植物细胞的程序化死亡 姓名：刘满希 学号： D4035 导师：王忠教授 植物生理专题讨论

背景知识回顾 凋亡过程与调控总结 凋亡过程 + 受体 cAMP Ca 2+ 神经酰胺 凋亡 诱导 因素 死亡信号死亡信号 凋亡相关基因激活 DNase 激活 Caspases 激活 巨噬细胞吞噬 分解凋亡细胞 信号转导 基因激活 执行凋亡凋亡细胞的清除

背景知识回顾 凋亡过程与调控总结 凋亡过程Ⅰ 受体 cAMP Ca2+ 神经酰胺 凋亡相关 基因激活 信号转导信号转导 细胞膜 细胞核 凋亡诱导因素 + Dnase 激活 Caspases 激活 死亡信号

背景知识回顾 凋亡过程与调控 凋亡过程Ⅱ DNase 激活 Caspases 激活 凋亡细胞的 清除 凋亡执行

植物细胞程序化死亡 1 植物 PCD 的一般特征 2 植物 PCD 的发生 3 PCD 分子调控机制

1 植物 PCD 的一般特征 ①植物与动物 PCD 有许多相似的形态特征， 如：细胞浓缩、染色质边缘化、核浓缩、 DNA 片段化、凋亡小体的形成等。其中， DNA 片段化被认为是最主要的凋亡特征， 发生凋亡的细胞在核酸内切酶的作用下，产 生 180 ～ 200bp 大小的 DNA 片段，在含溴化 乙锭的琼脂糖凝胶上呈典型的梯状条带。

1 植物 PCD 的一般特征 ②由于植物中没有巨噬细胞和嗜中性细 胞，因此它不像动物细胞能够自我吞噬 死亡细胞。但是，植物细胞重要的细胞 器 —— 液泡，已被发现在 PCD 中发挥着 巨大的作用。液泡膜破裂，释放许多水 解酶，引起细胞死亡。液泡裂解受细胞 自身调节，而不是代谢下降的结果。

2 植物 PCD 的发生 2.1 糊粉层细胞的退化 谷物胚乳分化为淀粉性胚乳和糊粉层。当谷物成 熟时，所有淀粉性胚乳细胞死亡，只有糊粉层细胞 还存活。在种子萌发和幼苗形成过程中，糊粉层细 胞合成并分泌水解酶到淀粉性胚乳中，给正在生长 的胚提供营养，一旦完成它们的分泌作用，糊粉层 细胞立即死亡。研究发现糊粉层细胞 DNA 片段化过 程受 GA 促进， ABA 抑制。 活性氧（ ROS ）是糊粉层 PCD 过程中的关键因子。 H 2 O 2 能够使 GA 处理的糊粉层细胞快速死亡，而不 能导致 ABA 处理的细胞死亡； GA 处理的糊粉层， 过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶和超氧化物歧化 酶数量和活性严重下降，最终导致氧化性损伤和细 胞死亡。

2 植物 PCD 的发生 2 ． 2 管状分子（ TEs ）分化 管状分子包括导管分子和管胞，二者为纵向延长、次 生壁木质化加厚的管状死细胞，是维管植物水分和无机 盐的运输通道。 TEs 分化，是高等植物 PCD 的一个典型 例子，也显现了一些接近细胞坏死的形态特征。研究发 现：半胱氨酸（ Cys ）蛋白酶和核酸内切酶参与 TEs 分化； TEs 分化需要次生壁合成和细胞死亡之间的严格协调， 次生壁合成过程中分泌的一种 40KD 丝氨酸（ Ser ）蛋白 酶可能是二者之间的协调因子； TEs 分化包括自溶型和 凝缩型两种细胞死亡方式；暂时性植物非特异性脂类转 移蛋白 ——— TED4 蛋白，抑制蛋白酶活性，并防止其 它活细胞受到将要死亡的细胞渗出的蛋白水解酶活性的 伤害；百日草 TEs 分化过程中液泡破裂引起核降解，且 在液泡破裂之前液泡膜失去选择透性能力。

2 植物 PCD 的发生 2.3 植物病原物互作引发的过敏反应（ HR ） 过敏反应是指由于病原物侵染而引起的局部、快速的细胞死 亡过程。该细胞死亡阻止了病原物进一步扩散，并伴随着一 系列防卫反应，最终导致植物对病原物产生抗性。这些诱导 的防卫反应包括： ROS 的快速产生、细胞壁局部加厚以及 水解酶、抗毒素的产生等。 HR 是由于病原物一个特异的无 毒基因和寄主的一个特异的抗病基因之间非亲和互作而引起 的。近年来许多报道说明 HR 与 PCD 之间的联系： HR 中，烟 草核酸酶被激活，可能参与 DNA 片段的形成； P47 蛋白激 酶调节烟草细胞死亡；水杨酸（ SA ）调节植物病原物互作 中的 PCD ，它与 ROS 的产生有关，低浓度的 SA 能够加速细 胞死亡；一些贮藏酚类的细胞与 PCD 、 HR 有关，并在防卫 反应中发挥关键作用；线粒体变化与植物 HR 相连的 PCD 有 关。

