甾体激素类 药物的分析 第十一章 甾体激素类 药物的分析 Analysis of Steroid Hormones 药物分析教研室

甾体激素 肾上腺皮质激素 性激素 雄性激素及蛋 白同化激素 孕激素 雌激素

Contents 结构与分类 1 鉴 别 2 检 查 3 含量测定 4

第一节 基本结构与性质 D AB C 环戊烷并多氢菲母核 1.Δ 酮， C 20 酮基 2.C 11 ： 或 4.A 环上的酚羟基 5. 卤素 (-F) ，酯基 3.C 17 ： ， ，， ， 以下主要基团可供分析：

第一节 基本结构与性质 一、肾上腺皮质激素 氢化可的松 (hydrocortisone) 醋酸地塞米松 (dexamethasone acetate) 16α- 甲基 21- 酯化 17α- 羟基 9α-氟9α-氟 3- 酮 1,2- 双键 11β- 羟基 20- 酮

二、雄性激素及蛋白同化激素 第一节 基本结构与性质 甲睾酮 (methyltestosterone) 丙酸睾酮 (testosterone propionate) 苯丙酸诺龙 (nandrolone phenylpropionate) 17β- 羟基

第一节 基本结构与性质 三、孕激素 黄体酮 (progesterone) 醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate ) 米非司酮 (mifepristone)

第一节 基本结构与性质 四、雌性激素 雌二醇 (estradiol) ( 炔雌醇 ) 炔诺酮 (norethisterone)

第一节 基本结构与性质

第二节 Identification  物理常数的测定  化学鉴别法  制备衍生物测定熔点  UV  IR  TLC  HPLC

第二节 Identification 一、物理常数的测定 1. 熔点 炔雌醇 m.p.201 ℃ 黄体酮 双肟 m.p.238 ℃

苯丙酸诺龙 缩氨基脲 m.p.178~185 ℃分解 丙酸睾丸素 m.p.150~156 ℃ 第二节 Identification

二、化学鉴别法 2. 比旋度 3. 吸收系数 与强酸的呈色反应 官能团的反应 1. 与强酸的呈色反应 甾体激素 类药物 硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸 呈色

第二节 Identification 2. 官能团的反应 ① C 17 -α- 醇酮基 —— 还原性 A. 呈色反应 C 17 -α- 醇酮基 四氮唑盐 OH - 呈色 B. 沉淀反应 C 17 -α- 醇酮基 氨制硝酸银 银镜反应 C 17 -α- 醇酮基 碱性酒石酸铜 Cu 2 O↓

第二节 Identification ② C 3 – 酮基和 C 20 – 酮基 甾酮类 2,4- 二硝基苯肼 呈色 异烟肼、硫酸苯肼 异烟腙（黄色） 睾酮 异烟双腙（黄色） 黄体酮

③ 甲酮基或活泼亚甲基 第二节 Identification 亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚 / 芳香醛 呈色 蓝紫色 黄体酮 ④ 卤素 ⑤ 酚羟基 雌激素类 重氮苯磺酸 红色偶氮染料

⑥ 乙炔基 第二节 Identification ↓ 炔雌醇 白 ⑦ 酯基

黄体酮 三、 UV 四、 IR 第二节 Identification 酚羟基 醇羟基 炔键 羰基 苯环骨架振动

第二节 Identification 五、 TLC 制剂分析 对照品法 炔诺酮炔诺酮 六、 HPLC

第三节 Purity Test 一、 TLC 地塞米松磷酸钠中杂质检查

第三节 Purity Test 氢化可的松中其他甾体检查 对照品 60μg/ml 供试品 3.0mg/ml  CHCl 3 -MeOH(9:1) 溶剂  硅胶 GF 254  二氯甲烷 - 乙醚 - 甲醇 - 水  385 :60 : 15 : 2  展开后晾干  105 ℃干燥 10min  碱性四氮唑蓝显色

对照溶液 ——0.02mg/ml 供试液 ——1 mg/ml 二、 HPLC 第三节 Purity Test 黄体酮中有关物质检查 供试品溶液的杂质峰 数不得超过 1 个，其面 积不得大于对照液的 主峰面积的 3/4

第三节 Purity Test 三、硒的检查 来源 合成中用二氧化硒 (SeO 2 ) 脱氢 四、溶剂残留 GC 甲醇和丙酮 (GC) 0.3%0.5%

第三节 Purity Test 五、游离磷酸盐检查 钼酸铵 磷钼酸 740nm ， UV

第四节 Assay  HPLC  UV  比色法  非水溶液滴定法 四氮唑比色法 异烟肼比色法 柯柏反应比色法

第四节 Assay 一、 HPLC 对照液供试液 己烯雌酚 黄体酮

第四节 Assay 二、 UV 醋酸地塞米松

第四节 Assay 三、比色法 肾上腺皮质激素类 OH - [ 还原 ] 2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC (Red tatrazoline RT) 甲潜 (Formazan) 深红色 λmax 480~490nm

第四节 Assay Blue tetrazoline BT BT- 单甲潜 BT- 双甲潜 蓝色 λ max 525nm

氢化可的松软膏的含量测定 第四节 Assay 精密量取对照品溶液及供试品溶液各 1ml ，分别置干燥具塞试 管中，各精密加无水乙醇 9ml 与氯化三苯四氮唑试液 1ml ，摇匀， 各再精密加氢氧化四甲基铵试液 1ml ，摇匀，在 25 ℃的暗处放 置 40min ～ 45min ，在 485nm 的波长处分别测定吸收度，计算， 即得 影响因素 基团 溶剂与水分 碱 空气中氧与光线 温度与时间

第四节 Assay （ 1 ）基团对反应速度的影响 C 11 = O ＞ C 11 － OH C 21 － OH ＞ C 21 - 酯 C 16 无论何种取代基 ν↓ （ 2 ） 溶剂、水分的影响 含水量＞ 5%→ν↓ 含水 10%→A↓10% 含水 30%→ 几无反应 — 无水乙醇 ( 无醛 )

第四节 Assay （ 3 ） O 2 与光线的影响 （ 4 ）碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（ pH13.75 ）条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳 （ 5 ） 温度与时间 t ℃ ↑→ν↑→ 甲瓒分解 ↑→%↓

( 二 ) 异烟肼法 (Isonicotinic acid hydrazide) 第四节 Assay INH △ 酮 Isonicotinic acid Hydrazide

第四节 Assay 影响因素 （ 1 ）反应速度 C 3 = O ＞ C 17 = O 、 C 20 = O C 11 = O 不反应 专属性强 （ 2 ）溶剂的选择 异烟肼盐酸盐 → 甲醇、乙醇 无水 （ 3 ）水分、 O 2 与光线的影响 含水量 ↑→ 腙水解 ↑→A↓→%↓ 不挥发溶剂、不吸收水分时 → O 2 与光线无影响

第四节 Assay (4) 酸、异烟肼的量 盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1 酸度 ↑→ 异烟肼盐 ↓ 酸度 ↓→ A↓ 样品 : 异烟肼 = 1 : 8 →ν↑ (5) 温度 t ℃ ↑ → ν↑

第四节 Assay ( 三 ) Kober 反应比色法

第二步反应 nm A Kober 反应吸收光谱 第一步反应 第四节 Assay 采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮 滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量

第四节 Assay 四、非水滴定 —— 米非司酮 五、生物样品中的甾体激素的分析 Doping control 滥用药物检测 刺激剂 麻醉剂 β- 阻断剂 利尿剂 遮蔽剂 合成类固醇及 β2 激动剂 肽类激素 外源性 内源性