده خطاي ناشي از وسايل خطاي ميدان ديد هر چه تعداد سلولهاي شمارش شده بيشتر باشد ميزان خطا كمتر ميشود.

Platelet counting By Manual Method

منابع خطا جمع آوري نمونه تهيه رقيق كننده(فاقد ذرات خارجي مزاحم) تكنيك رقيق سازي پاكيزه نبودن لام

عدم دقت اين روش وقتي كه حداقل 100سلول شمارش شود11% واگر 40 پلاكت شمارش شود15% به دليل تمايل پلاكتها به چسبيدن به يكديگر؛جسم خارجي وشيشه شمارش مشكل ميبا شد. نمونه: خون وريدي حاوي ضد انعقاد EDTA محلول رقيق كننده اگزالات آمونيوم 1% با آب مقطر

روش انتخابي شمارش پلاكتها استفاده از ميكروسكوپ فاز كنتراست مي باشد

با تشکر از توجه شما