2 植物 PCD 的发生 2.4 植物衰老 衰老包括细胞营养物质的再次利用，是一个由基因控制的细胞 死亡过程。膜完整性和细胞区域化可保持到衰老过程晚期，有极 少数或没有细胞内含物的泄露。植物衰老包括许多细胞形态学变 化：如叶绿体膨胀、线粒体膜和核膜完整性消失、液泡膜破裂， 最后水解酶释放到细胞质中，引起细胞死亡等。研究发现蛋白酶 和核酸酶参与衰老过程：在番茄、拟南芥中发现半胱氨酸蛋白酶 参与衰老过程；传粉诱导的矮牵牛花瓣衰老过程中， DNase 和 RNase 活性增强， Ca 2+ 螯合剂 EDTA 减弱 DNase 和 RNase 活性， 并有片段化 DNA 出现；在衰老的叶片和豌豆心皮中也发现片段化 DNA ，这表明植物衰老与 PCD 密切相关。此外，衰老能够被乙烯 诱导，并伴随 ROS 增加，可被细胞分裂素、乙烯拮抗剂抑制。这 些都暗示衰老过程涉及乙烯和 Ca 2+ 等参与的信号转导途径。

3 PCD 分子调控机制 细胞程序化死亡是由基因控制的、主动的细胞死亡过程。 由于植物 PCD 深入研究较晚，因此对 PCD 相关基因的研究远 没有动物深入。目前，动物细胞凋亡基因 dad-1 、 bcl-2 、 ced- 3 、 ras 、 p53 等已被陆续发现，并且一些基因在植物中具有同 源性，如在拟南芥、水稻中发现 dad-1 同源基因；在拟南芥、 玉米中发现 ras 相关基因等，但是它们在植物中的功能是否与 动物中相同有待于进一步研究。 在动物 PCD 研究中，已发现高浓度的活性氧诱导线粒体通 透性转变孔（ permeability transition pore,PTP ）长时间开放， 线粒体跨膜电位（ Δψ ）下降， ATP 合成降低，细胞色素 C 、 凋亡诱导因子（ apoptosis inducing factor,AIF ）、 Ca 2+ 等释 放到细胞质中，半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）被激活，引起 细胞凋亡。在植物中，许多研究发现活性氧（ ROS ）、 Ca 2+ 、 激素以及多种蛋白信号分子参与 PCD ，并起一定作用。

以糊粉层降解过程中 PCD 为例， 分析 PCD 过程中的 调控和信号转导。 活性氧 (ROS) 是一类具有强氧化能力、能持续进行反应的物质， 如超氧化物、过氧化氢、羟自由基等，可以被超氧化 物歧化酶 (SOD) 、抗坏血酸过氧化物酶（ APX ）和过 氧化氢酶（ CAT ）清除。活性氧同样参与了糊粉层降 解过程中 PCD 的信号转导。实验证明， H 2 O 2 能大大提 高 GA 处理过的糊粉层细胞原生质体的死亡率。用 325mmolL -1 的 H 2 O 2 处理 GA 处理过的原生质体，不到 1h 死亡数量就达到 90% 以上；即使用 3.25mmolL -1 的 H 2 O 2 处理，在 7h 内原生质体的死亡数量也达到 80% 左 右；有可能 GA 处理使得原生质体对 H 2 O 2 更敏感。

Ca 2+ 糊粉层细胞或原生质体内部 Ca 2+ 含量快速增加，同时钙调素 （ calmodulin ， CaM ）也缓慢升高。 GA 处理的原生质体逐渐合成 一系列的天冬氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。而用 ABA 处理的原生 质体中细胞内 Ca 2+ 浓度下降， pH 值迅速上升，有丝分裂原活化的蛋 白激酶（ mitogen-activated protein kinase ， MAPK ）活性升高；而 且检测不到 GA 处理时存在的蛋白酶。 GA 处理时，信号分子 CaM 和 GAMyB 基因及与胚乳动员相关的 α- 淀粉酶基因的表达增强，而与细 胞分裂相关的 MAPK 基因和贮藏球蛋白基因减量表达。 ABA 处理时， 与分裂相关的 Em(early-methioine-labelled-polypeptide) ， Rab16 和 与脱水耐性相关的脱水素（ dehydrin ）基因增量表达，而 α- 淀粉酶 和 GAMyB 的基因则减量表达。

激素类 研究发现，激素与植物 PCD 密切相关：如 IAA 和 CTK 参与 TES 分化； GA 促进糊粉层细胞水解 酶的释放，导致 PCD 发生，而 ABA 拮抗 GA 作用， 抑制水解酶分泌；乙烯诱导玉米根通气组织形成过 程中的 PCD 、胡萝卜原生质体凋亡和植物衰老， CTK 抑制细胞衰老；玉米胚乳发育中的 PCD 过程 需要 ABA 和乙烯之间的一种平衡等。然而，究竟是 一种激素还是几种激素共同起作用，目前尚不清楚。

生长素、细胞分裂素、蔗糖 病原物信号 乙烯 蛋白酶、核酸酶 植物抗毒素、几丁质酶 纤维素酶 激发子 钙流动液泡裂解 自溶 细胞质裂解 细胞壁溶解 管状分子 HR 斑 通气组织 总结：

存在问题 植物 PCD 研究取得了很大进展的同时，仍有一 些问题没有搞清楚：如在 HR 中，病原物进一步侵 染的失败是由于寄主细胞死亡，还是由于寄主细胞 死亡之前病原物的扩散就已经被抑制？ PCD 基因 怎样被调节以确保基因产物在合适的时间地点转录 或活化等？ Ca 2+ 如何诱导 PCD 基因表达，植物特 有的细胞器 ——— 叶绿体在细胞死亡过程中如何变 化？因此，只有清楚植物 PCD 内在的、特有的发 生机制，才能真正了解植物 PCD 。

The end Thank you ！