שימוש במגשרים כימיים ללימוד מרחקים בין הליקסים במשחלף NhaA דרור לנה סמולנסקי

o-PDM BMH MTS 9.39 Å Å

-tryp +trypBMH +tryp o-PDM +tryp MTS +tryp INHIBITOR

Mutant protein Activity ממברנות הפוכות T132C / G338C - אין פעילות AO+ רמת פלואורסנציה בסיסית H+H+ ATP H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ AO quenching AO+ AO H+H+ H+H+ Na+ / Li+ Na + H+H+ AO+ H+H+ dequenching AO

Mutant protein ActivityNaCl treatment No treatment o - PDM BMH

Mutant protein ActivityLiCl treatment No treatment o-PDM BMH

גילוי שיירים חשופים לתמיסה IPTG NEM סימון ציסטאינים חשופים לתמיסה Sonication FL- NEM סימון ציסטאינים שאינם חשופים לתמיסה

Fluorescent picture 1sec exposure Coomassie dye גילוי שיירים חשופים לתמיסה יש חלבון בכל הבאריותהשירים חשופים לתמיסה T132CG338C +NEM -NEM

מסקנות הליקסים 4 ו – 11 קרובים זה לזה במבנה השלישוני של החלבון. 2.מגשרים יכולים לשחזר את פעילות החלבון המוטאנט, ולאפשר לו להעביר H + ו Li +. הדבר מלמד על הצורך בקרבה בין ההליקסים 4 ו 11על מנת לאפשר את פעילות NhaA. 3.T132 ו – G338 ככל הנראה חשופים לתמיסה בממברנת התא. 4.יתכן ו - NEM יכול לחדור למרווח הממברנלי ולסמן את T132 ו G338 בממברנת התא.