蛋白質的沈澱作用 能使蛋白質發生沈澱作用的因素有: 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子(汞離子、鉛離子等) 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱
﹝五﹞蛋白質純化 Ammonium sulfate Salting out ﹝鹽析﹞
﹝五﹞蛋白質純化 等電點沉澱
蛋白質的溶解度 1.pH 值:當 pH 值在其等電點( pI )時,溶解度 最小。 2. 鹽濃度:當在低濃度時,蛋白質的溶解度隨 著鹽濃度的增加而增加,稱為 Salting-in 。當 鹽濃度高至某一濃度時,蛋白質的溶解度隨 著鹽濃度的增加而減少,稱為 Salting-out 。 3. 溶媒的介電常數( Dielectric contant ):酒精、 丙酮的常數較水小,使蛋白質分子在此溶媒 中的斥力較小,溶解度較低。 4. 溫度:在一限定的溫度(約 0~40 ℃)下,大 部份的蛋白質溶解度隨溫度的上升而增加。
Ion exchange chromatography R + A - + B - R + B - + A -
Gel filtration chromatography
V 0 : void volumeVe : elution volume
Affinity chromatography
fusion protein: 6-histidine tag
Dialysis Cellophane nitrocellulose collodion