Isolation and Characterization of Bacteria which Tolerate High pH ( > 10) and Produce Protease 報告學生: 林沛穎、 譚皓仁 報告學生: 林沛穎、 譚皓仁 報告日期: 2003. 12.29 報告日期: 2003.

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Isolation and Characterization of Bacteria which Tolerate High pH ( > 10) and Produce Protease 報告學生: 林沛穎、 譚皓仁 報告學生: 林沛穎、 譚皓仁 報告日期: 報告日期:

前言 Alkaliphile :能生長在 pH 值> 9 ,但無法生長於 pH 值< 6.5 的微生物 Alkaliphile :能生長在 pH 值> 9 ,但無法生長於 pH 值< 6.5 的微生物 包括: (1) Bacillus species, Micrococcus species, 包括: (1) Bacillus species, Micrococcus species, Pseudomonas species, Streptomyces species Pseudomonas species, Streptomyces species (2) 酵母菌 (2) 酵母菌 (3) 真菌 (3) 真菌

Alkaliphile 較容易從鹼性環境中分離出來,但也可從一般 土壤中找到 Alkaliphile 較容易從鹼性環境中分離出來,但也可從一般 土壤中找到

Alkaliphiles 的應用: 大多用於應用工業 大多用於應用工業 其所產生的 alkaline cellulase 或 alkaline protease 可作為 生物清潔劑 其所產生的 alkaline cellulase 或 alkaline protease 可作為 生物清潔劑

細菌的 alkaline protease 的特質為: (1) 在高 pH 值( e.g,10 )具有高度活性 (2) 廣泛的受質專一性 (3) 最佳的作用溫度為 60 ℃

實驗目的 從環境中分離出耐鹼且會產生 protease 的微生物

實 驗 步 驟 分離耐鹼菌 分離耐鹼菌 以鹼性培養基作分離 以鹼性培養基作分離 檢測是否會產 protease 檢測是否會產 protease 以 skim milk agar 培養 觀察菌落周圍有無透明環 以 skim milk agar 培養 觀察菌落周圍有無透明環 將 skim milk agar 上的菌落再接到鹼性培養基作確認 將 skim milk agar 上的菌落再接到鹼性培養基作確認

Alkaline medium 的成分 (g / L) : Glucose / Soluble starch………………………….10g Glucose / Soluble starch………………………….10g Yeast extract……………………………………….5g Yeast extract……………………………………….5g Peptone……………………………………………..5g Peptone……………………………………………..5g K 2 HPO 4 …………………………………………….1g K 2 HPO 4 …………………………………………….1g MgSO 4 · 7H 2 O…………………………………...0.2g MgSO 4 · 7H 2 O…………………………………...0.2g Na 2 CO 3 ……………………………………………10g Na 2 CO 3 ……………………………………………10g Agar………………………………………………..20g Agar………………………………………………..20g

Skim milk agar 的成分 (g / L) : Skim milk powder………………………………..10g Skim milk powder………………………………..10g Yeast extract…………………………….…………1g Yeast extract…………………………….…………1g Agar……………………………………………….15g Agar……………………………………………….15g

結果

分離純化耐鹼菌

檢測是否產生 protease 菌株 (1) 、 (3) 菌落周圍有透明環

菌株 (K) 菌落周圍有透明環

真菌菌落周圍有透明環

革蘭氏染色 菌株 (1)

菌株 (3)

菌株 (K) 菌株 (K)

革蘭氏染色結果 (1)(3)(K) 菌皆為 G(+) 球菌 革蘭氏染色結果 (1)(3)(K) 菌皆為 G(+) 球菌 推測其皆為 Micrococcus spp. 推測其皆為 Micrococcus spp.

討論 要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中 要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中 細菌在鹼性的環境下生長較慢 細菌在鹼性的環境下生長較慢 有些菌產生的 protease 量可能較少,如 K 菌 有些菌產生的 protease 量可能較少,如 K 菌

參考文獻 Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for Biotechnology, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1999, 63: Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for Biotechnology, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1999, 63: Mala B. Rao, Aparna M. Tanksale, Mohini S. Ghatge, and Vasanti V. Deshpande, Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1998, 62: Mala B. Rao, Aparna M. Tanksale, Mohini S. Ghatge, and Vasanti V. Deshpande, Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1998, 62: Nathalie Wery, Ursula Gerike, Ajay Sharman, Julian B. Chaudhuri, David W. Hough, and Michael J. Danson, Use of a Packed-Column Bioreactor for Isolation of Diverse Protease-Producing Bacteria from Antarctic Soil, Applied and Environmental Microbiology, 2003, 69: Nathalie Wery, Ursula Gerike, Ajay Sharman, Julian B. Chaudhuri, David W. Hough, and Michael J. Danson, Use of a Packed-Column Bioreactor for Isolation of Diverse Protease-Producing Bacteria from Antarctic Soil, Applied and Environmental Microbiology, 2003, 69: