1. 질량분석기를 이용한 검사법 소개 및 특수검사실 현황
질량분석기를 이용한 검사법 소개 및 특수검사실 현황
생화학파트
특수검사실 안철희

2. 목 차 1. MS System의 측정원리 및 구성 2. HPLC for introduction 3. Ion Production
목 차
1. MS System의 측정원리 및 구성
2. HPLC for introduction
3. Ion Production
4. MS/MS Operations 및 Ion transfer
5. Method Development
6. 검사 진행 과정
7. 현황
8. 고찰

3. 1. Mass Spectrometry
1) An anayltical technique that measures the mass-to-charge ratio(m/z) of an ion 2) Quantification of an analyte –by measuring the response obtained relative to an internal standard

4. The essential components of an MS system
MS/MS
TOF
MS TOF hybrids
FTMS GC LC
Solid
Data
Ioniza-
tion
Mass
Seperation
Introduction
Detec-tion
control
EI/CI
ESI/APCI
MALDI/SELDI
Ion Counting
A to D conversion
Quantitative
Qualitative

5. AB SCIEX사의 API 4000

6. LC-MS/MS 의 구성

7. 2. HPLC for introduction
1) Column - Polarity, pH - C18, Reversed phase 2) Mobile Phase - Water, Methanol, Acetonitrile - Buffer: 2 ~20 mM Ammonium formate, Ammonium acetate - pH: 0.1% Formic acid, 0.1-1% Acetic acid - Filtering, Degassing 후 사용

8. 3. Ion Production Atmospheric Pressure Ionization Sources
1) ElectroSpray Ionization(ESI)
- Heated auxiliary gas flow
2) Atmospheric Pressure Chemical Ionization(APCI)
- Corona discharge
3) Atmospheric Pressure Photo-Ionization(APPI)
- UV radiation, dopant

9. Electrospray Ionization(ESI)

10. 4. MS/MS Operations Scan modes type MS1(Q1) MS2(Q3) Product Ion
Scanning
Static
Precursor Ion
Neutral Loss
SRM*(MRM**)
SRM*: Selected Reaction Monitoring
MRM**: Multiple Reaction Monitoring

11. SRM(MRM) Mode Q1
Precursor ion
fragmentation
Product ions Q3

12. Ion Transfer

13. 5. Method Development 1) Data Review -물질의 분자량, 구조
2) Analyte, Internal Standard 구매
3) Mass condition experiment - MS tuning, MRM, Ionization source, …
4) HPLC condition experiment -Column, Mobile Phase, pH…
5) 전처리 과정 Setup
- Matrix effect, Recovery test, Calibration curve…
6) Evaluation
-Precision test(CLSI guideline EP10 외), Comparison test…
7) 원가 분석 및 수가 신설 요청
8) 검사 개시

14. 6. 검사 진행 과정
준비사항-Mobile phase, Column, Mass Equilibration 1) 검체 준비(해동) -Calibrator, Q.C., 환자검체 2) In house Calibrator, Q.C.-Blank Serum(Plasma)에 Spiking 3) Protein precipitation-유기용매(Acetonitrile)로 처리, IS 첨가 4) 1분간 Vortexing 후 10분간 원심분리(14,000 rpm) 5) 상층액을 Microplate 에 분주 6) HPLC autosampler를 통해 Mass에 주입 7) Quantitate-Analyst software 의 Quantitation Wizard 8) 결과 보고

15. 검사 Protocol

16. Mass condition

17. LC Condition

18. Data file

19. Quantitation

20. 7. 현황 1 2007년 12월 기기 도입 및 설치 2008년 1월 이운형 (M.D) 외부교육 후 투입
2007년 12월 기기 도입 및 설치
2008년 1월 이운형 (M.D) 외부교육 후 투입
2008년 4월 안철희 (M.T) 투입
2008년 7월 Lamotrigine 검사 개시
2008년 11월 Itraconazole, OH-itraconazole 검사 개시
2009년 3월 Warfarin 검사 개시
2009년 8월 Imatinib 검사 개시
2009년 11월 Meloxicam 검사 개시 – research
2009년 12월 Metformin 검사 개시 – research
2010년 2월 Immunosuppressants (Sirolimus) 평가
2010년 6월 Topiramate 검사 개시
2010년 8월 Levetiracetam Setup 시작

21. 현황 2(검사건수)

22. 8. 고 찰
1) 보험 수가: 건당 41,223원 2) 추후 계획 -Newborn Screening Test 검사 평가 진행 중 -Drug Setup - Levetiracetam -Biomarker Setup- Vitamin D2 & D3 3) 임상과 협의하여 검사종목 확대 예정