1. کنترل کیفی در میکروب شناسی
رشیدی-سوپروایزر بیمارستان باهنر

4. سه مرحله از فعاليت هايي كه نتايج روشهاي آزمايشگاهي را تحت تاثير قرار مي دهند
نوع فعاليت
Pre analytical
پيش آزمايش
درخواست آزمايش
آماده سازي بيمار
جمع اوري نمونه
انتقال نمونه
Analytical
آزمايش
انجام روش هاي آزمايش بر روي نمونه
Post analytical
پس آزمايش
توضيح نتايج
ارائه نتايج
بازنگري نتايج
عملكردهاي انجام شده بر اساس نتايج

5. نكات مورد توجه در هنگام دريافت نمونه
آيا نمونه معرفي كننده شرايط عفونت ميباشد
آيا در ظرف مناسبي جمع آوري شده است
آيا از ورود فلور نرمال جلوگيري شده است
آيا نمونه در زمان مناسبي گرفته شده و در محيط ترانسپورت قرار داده شد
يك نمونه غير قابل قبول داراي خصوصيات زير است
1-نمونه فاقد مشخصات است.
2-قسمت خارجي ظرف نمونه آلوده ميباشد.
3- نمونه در ظرف نامناسبي قرار دارد.
4- فاصله زيادي بين زمان نمونه برداري و تحويل آن به آزمايشگاه وجود دارد.
5-ميزان نمونه كافي نيست.

6. ميزان قابل قبول در ارزيابي موارد ذكر شده بصورت زير مي باشد 1) 5 درصد ويا كمتر از كشتهاي خون بايد فقط شامل يك نمونه باشد. 2) 3 درصد ويا كمتر از كشت هاي خون مي تواند حاوي فلور نرمال پوست باشد 3) 10 درصد وياكمتراز نمونه هاي ادرار بايد داراي كلني كانت در رنج (2^10- 4^10) بعنوان انديكاتور آلودگي داشته باشند. 4) بيشتر از 3 كشت خون در يك دوره 24 ساعته بيش از سه نمونه مدفوع برای آزمايش انگل ويا نمونه گيري مجدد از هر نوع نمونه براي كشت نبايد شامل بيش از 2% همه موارد باشد . 5) حجم خون كمتر از ميزان استاندارد در 5% بطري هاي كشت خون وجود داشته باشد .

7. امكانات و تسهيلات مورد توجه در آزمايشگاه
1- تهويه و درجه حرارت و رطوبت
2- روشنايي
3- فضاي آزمايشگاه
4- وسايل :
ترازو
PH متر
انكوباتور CO2
دما سنج
فريزر
هود
وسايل شيشيه اي
پلاستيكي

8. كاليبراسيون ميزان الحراره Thermometer calibration
نحوه نگه داري: قرار دادن در گليسرول
نحوه كنترل بر اساس دستور العمل NBS (NIST)
2 تا 8 درجه سانتي‌گراد، 20- درجه سانتي گراد، 37 درجه سانتي گراد، 56 درجه سانتي گراد
معيار غيرقابل قبول: اختلاف 1 درجه سانتي گراد ≤
نحوه كاليبر كردن:
1 – قرار دادن ترمومتر استاندارد و ساير ترمومترها در يخ
2 – مقايسه قرائت عدد صفر ترمومتر استاندارد با ساير ترمومترها
3 – انجام اين روش براي درجه حرارت هاي 37 و 56 درجه سانتي گراد
4 – ثبت درجه حرارت بر روي كاغذ لگاريتمي

9. كنترل كيفي وسايل وسايل و دستگاه‌ها نحوه اجرا روش‌هاي نگهداري و بازرسي
زمان كنترل دستگاه
فور (براي استريل كردن وسايل شيشه‌اي)
داخل فور هر ماه تميز شود
زمان و درجه حرارت براي هر زمان كاري ثبت شود
هر 6 ماه
اتو (انكوباتور)
ديوار و قفسه‌ها هر ماه تميز شود
درجه حرارت در شروع كار روزانه ثبت شود
1 ±35/5
ميكروسكوپ
بعد از كار روزانه لنزها با كاغذ لنز پاك‌كن تميز شود. قسمت‌هاي مكانيكي هر هفته تميز و روغن زده شود. بعد از كار كردن با ميكروسكوپ براي محافظت از گرد و خاك روپوش آن كشيده شود.
كندانسور هر ماه بايد تنظيم شود
4 مرتبه در سال
يخچال
هر دو ماه يك بار يخچال را تميز و عاري از برفك نمائيد
روزانه 8-2 درجه سانتي‌گراد ميزان تغييرات
بن‌ماري
هر روز سطح آب را كنترل نمائيد. درجه حرارت را اول هر روز يادداشت نمائيد
(38-36 و درجه سانتي‌گراد) تغييرات مجاز
داخل دستگاه را ماهي يك بار تميز كرده و آب آن را عوش نمائيد

