第三章 消毒与灭菌 1. 灭菌（ sterilization ） 指杀灭物体中所有病原微生物和非病原 微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。 2. 消毒（ disinfection ） 指杀灭物体中的病原微生物的方法。消 毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽胞、孢子 并不严格要求全部杀死。 3. 防腐（ antisepsis ） 指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法。 4. 无菌（ asepsis ） 指没有活的微生物的状态。采取防止或杜绝任 何微生物进入动物机体或其它物体的方法，称为无菌法。以无菌法进 行的操作称为无菌操作。

物理因素对微生物的影响 物理因素 温 度 辐射 干 燥 超声波 微 波 滤过除菌

( 一 ) 低温 大多数微生物对低温具有很强的抵抗力 。 低温下，代谢活动降低到最低水平，生长繁殖 停止，但仍可长时间保持活力。 意义： 保存菌种、毒种、疫苗等 一、温 度

热力灭菌法： 干热灭菌 和湿热灭菌两种方法。 二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。 原因：（ 1 ）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； （ 2 ）湿热的穿透力比干热大； （ 3 ）湿热的蒸汽有潜热存在。 ( 二 ) 高温： 高温对微生物具有明显的致死作用.

(1) 火焰灭菌法 : 火焰直接烧灼，如接种环 。 1. 干热灭菌法

(2) 热空气灭菌法 干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质的物品, 如玻璃器皿、瓷器等的灭菌。 灭菌温度需 160 ℃维持 2 h 。

(1) 煮沸灭菌 : 煮沸 10 ～ 20 min 可杀死所有细菌的繁殖 体， 芽胞常需煮沸 1 ～ 2 h 才被杀死 。用于饮水、一般器械 如刀剪的消毒。 (2) 巴氏消毒法 : 以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特 定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法. 1. 低温维持巴氏消毒法 63 ～ 65 ℃ 30min 2. 高温瞬时巴氏消毒法 71 ～ 72 ℃ 15s 3. 超高温巴氏消毒法 132 ℃ 1 ～ 2s 2. 湿热灭菌法

（ 3 ）流通蒸汽灭菌法 ： 是一种常压蒸汽消毒法，细菌 繁殖体 分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。 (4) 间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽） 100 ℃维持 30min 温箱过夜 100 ℃维持 30min 温箱过夜 100 ℃维持 30min 温箱过夜 100 ℃维 持 30min 。 此法常用于一些不耐高温的培养基，如鸡蛋培养基、 血清培养基、糖培养基的灭菌 。

高压蒸汽灭菌器： 15 磅 / 平方 英寸， ℃温度下维持 15 ～ 20min 。 应用此法灭菌，一定要充分 排除灭菌器内原有的冷空气。 用于普通培养基、生理盐水、 耐热药品、手术敷料等。 手提式高压蒸汽灭菌器 （ 5 ）高压蒸汽灭菌法

辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。 按辐射对微生物的灭活作用分： 1. 非电离辐射 : 可见光、日光、紫外线 2. 电离辐射 :  、  、 γ 、 χ 射线以及高能质子、 中子等 二、辐 射

( 一 ) 非电离辐射 1. 可见光 : 指在红外线和紫外线之间的肉眼可见的光线，其 波长 400 ～ 800nm 。可见光线对微生物一般无多大影响， 但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖。 光感作用 : 指可见光具有微弱的杀菌作用，若将某些染料 如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄等加到培养基或涂 在外伤表面，能增强可见光的杀菌作用 。

2. 阳光 : 直射日光有强烈的杀菌作用，是天然的 杀菌因素。许多微生物在直射日光的照射下， 半小时到数小时即可死亡。芽胞对日光照射的 抵抗力比繁殖体大得多，往往需经 20h 才死亡。 日光的杀菌效力因地、因时及微生物所处环境 不同而异 。

波长 nm 部分有杀菌作用。实验室常使用的紫外 线杀菌灯紫外线波长为 253.7nm 。常用于微生物实验室、 无菌室、手术室等的空气消毒，或用于不能用高温或化学药 品消毒的物品的表面消毒。还可用于诱变育种。 3. 紫外线 杀菌机理： （ 1 ）损害 DNA 构型，影响 DNA 复制和转录 （ 2 ） O2 O3 O 杀菌

(1)  射线 : 电离辐射强 ， 穿透力差（ 缺乏穿透力，不实用） (2)  射线 : 电离辐射强 ， 穿透力强 (3)  射线 : 电离辐射弱， 穿透力强 （ 4 ） X 射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强 用途：忌热物品的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面 杀菌机制：射线使水电离为 H ＋和 OH －，这些游离基是强烈的 还原剂和氧化剂，可直接作用于细菌本身 。 ( 二）电离辐射

微生物在干燥的环境中失去大量水分，新陈 代谢便会发生障碍，甚至引起菌体蛋白质变性 和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。不同 种类的微生物对干燥的抵抗力差异很大。主要 用于菌种和食品的保藏。 三、干 燥

频率在 ～ Hz 的声波 称为超声波 。主要用于裂解细胞，提 取细胞组分。 四、超声波

五、微 波 从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微 波。所需时间短、加热均匀。主要用于陶瓷、耐 热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿忌用。

滤过除菌 : 通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌等微 生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒、霉形体以及 细菌 L 型等小颗粒。主要用于不耐高温的营养液、血清、抗 菌素、空气等除菌。 六、滤 过

复习重点 1. 灭菌、消毒、防腐、无菌的概念。 2. 物理消毒灭菌方法主要有哪些？如何合理选用这 些消毒方法？