1. بسم الله الرحمن الرحيم

2. بِسْمِ اللّهِ الرَّحْمَنِ الرَّحِيمِ يُؤتِي الْحِكْمَةَ مَن يَشَاء وَمَن يُؤْتَ الْحِكْمَةَ فَقَدْ أُوتِيَ خَيْرًا كَثِيرًا وَمَا يَذَّكَّرُ إِلاَّ أُوْلُواْ الأَلْبَابِ صدق الله العلي العظيم

3. س: اذا سقطت منك ابرة في كومة قش كيف تجدها؟

5. س: هل هذه الطريقة ناجحة لإيجاد الإبرة؟

6. هل تعتقد في مخيلتك ان تكون الابرة عملاقة كي نجدها؟

7. ما هو شعورك اذا وصلت للهدف؟

8. س:ايهما افضل هل: 1. ان تبحث عن ابرة واحدة في كومة قش؟ 2
س:ايهما افضل هل: 1.ان تبحث عن ابرة واحدة في كومة قش؟ 2. او ان تبحث عن ملايين الابر؟ الحل :

9. Real-Time PCR الوقت الحقيقي لتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل
صباح نعمة الفتلاوي
بورد امراض\مناعة سريرية
مركزامراض و زراعة الكلية
مدينة الصدر الطبية
e.mail:

10. RT PCR
التمهيد (المقدمة) Introduction تعريف تقنية الPCR Definition مفهوم الPCR Concept of PCR المبادئ Principle التطبيقات Applications حل المشاكل العملية Trouble shouting

11. اهداف المحاضرة الهدف العام الهدف الوسيط الاهداف السلوكية
انشاء مجتمع متعلم و واعي يواكب التطور
الهدف الوسيط
ان يعرف الطالب ما هو ال PCRو مبدأ عمله و تطبيقاته
الاهداف السلوكية
ان يعرف الطالب ال PCR
ان يعرف الطالب ال PCR بأسلوبه
ان يوضح مبدأ عمل ال PCR
ان يطبق عمليا استخداماته
ان يحلل النتائج المختبرية
ان يفرق بين تقنية ال PCR التقليدي عن ال RT PCR
ان يحل المشاكل الناتجة من اجراء الفحص و تقييم النتائج و تفسيرها

13. Polymerase Chain Reaction (PCR)

14. History
PCR was first conceived in April, 1983 by Kary Mullis.
Mullis and Faloona, Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction.
In 1989 PCR was selected as the major scientific development and Taq DNA polymerase as molecule of the year by the science magazine
In 1993 Kary Mullis was awarded the Nobel Prize in chemistry for this achievements.
Kary B. Mullis

15. Real-Time PCR
Quantitative PCR technique allows the simultaneous amplification and detection of the target.
Is called “real-time PCR” because it allows the scientist to actually view the increase in the amount of DNA as it is amplified.

16. PCR Cycle - Step 1 - Denaturation by Heat
Target Sequence
Target Sequence

17. PCR Cycle - Step 2 - Biotinylated Primer Pair Anneals to Ends of Target Sequence3’ 5’ 5’ 3’
Biotin
Primer 1
Primer 2
Biotin 3’ 5’ 5’ 3’
Target Sequence

18. PCR Cycle - Step 3 - Taq DNA Polymerase Catalyses Primer Extension as Complementary Nucleotides are Incorporated
Target Sequence 3’ 5’ 5’ 3’
Biotin
Primer 1
Taq DNA
Polymerase
Primer 2
Biotin 3’ 5’ 5’ 3’
Target Sequence

19. End of the 1st PCR Cycle - Results in Two Copies of Target Sequence
Biotin
Biotin
Target Sequence

20. Thermus aquaticus:

21. Target Amplification 7 cycle = 128 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon
Number Amplicon copies of target
Number of cycle 2 1 4 8 3 16 32 5 64 6
1,048,576 20
1,073,741,824 30
1 cycle = 2 Amplicon
2 cycle = 4 Amplicon
3 cycle = 8 Amplicon
4 cycle = 16 Amplicon
5 cycle = 32 Amplicon
6 cycle = 64 Amplicon
7 cycle = 128 Amplicon

23. Real-Time PCR

24. Real-Time PCR
Real-time PCR monitors the fluorescence emitted during the reaction as an indicator of amplicon production at each PCR cycle (in real time) as opposed to the endpoint detection

25. 2a. excitation filters
2b. emission filters
1. halogen tungsten lamp
4. sample plate
3. intensifier
5. ccd detector 350,000 pixels

26. Real-Time PCR Applications - I * quantitation of gene expression
* quality control and assay validation
* biosafety and genetic stability testing
* drug therapy efficacy / drug monitoring
* viral quantitation
* pathogen detection

27. Results Analysis:
Real-Time PCR

28. Refrences
1. Bell, J The polymerase chain reaction.Immunol. Today 10: A very useful site for molecular biology, containing links to many informative sites. Updated regularly.

29. و ما اوتيتم من العلم الا قليلا
بسم الله الرحمن الرحيم
و ما اوتيتم من العلم الا قليلا
صدق الله العلي العظيم
Thank you