Summer Research In Institute of Botany, Academia Sinica - R425 陳慧宇

Introduction of our laboratory 杜鎮 Jenn Tu 中研院植物所研究員 德國慕尼黑大學博士 實驗室研究方向 phage display 系統的建立 annexin V 的研究 細菌或動植物基因的選殖 基因演化及基因重組

Phage display Filamentous phage (fd, f1, M13) --has only about 10 genes (ssDNA) --grow in well-characterized hosts, the Gram- negative bacteria --converted to a double-stranded replicative form by host enzymes If the foreign DNA is fused to a gene coding for a viral coat protein, the virion can display foreign peptides or proteins on its surface.

M13 filamentous bacteriophage About M13 filamentous phage --circle, ssDNA, 10 or 11 genes, 1um v.s.10nm --p8 : the most coat proteins p3 & p6 : the minor (5) coat proteins in one end p7 & p9 : the minor (5) coat proteins in another end p5 : packing ssDNA p1/p11 & p4 : the channel p2 & p10 : replication

M13 filamentous bacteriophage Recognize the F pili of bacteria by p3, then infect the bacteria From ssDNA to dsDNA, replicate in bacteria Packing by p5 and other proteins in membrane Leave out from

M13 phage display 選擇要表現 protein 位置 : p3 or p8 or p9 Phage display 的目的 Fusing proteins 的表 現以及可能的問題 Selection 的方法 Amplify phage

M13 phage display 流程 --design annexinV primer --PCR --make annexinV fusing protein --clone to pBCKS(+) --electroporation in TG1 --selection (Chloramphenicol) --M13 helper phage rescue --selection --amplify M13 phage

M13 phage display 實驗結果 --failure 檢討 -- 一開始的時候 primer 的 設計問題 -- 實驗過程中 plasmid 的 穩定性問題 其他的想法 --p8 protein 的結構表現 有沒有其他的改進方法

My summer study in Sinica 按表操課 -- 學習基本的微生物實驗技術以及基本的分生技術 念 “ 書 ” 及增加見聞 -- 看和實驗相關的 protocol 及操作手冊, 聽老師上課和分 享其他的經歷 協助學姊的助理工作 -- 凡是自己動手的植物所風格 心得 -- 學了不少東西, 不管是自己實際做的還是間接知道的.

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