פרק 6 עמוד 1 פרק 6

סדר העניינים... פרק 6 עמוד 2 חלק ראשון : מבוא - תאור התהליך, סוגי כרומטוגרפיה...  חלק ראשון : מבוא - תאור התהליך, סוגי כרומטוגרפיה...  חלק שני : תאור כמותי, גימלון

חלק ראשון : מבוא מטרות פרק 6 עמוד 3  תאור תהליך כרומטוגרפיה בעמוד  תופעת העיכוב  תאור כללי של סוגי כרומטוגרפיה וחומרי מילוי  ניתוח כרומטוגרמות

תהליך כרומטוגרפיה בעמוד Column Chromatography תהליך כרומטוגרפיה בעמוד Column Chromatography פרק 6 עמוד 4 פאזה נייחת Stationary Phase מריץ ( אלואנט )

עיכוב פרק 6 עמוד 5

מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים ? פרק 6 עמוד 6 הבדלי גודל אינטראקציותהידרופוביות עם הפאזהביולוגיות - ספציפיות הנייחתכימיות - לא ספציפיות אלקטרוסטטיות ואן - דר - ואלס שוני בתכונות הפיזיקליות, הכימיות ו / או הביולוגיות בין מרכיבי תערובת החומרים במרק תכונות הפאזה הנייחת המפתח לתכנון כרומטוגרפיה יעילה

ניתוח כרומטוגרמות פרק 6 עמוד 7 (6.1) s - קריאת הגלאי t - זמן הרצה V - נפח שנאסף s max, t max, V max - נפח, זמן, קריאת גלאי בנקודת המקסימום t max  - סטיית תקן תאור בעזרת פילוג גאוסיאני

השבה של מומס פרק 6 עמוד 8 כמות מומס שיצאה עד זמן t: סה ” כ מומס בעמוד : (6.2) השבה R e

(6.3) כושר הפרדה ודרגת טיהור פרק 6 עמוד 9 כושר הפרדה - רזולוציה R s שיאים מופרדים R s >1.6 דרגת טיהור P u (6.4) רוחב השיא

סוגי תהליכי כרומטוגרפיה פרק 6 עמוד 10 ג ’ ל פילטרציה Gel Filtration Gel Permeation Chromatography, GPC Size Exclusion Chromatography, SEC שינויים בעיכוב נובעים מהבדלי... סוג כרומטוגרפיה גודל המולקולה ישומים חלבונים, סילוק יונים פאזה הפוכה Reveres Phase Chromatography, RPC אינטראקציות הידרופוביות ויטמינים, פפטידים חלבונים, אנטיביוטיקה כרומטוגרפיה הידרופובית Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC אינטראקציות הידרופוביות ויטמינים, חלבונים, אנטיביוטיקה

סוגי תהליכי כרומטוגרפיה ( המשך ) פרק 6 עמוד 11 ספיחה Adsorption Chromatography שינויים בעיכוב נובעים מהבדלי... סוג כרומטוגרפיה אינטראקציות לא - ספציפיות ישומים חלבונים, DNA, RNA Perfusion Chromatography אינטראקציות שונותחלבונים חילוף יונים Ion Exchange Chromatography, IEC אינטראקציות חשמליות חלבונים, חומצות אורגניות כרומטוגרפית זיקה Affinity Chromatography אינטראקציות ספציפיות ( ביולוגיות ) פפטידים, חלבונים

חומרי מילוי Packing Materials פרק 6 עמוד 12 ג ’ ל (GPC) חלקיק נקבובי Perfusion Chromatography

ג ’ ל - פילטרציה עמוד 13 פרק 6 ג ’ ל פילטרציה Gel Filtration Gel Permeation Chromatography, GPC Size Exclusion Chromatography, SEC נפוץ לקביעת משקל מולקולרי שימוש בדוגמאות כיול מתאם שכיח : עיכוב : הבדלי גודל Bio-Gel (Polyacrylamid) Sephadex (Dextran) Agarose Styragel (Polystyren)

כרומטוגרפיה הידרופובית פאזה הפוכה עמוד 14 פרק 6 עיכוב : אינטראקציות הידרופוביות ביו - פולימרים וביוכימיקלים הידרופוביים אינטראקציות חלשות קבוצות butyl או phenyl קשורות למצע נייח אלואנט מימי, ריכוז מלח גבוה כרומטוגרפיה הידרופובית Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC כרומטוגרפית פאזה הפוכה Reveres Phase Chromatography, RPC אינטראקציות חזקות alkanes קשורים למצע נייח ( 8-18 פחמנים ) אלואנט אורגני

חילוף יונים Ion-Exchange Chromatography עמוד 15 פרק 6 עיכוב : אינטראקציות חשמליות חלבונים, חומצות אמינו, חומצות אורגניות יונים קשורים Fixed ions יונים נגדיים Counter ions חילוף ( הפיך ) של יונים נגדיים ביונים בעלי סימן זהה מהפאזה הניידת מחליף קטיונים

צעד נוסף לשיפור ההפרדה... צעד נוסף לשיפור ההפרדה... עמוד 16 פרק 5  שינויי בהרכב הממס (Gradient methods) מחלף יונים - הגדלה הדרגתית של ריכוז מלח כרומטוגרפיות הידרופוביות - שינוי ריכוזי הממיסים באלואנט  הזרקת תוספים (Displacement chromatography) dextran sulfate carboxymethyl strach imminodiacetic acid (IDA)

כרומטוגרפית זרימה רדיאלית Radial flow chromatography כרומטוגרפית זרימה רדיאלית Radial flow chromatography עמוד 17 פרק 5

זרימה רדיאלית זרימה רדיאלית עמוד 18 פרק 5 יתרונות הקטנת מפל לחץ זרימה אחידה בעמוד רגישות נמוכה לזיהומים מוצקים הגדלת הספיקה בנפח עמוד נתון ( יעילות כלכלית גבוהה יותר )

גימלון כרומטוגרפית זרימה רדיאלית עמוד 19 פרק 5 אין שינוי בקוטר העמוד ( “ הדרך ” שעובר הנוזל הזורם במצע הנקבובי ) הגדלת אורך העמוד גימלון לינארי ! הגדלת נפח העמוד, נפח הדוגמא, הספיקה ונפח האלואנט באותו פקטור - בלי שינוי בזמן ההפרדה

כרומטוגרפיה רציפה עמוד 20 פרק 5 Annular Chromatography זמן שהייה מיקום איסוף התוצר אין מגבלה על סוג המילוי

עמודי כרומטוגרפיה תעשייתיים עמוד 21 פרק 5 זרימה רדיאלית

סיכום חלק ראשון פרק 6 עמוד 22  תאור תהליכי כרומטוגרפיה בעמוד  עקרון הפעולה  עיכוב  חומרי מילוי שונים  תאור כמותי של כרומטוגרמות : פילוג גאוסיאני  כלים לחישוב כושר הפרדה, השבה ודרגת טיהור