2. Reproduction Techniques in Animals
تکنیک های تولید مثلی در دام
Reproduction Techniques in Animals
Presented by: A. Riasi
Ph. D. in animal nutrition and Physiology

3. Sex Determination Technique
تکنیک کنترل جنسیت
Sex Determination Technique

4. اهداف این جلسه 1- اهمیت کنترل جنسیت نوزادان چیست؟
2- نسبت جنسی نوع اول، دوم و سوم چگونه تعیین می شود؟
3- روش های کنتر ل جنسیت قبل از لقاح چگونه اجرا می شوند؟
4- روش های کنترل جنسیت بعد از لقاح چگونه اجرا می شوند؟

5. اهمیت کنترل جنسیت نوزادان
کنترل جنسیت از جنبه های مختلف اهمیت دارد:
جنبه های اقتصادی
جنبه های اجتماعی و فرهنگی
جنبه های سلیقه ای

6. نسبت های جنسی انواع نسبت جنسی: نسبت جنسی نوع اول (Primary sex ratio)
نسبت جنسی نوع دوم (Secondary sex ratio)
نسبت جنسی نوع سوم (Tertiary sex ratio) ry

7. روش های کنترل جنسیت روش های کنترل جنسیت قبل از لقاح
دست کاری کلنیکی زمان تلقیح مصنوعی و زمان تخمک ریزی
ایجاد شرایط مناسب برای فعالیت اسپرم های دارای کروموزم X یا Y
جدا سازی اسپرم های دارای کروموزم X و Y ry

8. روش های کنترل جنسیت روش های کنترل جنسیت بعد از لقاح تهیه ی کاریوتایپ
واکنش های ایمینولوژیک
تفاوت های متابولیکی
استفاده از تکنیک PCR
استفاده از تکنیک FISH ry

9. زمان تلقیح سرعت شنای اسپرم های داری کروموزم Y و X متفاوت است.
جفت گیری قبل از تخمک ریزی احتمال ماده زایی را افزایش می دهد.
جفت گیری همزمان یا بعد از تخمک ریزی نر زایی را افزایش می دهد. ry

10. فراهم کردن شرایط مناسب برای اسپرم های X و Yry

11. روش های مختلف جدا سازی اسپرم های دارای کروموزوم های X و Y:
گرادیان آلبومین
شنا کردن به سمت بالا
سانتریفوژ کردن
الکتروفورز
آنالیز فلوسیتومتری ry

12. جدا سازی اسپرم های X و Y
اسپرم های دارای کروموزم X اندکی سنگین وزن تر هستند. پس از 30 دقیقه سانتریفوژ کردن انتظار می رود اسپرم های حاوی کروموزم X در ته لوله قرار گیرند.

13. جدا سازی اسپرم های X و Y

14. جدا سازی اسپرم های X و Y

15. جدا سازی اسپرم های X و Y

16. جدا سازی اسپرم های X و Y

17. جدا سازی اسپرم های X و Y

18. کنترل جنسیت پس از لقاح
روش های کاریوتایپی:
دقت این روش ها کمتر از 70 درصد است، با این وجود از این روش برای جدا سازی رویان های نر و ماده تا قبل از لانه گزینی می توان استفاده کرد.

19. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
واکنش های ایمینولوژیک:
اساس این روش اندازه گیری آنتی بادی تولید شده بر علیه آنتی ژن H-Y در رویان های دارای جنسیت نر است.
گزارش شده است که این روش برای تعیین جنسیت نوزادان متولد شده تا حدود 80 درصد دقت دارد.

20. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
تفاوت های متابولیکی:
رویان های نر و ماده در مرحله ی قبل از لانه گزینی دارای تفاوت های متابولیکی هستند که می تواند مبنایی برای شناسایی و جداسازی آنها باشد.
رویان های ماده دارای برخی آنزیم های وابسته به کروموزم X هستند و فعالیت این آنزیم ها در ماده ها(XX) دو برابر نرها (XY) است.

21. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
استفاده از واکنش زنجیره ی پلی مراز (PCR):
اساس این روش شناسایی توالی ویژه ای از بازها در DNA رویان است که تنها در کروموزم Y وجود دارد و باین ترتیب می توان رویان های نر و ماده را از هم شناسایی کرد و مراحل مختلف دارد.
ایجاد چند تخمک ریزی در حیوان دهنده
تلقیح مصنوعی حیوان دهنده در زمان مناسب NA

22. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
جمع آوری رویان ها بفاصله ی 6 تا 8 روز پس از تلقیح
برداشت چند سلول از رویان با روش بیوپسی
انکوباسیون سلول های برداشت شده با محلول لیزکننده در دمای 50 درجه سانتی گراد به مدت نیم ساعت.
انکوباسیون نمونه ها با آنزیم پروتئیناز در دمای 50 درجه ی سانتی گراد به مدت یک شب NA

23. افزودن یک حجم فنل:کلروفرم به لوله ی آزمایش و هم زدن شدید لوله
سانتریفوژ کردن لوله در دور و دور ریختن مایع فوقانی
اضافه کردن دو حجم یخ خشک به لوله ورسوب دادن DNA
سانتریفوژ کردن لوله به مدت 3 دقیقه و استخراج پلت DNA از ته لوله
تکثیر DNA در دستگاه PCR
تهیه گسترش DNA با روش الکتروفورز بر روی ژل آگاروز
مقایسه گسترش تهیه شده با گسترش مربوط به نمونه استاندارد
کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه) NA

24. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)

25. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
استفاده از تکنیک FISH:
در روش FISH کروموزم ها با استفاده از یک DNA علامت گذاری می شوند.
اساس این روش هیبریداسیون با کمک نورفلورسنت است.
از این تکنیک برای شناسایی کروموزم های جنسی X و Y می توان استفاده کرد. NA

26. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)
در این روش توالی ویژه DNA نرها شناسایی می شود.
با کمک میکرومانیپولاتور یک یا دو سلول از رویان جدا می شود.
برای این منظور یک سورخ کوچک در پوشش بیرونی رویان (زوناپلوسیدا) ایجاد می شود و امکان وارد کردن یک میکروپیپت (با قطر 35 میکرون) به داخل رویان فراهم می شود.
با کمک میکروپیپت یک سلول از سلول های رویان برداشت می شود. NA

27. کنترل جنسیت پس از لقاح (ادامه)NA