Summer research  研究主題： Yeast One Hybrid system  中央研究院生農所籌備處 楊文欽教授 生科 04 級 何國維

Institute introduction  作物改良組  中草藥研究組  環保及工業用酵素  動物疫苗技術

Introduction Lymphocyte stem cell （ Bone marrow ） B cell （ Bone marrow ） T cell （ Thymus ） Tc （ Cytotxic T cell ） Th （ Helper T cell ）

Introduction  Th1 cells activate macrophages. Enabling them to destroy intracellular microorganisms more efficiently.  Th2 cells drive B cells to differentiate and produce immunoglobulins of all other type.

Introduction  T 細胞由未受刺激的 Th0 細胞發展到 Th1 細胞的分 化過程中，其 Interferon gamma promoter (pIFN- γ) 會被活化而導致 IFN-γ 的產生。  T-bet 可以促進 T 細胞從 Th0 細胞分化到 Th1 細 胞，也可以控制 IFN-γ 的表現。

Introduction Th0Th1IFN-γ T-bet

Material Yeast

Main difference between yeast and E.coli culture YeastE.Coli 4~6 days 16 hours YeastE.Coli 30 ℃ 37 ℃ YeastE.ColiYPDLB  Incubation time  Incubation temperature  Culture medium

Method Yeast One Hybrid system

 One-Hybrid System provides an in vivo genetic assay used for isolating novel genes encoding proteins that bind to a target, cis-acting regulatory element  Protein-DNA interaction

 由於 T-bet 可和 IFN-γ 啟動子結合並且調控之， 因此想利用 T-bet 和 IFN-γ 啟動子的作用來探討 Yeast one hybrid 系統是否可以偵測到兩者的作 用。若可行，我們將利用此系統進一步來篩選其 他能和 IFN-γ 啟動子作用的基因，與研究這些基 因的產物是否可以促進 T cell 從 Th0 細胞分化到 Th1 細胞。

XbaI IFN-r promoter EcoRI ligation Reporter gene

T-bet binding domain EcoRIPstI Activation domain ligation Report gene

Yeast strain ： YM4271 （ MATa ）、 Y187 （ MATα ） Can’t synthesis histidine 、 leucine 、 uracil by itself 。 Yeast Incubate Yeast selection medium -His or -Leu or -Ura Yeast can’t growth on selection medium

pHISi-IFN-γ Yeast （ YM4271 ） Yeast selection medium -His pGAD424-T-bet Yeast （ Y187 ） Yeast selection medium -Leu

Yeast selection medium -His Appropriate 3-AT 3-AT ： a inhibitor of the HIS3 gene product Yeast （ YM4271 ） pHISi-IFN-γ

Yeast selection medium -His/-Leu Yeast （ Y187 ） pGAD424-T-bet Yeast can’t growth Yeast （ YM4271 ） pHISi-IFN-γ Yeast can’t growth Yeast selection medium -His/-Leu Incubate

pHISi-IFN-γ pGAD424 Appropriate 3-AT Yeast selection medium -His/-Leu

Yeast mating YM4271Y187 Yeast selection medium -His/-Leu pHISi-IFN-γ pGAD424-T-bet

Y187 YM4271

Future work  Screen library to find new transcription factor.

THE END Thank you