Isolation and Characterization of Bacteria which Tolerate High pH ( ＞ 10) and Produce Protease 報告學生：林沛穎、譚皓仁報告學生：林沛穎、譚皓仁報告日期： 2003. 12.29 報告日期： 2003.

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Isolation and Characterization of Bacteria which Tolerate High pH ( ＞ 10) and Produce Protease 報告學生：林沛穎、譚皓仁報告學生：林沛穎、譚皓仁報告日期：報告日期：

前言 Alkaliphile ：能生長在 pH 值＞ 9 ，但無法生長於 pH 值＜ 6.5 的微生物 Alkaliphile ：能生長在 pH 值＞ 9 ，但無法生長於 pH 值＜ 6.5 的微生物包括： (1) Bacillus species, Micrococcus species, 包括： (1) Bacillus species, Micrococcus species, Pseudomonas species, Streptomyces species Pseudomonas species, Streptomyces species (2) 酵母菌 (2) 酵母菌 (3) 真菌 (3) 真菌

Alkaliphile 較容易從鹼性環境中分離出來，但也可從一般土壤中找到 Alkaliphile 較容易從鹼性環境中分離出來，但也可從一般土壤中找到

Alkaliphiles 的應用：大多用於應用工業大多用於應用工業其所產生的 alkaline cellulase 或 alkaline protease 可作為生物清潔劑其所產生的 alkaline cellulase 或 alkaline protease 可作為生物清潔劑

細菌的 alkaline protease 的特質為： (1) 在高 pH 值（ e.g,10 ）具有高度活性 (2) 廣泛的受質專一性 (3) 最佳的作用溫度為 60 ℃

實驗目的從環境中分離出耐鹼且會產生 protease 的微生物

實驗步驟分離耐鹼菌分離耐鹼菌以鹼性培養基作分離以鹼性培養基作分離檢測是否會產 protease 檢測是否會產 protease 以 skim milk agar 培養觀察菌落周圍有無透明環以 skim milk agar 培養觀察菌落周圍有無透明環將 skim milk agar 上的菌落再接到鹼性培養基作確認將 skim milk agar 上的菌落再接到鹼性培養基作確認

Alkaline medium 的成分 (g / L) ： Glucose / Soluble starch………………………….10g Glucose / Soluble starch………………………….10g Yeast extract……………………………………….5g Yeast extract……………………………………….5g Peptone……………………………………………..5g Peptone……………………………………………..5g K 2 HPO 4 …………………………………………….1g K 2 HPO 4 …………………………………………….1g MgSO 4 · 7H 2 O…………………………………...0.2g MgSO 4 · 7H 2 O…………………………………...0.2g Na 2 CO 3 ……………………………………………10g Na 2 CO 3 ……………………………………………10g Agar………………………………………………..20g Agar………………………………………………..20g

Skim milk agar 的成分 (g / L) ： Skim milk powder………………………………..10g Skim milk powder………………………………..10g Yeast extract…………………………….…………1g Yeast extract…………………………….…………1g Agar……………………………………………….15g Agar……………………………………………….15g

結果

分離純化耐鹼菌

檢測是否產生 protease 菌株 (1) 、 (3) 菌落周圍有透明環

菌株 (K) 菌落周圍有透明環

真菌菌落周圍有透明環

革蘭氏染色菌株 (1)

菌株 (3)

菌株 (K) 菌株 (K)

革蘭氏染色結果 (1)(3)(K) 菌皆為 G(+) 球菌革蘭氏染色結果 (1)(3)(K) 菌皆為 G(+) 球菌推測其皆為 Micrococcus spp. 推測其皆為 Micrococcus spp.

討論要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中細菌在鹼性的環境下生長較慢細菌在鹼性的環境下生長較慢有些菌產生的 protease 量可能較少，如 K 菌有些菌產生的 protease 量可能較少，如 K 菌

參考文獻 Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for Biotechnology, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1999, 63: Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for Biotechnology, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1999, 63: Mala B. Rao, Aparna M. Tanksale, Mohini S. Ghatge, and Vasanti V. Deshpande, Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1998, 62: Mala B. Rao, Aparna M. Tanksale, Mohini S. Ghatge, and Vasanti V. Deshpande, Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1998, 62: Nathalie Wery, Ursula Gerike, Ajay Sharman, Julian B. Chaudhuri, David W. Hough, and Michael J. Danson, Use of a Packed-Column Bioreactor for Isolation of Diverse Protease-Producing Bacteria from Antarctic Soil, Applied and Environmental Microbiology, 2003, 69: Nathalie Wery, Ursula Gerike, Ajay Sharman, Julian B. Chaudhuri, David W. Hough, and Michael J. Danson, Use of a Packed-Column Bioreactor for Isolation of Diverse Protease-Producing Bacteria from Antarctic Soil, Applied and Environmental Microbiology, 2003, 69: