2. زراعة الأنسجة النباتية
Plant tissue culture
زراعة الأنسجة النباتية

3. ما هو المقصود بزراعة الأنسجة النباتية ؟
ﻳﻄﻠﻖ ﻣﺼﻄﻠﺢ Tissue culture ﻋﻨﺪﻣﺎ ﻳﺘﻢ ﺯﺭﺍﻋﺔ ﺃﻯ ﺧﻠﻴﺔ ﺃﻭ ﻧﺴﻴﺞ ﺃﻭ ﺣﺘﻰ ﻋﻀﻮ ﻧﺒﺎﺗﻰ ﺩﺍﺧﻞ ﺃﻭﻋﻴﺔ ﺯﺟﺎﺟﻴﺔ
ﻣﺤﺘﻮﻳﺔ ﻋﻠﻰ ﺑﻴﺌﺔ ﻏﺬﺍﺋﻴﺔمتوازنة ﻭﺗﺤﺖ ﻇﺮﻭﻑ ﺑﻴﺌﻴﺔ ﻣﻌﻘﻤﺔ ﻭﻣﺘﺤﻜﻢ ﻓﻴﻬﺎ وبالتالي تكشفها إلى أعضاء وتكوين نباتات كاملة.

4. مزايا زراعة الأنسجة النباتية
1-الحصول على كميات هائلة من النباتات على مدار العام دون التقيد بوقت محدد للزراعة.
2- الحصول على نباتات متجانسة من حيث صفات البنية الشكلية والصفات الوراثية وإمكانية إنتاج نباتات مشابهة للأمهات True to type .
3- التغلب على معظم مشاكل التكاثر والتربية وأحيانا تكون الحل الوحيد للتكاثر أو التربية .
4-طريقة اقتصادية سهلة وسريعة .
5- الإنتاج المكثف والسريع للبادرات بنوعيات جيدة.
6- إنتاج نباتات يصعب إنتاجها بالطرق التقليدية.
7- استخدام هذه التقنية في تربية النبات والتحسين الوراثي.
8-الحصول على نباتات خالية من الأمراض وخاصة الفيروسية .

5. تجهيزات معمل زراعة الأنسجة النباتية
تعتبر الحاجة الملحة الى توفير ظروف معقمة هي الدافع الاساسي لاهمية مراعاة تجهيز المعمل بشكل يقلل من التلوث الذي قد يحصل للبيئة او بعد الزراعة يلزم تعقيم جميع الادوات و البيئة والمعمل .
* منضدة التعقيم .
*جهاز تقطير الماء مرتين .
*جهاز لضبط الحموضة pH Meter .
Your Text Here
Your Text Here
*غرفة تحضين.
Your Text Here
Your Text Here

6. طرق الاكثار بزراعة الانسجة النباتية
الاجزاء النباتية
القمم النامية للبراعم - الجذور - أي جزء من الورقة - برعم جانبي - جزء من الحزم الوعائية للجذور - أو يتم استخدام المتك أو حبوب اللقاح المعزولة أو الأجنة المعزولة عقب التلقيح والإخصاب أو نستخدم البويضات أو المبيض كله وما يحمله من بويضات بعد إزالة أغلفة المبيض
مباشرة
تتميز بانها اكثر امانا ومضمونة لانتاج نسبة عالية من النباتات مشابهه للام
الكالوس Callus
وهو عبارة عن مجموعة من خلايا مرستيمية منتظمة أو غير منتظمة ونعني بكلمة منتظمة أي أنها خلايا متشابهة لا يمكن تمييزخلايا خاصة بالجذر أو الساق أو الأوراق
غير مباشرة
من اهم عقباتها التغير الوراثي الذي قد يرافقها

7. المباشرة
غير المباشرة
Content Layouts

9. شروط نجاح زراعة الأنسجة
لكي تتم عملية زراعة الأنسجة بنجاح يجب أن تتوافر في المعمل عناصر ضرورية وأهم شرطين يجب توافرهما : النظام والنظافة حتى يتم فصل الجزء المراد زراعته من النباتات الأم إلى بقية الزراعة بطريقة سليمة وسريعة .
وإلى جانب النظام والنظافة فمن الأهمية بمكان التأكد من نظافة الكيماويات المستعملة كذلك الماء المقطر مرتين المستخدم في تحضير البيئات .

10. مراحل إكثار النباتات بطريقة زراعة الأنسجة
المرحلة الأولى : تعتبر هذه المرحلة من أهم مراحل زراعة الأنسجة حيث يتم فيها فصل النسيج النباتي تحت ظروف التعقيم و زراعته فى بيئة صناعية ثم حفظه فى حضانات تحت درجة حرارة ورطوبة وإضاءة معينة فى المعمل .
 هذه المرحلة هامة جداً وتعتبر من أهم مراحل زراعة الأنسجة والغرض منها ببساطة هو الحصول على مزرعة معقمة بمعنى عدم تلوث البيئة الغذائية المستعملة أو الأنسجة المستخدمة فى الزراعة  بأى كائن دقيق يسبب تعفنها وموتها . ويأتى ذلك بتعقيم الأدوات المستعملة وتعقيم البيئة المستخدمة وكذلك تعقيم الأنسجة المستعملة والتى تكون عبارة عن أجزاء من النبات المراد إكثاره مثل القمم النامية للسيقان والجذور أو أجزاء من السيقان أو الأوراق أو نسيج الكلس الخ. ثم إتمام الزراعة أيضاً فى جو وحيز معقم.

11. مراحل إكثار النباتات بطريقة زراعة الأنسجة
المرحلة الثانية : الهدف من تلك المرحلة هو زيادة الأعضاء والتراكيب التي تعطى في النهاية النبات الكامل لذلك تعتمد تلك الخطوة على زيادة إنتاج الأعضاء العرضية أو زيادة تكوين الأجنة أو زيادة تنشئة النموات الجانبية Axillary shoots   وعندما يكون الكلس خطوة وسطية يكون الهدف في تلك المرحلة هو زيادة نمو الكلس ثم تخليق النموات العرضية الخضرية منها أو تكوين الأجنة الجسمية      

12. مراحل إكثار النباتات بطريقة زراعة الأنسجة
المرحلة الثالثة : إعادة زراعة النباتات و نقلها من المعمل إلى الصوب لإعادة أقلمتها فى التربة حيث تستخرج النباتات من الأنابيب ثم تزرع في إصيصات صغيرة تحتوى على رمل وتربة زراعية مع تغطيتها بالبلاستيك الشفاف للحفاظ على الرطوبة ثم يزال هذا الغطاء تدريجيا . بعد ذلك يكون جاهزا للتوزيع على المزارعين لإعادة زراعة الشتلات في الحقول
يمكن اعتبار أن التكاثر عن طريق زراعة الأنسجة ناجحاً إذا توج بنجاح نقل النبات الناتج فى الأنبوبة المعقمة إلى التربة واستمرار نموه وللوصول لهذه الغاية يجب العمل على أقلمة أو تقسية النباتات  قبل نقلها للظروف الصعبة المحتمل أن تواجهها فى التربة  

13. مكونات البيئة الغذائية
عناصر غذائية كبرى -صغرى
أنواع السكريات المختلفة كالسكروز والجلوكوز وتعتبر هذه السكريات مصدر الكربون أيضاً
مصدر
الأملاح
مصدر
عضوي
مصدر
الفيتامينات
المكونات
مثل الثيامين Thiamin , وفيتامين B ,وحامض الأسكوربيك (فيتامينc
الأجار
منظمات النمو
أوكسينات
سيتوكاينين
الجبرلينات

14. طريقة تحضير البيئة الغذائية عرض لطريقة تحضير البيئة وتعقيمها

15. إعداد العينة النباتية :
-نبدأ عملية تعقيم السطحي الأجزاء المراد الإكثار عن طريقها سواء كانت ( أوراق، درنات، براعم عقد)
-بعد ذلك يتم غمر النسيج النباتي في محلول التعقيم وذلك لقتل الملوثات الموجودة علي سطح النسيج النباتي بـ5% محلول الكلوروكس .
-يتم إضافة المنظفات مثل (Tween-20 ) والتي تعتبر مواد ناشرة تزيد من كفاءة محاليل التعقيم. - بعد أن تتم عملية التعقيم السطحي للنسيج النباتي يجب غسيل النسيج بالماء المعقم والمقطر مرتين مع تكرار عملية الغسيل بالماء حتى يتم إزالة المحاليل السابقة.
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
-نقوم بإزالة حواف الأنسجة المتضررة من المحاليل المنظفة ويتم تقسيم النسيج الي أجزاء بمساحات من 0.5-1سنتيمتر مكعب
- زراعة الأجزاء في الوسط الغذائي المناسب يلف على الانابيب شريط محكم ثم نضعه في غرفة الحضن مع تعديل مدة الإضاءة ودرجة الحرارة -ولابد مراعاة العمل في غرفة حماية بقرب لهب وفي ظروف معقمة وأدوات معقمة.

16. مرحلة الأقلمة والنقل للبيئة الخارجية تأسيس المزارع النسيجية
مراحل زراعة الأنسجة
مراحل زراعة الأنسجة
مرحلة الأقلمة والنقل للبيئة الخارجية
تأسيس المزارع النسيجية
التجذير
التضاعف

17. تأسيس المزارع النسيجية
الهدف الرئيسي لهذه المرحلة هو الحصول علي مزرعة نسيجية تحتوي علي الجزء النباتي المفصول من النبات الأم بصورة معقمة و بحيث لا يحتوي هذا الجزء علي أي ملوثات مرضية و محتفظاً بحيويته و التي تمكنه من النمو في هذه المرحلة ثم التطور في المراحل التالية، و تتضمن هذه المرحلة عملية تجهيز و فصل الجزء النباتي من النبات الأم
ويتم معالجة الجزء النباتي المفصول و المراد زراعته ببعض المواد المضادة للأكسدة
(Anti oxidants) قبل التعقيم داخل كابينة الزراعة لتخلص من المواد الفينولية التي قد تفرزها الاجزاء المزروعة وقد تؤدي الى تثبيط نموها او قتلها
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

18. منظمات النمو مثل الأكسينات منها والسيوكينيات مثل الكينتين
مرحلة التضاعف
الهدف منها زيادة إعداد النباتات فى المعمل حيث تنقل النباتات النامية التي تكونت في المرحلة الاولى إلى بيئة أخرى ذات تركيب كيميائي معين لتشجيع تكوين فروع جديدة للنباتات ويتم تكرار هذه العملية حتى نحصل على الأعداد المطلوبة من النباتات
وتعتمد على عدة عوامل منها :
Your Text Here
Your Text Here
نوع الوسط الغذائي
أشهر أنواع الاوساط تعتبر بيئة موراشيجي وسكوج MS من أشهر البيئات المستخدمة لإكثار العديد من الأنواع النباتية والتى يمكن تحضيرها معمليا أو شرائها هناك أيضا بيئة تستعمل لزراعة وإكثار النباتات الخشبية وتسمى WPM
Your Text Here
منظمات النمو مثل الأكسينات منها
اندول حمض الخليك
نفثالين حمض الخليك
NAA -IAA
والسيوكينيات مثل الكينتين
Your Text Here

19. مراحل زراعة الأنسجة

20. فيديو (الزراعة + التضاعف)
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

21. مرحلة التجذير
إن الأفرع المتحصل عليها في الخطوة السابقة يتم تحفيزها لتكون جذور داخل الأوعية في هذه المرحلة حيث يتم تدعيم الأوساط الغذائية في هذه المرحلة بالاوكسينات الخاصة بتحفيز التجذير وبتركيز مناسب لتكون الجذور طبيعية لضمان نمو النبيتات خارج الانابيب.
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

22. مرحلة الأقلمة والنقل للبيئة الخارجية
تعرف الأقلمة بأنها عملية تهيئة النباتات النسيجية للنمو في الظروف الطبيعية كنباتات ذاتية التغذية ِAutotrophic .وهذه العملية مهمة للنباتات الناتجة من زراعة الأنسجة (Transplants) والتي تكون غير مهيأة لتحمل الظروف البيئية الخارجية،
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

23. لماذا؟
من المعروف أن النباتات الناتجة من زراعة الأنسجة تكون حساسة جداً نظراً لنموها وتطورها في مزارع ذات طبيعة خاصة تتوفر فيها كل احتياجات النبات، و من ناحية أخري فإن عملية التمثيل الضوئي في مزارع الأنسجة تتم بمعدلات ضئيلة جداً مقارنة بالنبات النامي في الخارج، و لذلك تحتاج نباتات زراعة الأنسجة إلي فترة أقلمة حتى يمكنها النمو في الصوب ثم الحقل بدون أي مشاكل.
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

24. كيف تتم عملية الأقلمة؟
* يتم غسل النباتات التي تم تجذيرها بعد اخراجها من الانابيب اكثر من مرة .
* تحديد التربة المناسبة بعد تعقيمها .
* توفير رطوبة عالية يتم خفضها تدريجيا حتى يستطيع النبات التأقلم .
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here

25. الظواهر المصاحبة لعملية الأقلمة :-
نتيجة عملية الأقلمة تحدث العديد من التغيرات الكيميائية والفسيولوجية والمورفولوجية
أولاً التغيرات الكيميائية والفسيولوجية :- - زيادة نسبة الماء المرتبط غير الحر زيادة نسبة السكر المختزل وغير المختزل وقلة النشا . - تحول البروتينات إلي أحماض أمينية .
ثانياً التغيرات المورفولوجية :- - زيادة الطبقة الشمعية علي الأوراق للحماية من البرودة . -القوام الجلدي للأوراق . -نقص الحجم , حجم الأوراق يقل . -زيادة نسبة المادة الجافة . -قلة نسبة الماء القابلة للتجمد نتيجة ارتفاع الضغط الأسموزي .
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here
Your Text Here