微生物研究法 研 C 1. What is Hela cell 2. Cell density and doubling time 3. Cell growth curve 碩一 曾仁志

What is HeLa cell HeLa cell ： HeLa cell is derived from cervial cancer cells taken from a woman named Henrietta Lacks. HeLa cells have been transformed by human papillomavirus 18 (HPV 18).

Human PapillomaViruses Human PapillomaViruses 人類乳突狀病毒： 約有 100 種類型已被科學家鑑定，大部分無害， 一些種類可以引起手部或足部的皮膚疣。 Cervical cancer ：約有 30 種類型經親蜜接觸傳播 後，某些引起生殖器長疣，而其他的引起子宮 頸癌。

Human PapillomaViruses HPV contain oncogenes that code for proteins called E7 and E6. E7 binds to and inactivates the Rb protein. E6 binds to the p53 protein and targets it for destruction.

Cell density and doubling time Cell density 6cm 的 dish 細胞長滿時約 2.5~3.5 × 10 6 。 6cm dish 的面積為 3 × 3 × 3.14 = Cell density 為 ( 8.85 × 10 4 ~ 1.24 × 10 5 )/cm 2

Cell density and doubling time Doubling time ：細胞分裂所需的時間。 doubling time 公式 DT=( t – t. 0. )log 2/( log N - log N.0. ) DT=(56-6)log2/(log – log ) = 20 t 、 t. 0. 為計算細胞數目的時間 N. 0. 為 t. 0. 時的細胞數目 N. 為 t 時的細胞數目  公式求得 doubling time(DT) ： 20 小時

小時 Cell number (× 10 4 ) 052 ± ± ± ± ± ± ± ± 時間間隔 6~2424~2848~3252~486~2832~56 生長速率 (10 4 /hr)

討論 這部分實驗主要以計數細胞及生長曲線為主，雖 然不需高超的技術但卻是一項基本的工夫，在做的過 程中，可能一整天都待在實驗室。可見得做實驗除了 細心外，耐心也很重要。本次的實驗中有幾點需要討 論的地方，第一、就是時間點沒有取好，有一些點太 接近的了，不具代表性，圖畫出來也不好看。第二、 從曲線圖的生長速率中，細胞雖進入了 log phase ，但 是生長速率卻有很大的變動，可能當初分盤時，每盤 細胞數沒有一致。第三、細胞生長曲線圖沒有 lag phase ，細胞種的太多。經過這次的實驗，相信對往後 計數細胞的步驟會更加有經驗及熟練。