細菌細胞觀察 劉佩珊

口腔中微生物菌叢之觀察

 在口腔中唾液含有水分、胺基酸、蛋白質、 脂質、醣類及一些無機物，因此適合菌體生 長。  牙齒表面亦會有大量菌體存在形成牙菌斑。  主要菌群為厭氣性螺旋體與弧菌、葡萄球菌、 乳酸桿菌及鏈球菌  乳酸桿菌及鏈球菌附著於齒面上，可醱酵醣 類產生乳酸，造成牙齒脫鈣作用，進而形成 細微穿孔導致齵齒。  本實驗以牙籤採集口腔及牙齒面檢體，並藉 由簡單的染色來觀察口腔中的細菌。

蓋玻片一端滴加一滴 methylene blue 染劑（圖 D ） 以吸水紙由另一端將水吸出（圖 E ）

口腔中微生物菌叢之觀察

鼻腔中金黃葡萄球菌 （ Staphylococcus aureus ） 之鑑定

 天然存在人體的微生物稱為正常菌群  在鼻腔中主要菌群為金黃葡萄球菌及表皮 葡萄球菌  MSA 含高濃度鹽類，可抑制葡萄球菌屬以 外之微生物生長  MSA 含甘露醇（ mannitol ），經醱酵產酸後， 可經由酚紅（ phenol red ）顯示 pH 值之改變  金黃葡萄球菌能醱酵甘露醇，使菌落周圍 呈黃色，表皮葡萄球菌不醱酵甘露醇，顏 色不改變。

以無菌棉棒伸進鼻孔約 2.5 公分，輕輕旋轉棉棒使之 與鼻孔黏膜接觸 。 壓舌板壓住舌頭，以無菌棉棒於咽喉表面充分旋轉， 採集檢體。勿觸及舌頭。 將採樣的棉棒直接以鋸齒狀劃線接種於 MSA plate 上。

表皮葡萄球菌 大腸桿菌 鏈球菌 金黃葡萄球菌

細菌簡單染色

染劑（ Stains ）  鹼性染劑 －正電荷染色原 － 甲烯藍、結晶紫、石炭酸複紅  酸性染劑 －負電荷染色原 －伊紅、苯胺黑

簡單染色（ Simple stains ）  使用單一染劑  使用鹼性染劑（正電荷）  觀察細菌形狀（球狀、桿狀、螺旋狀）、 大小、排列情形（成鏈、成簇、成對、 四聯）  甲烯藍 （ 1-2 分鐘） 、結晶紫 （ 秒） 、 石炭酸複紅 （ 秒）

製備染色抹片  準備乾淨之載玻片  自肉湯培養或固體培養製備抹片  熱固定 － 過火數次或浸泡於甲醇中一分鐘

簡單染色步驟  將菌製備成抹片，各抹片於染色前需先經過 熱固定。  將玻片置於染色盤上，覆以染色液，並注意 適宜之染色時間。  以蒸餾水尖嘴瓶小心沖去過剩染色液，此時 玻片應與水流成平行，如此可減少微生物自 抹片中流失。  以吸水紙吸乾抹片，切勿揩拭。  以油鏡觀察抹片。

簡單染色 – B.cereus

簡單染色 – S. aureus