10. ادامه جدول - كنترل كيفي وسايل
وسايل و دستگاه‌ها
نحوه اجرا
روش‌هاي نگهداري و بازرسي
زمان كنترل دستگاه
فريزر
در موارد برفك Defrost
روزانه
20- تا 8- درجه سانتي‌گراد
60- تا 75- درجه سانتي‌گراد
هر 6 ماه
جار بي‌هوازي
هر هفته تميز شود. محفظه محتواي كاتاليست بعد از هر دوره كاري دوباره فعال شود
(2 ساعت و 160 درجه سانتي‌گراد) اين محفظه بايد هر سه ماه يك بار عوض شود.
زمان بي‌رنگ شدن نوار معرف (انديكاتور) متيلن بلو با هر بار استفاده كنترل شود.
هر هفته
اتوكلاو
هر ماه تميز شده و آب آن عوض شود
هر دفعه قبل از شروع كار سطح آب آن بررسي شود. تثبيت زمان، حرارت و فشار براي هر نوبت كاري، كنترل اتوكلاو با نوار مخصوص (Spore-Strip) درهر هفته
سانتريفوژ
ديواره‌هاي داخل سانتريفوژ را هر هفته يا بعد از شكستن و ريختن مواد داخل آن با مواد ضدعفوني بايد تميز كرد.
ماهانه با تاكومتر كنترل شود.
گردگيرهاي موتور ساليانه عوض شود.
pH متر -
آزمايش با محلول استاندارد pH با هر بار استفاده تغييرات 0/1 ±
كابينت ايمني
كنترل جريان هوا
50 فيت در هر دقيقه
6 ماه و يا 4 ماه

11. كنترل كيفي محيط كشت الف – قبل از ساخت تاريخ مصرف محيط كشت
ثبت زمان دريافت و كارخانه سازنده
تاريخ استفاده
بررسي ظاهر محيط
نگه‌داري محيط در حرارت مساوي يا كمتر از 25 درجه سانتي‌گراد
ب – هنگام ساخت
ترازوي دقيق
نكات نوشته شده بر روي قوطي
عدم مخلوط كردن محيط‌هاي جديد و قديم
آب‌كشي ارلن و ساير ظروف با آب مقطر
استفاده از ارلن با ظرفيت بيشتر از نصف حجم محيط
عدم حرارت‌دهي زياد
بررسي پليت‌ها

12. كنترل كيفي محيط كشت ج – بعد از ساخت و هنگام مصرف كنترل pH
استريل بودن محيط
امكان رشد ميكروارگانيسم مورد نظر
ايجاد ويژگي مورد نظر
عدم وجود شيار در محيط
ارتفاع مناسب محيط
عدم انجماد محيط
آلودگي

14. كنترل كيفي محيط از نظر رشد باكتري مورد نظر(مغذ ي بودن )
تهيه سوسپانسيون از رشد تازه باكتري در سرم فيزيولوژي استريل
مقايسه كدورت با استاندارد كدورت 5/0 مك فارلند
تهيه رقت 1/100از سوسپانسيون و برداشت 10ميكرو ‌ليتر و كشت بر روي پليت و شمارش كلني
نتايج مورد انتظار: رشد مناسب باكتري104× 2-1
كنترل كيفي محيط از نظر خصوصيات ممانعت‌كنندگي
تهيه سوسپانسيون باكتري در سرم فيزيولوژي
تهيه رقت 1/10 و كشت 0/01ميلي‌ليتر بر روي پليت
نتايج مورد انتظار: ممانعت از رشد باكتري مورد نظر 105× 2-1
كنترل كيفي محيط‌هاي ساخته شده در لوله آزمايش
0/01 ميلي‌ليتر از سوسپانسيون باكتري در هر لوله كشت شود.
نتايج مورد انتظار:‌ مشاهده واكنش منفي و يا مثبت با باكتري‌هاي مورد نظر
كنترل كيفي محيط‌هاي كشت با هر محيط جديد انجام مي‌شود.

15. نحوه نگه‌داري محيط‌هاي كشت پس از ساخت
نگه‌داري در يخچال 8-2 درجه سانتي‌گراد
محيط تايوگليكولات براث در دماي محيط
پليت‌ها در صورت نگه‌داري در كيسه‌هاي پلاستيك تا 4 هفته قابل مصرف هستند.
لوله‌هاي در پنبه‌اي تا 3 هفته (قطر پنبه زياد باشد)
لوله‌هاي در پيچ‌دار تا 3 ماه

16. رطوبت Moisture
در صورت خيس بودن سطح آگار در زمان مصرف، ظرف پتري را به مدت دقيقه در انکوباتورc °35 و يا با درپوش نيمه باز، زير هود كلاس IIدر حرارت اتاق قرار دهيد تا رطوبت اضافی آن تبخير گردد. براي تلقيح باکتری، سطح محيط كشت بايد مرطوب ولی فاقد قطرات آب بر روی آگار يا درپوش ظرف پتري باشد.

17. ديسك هاي ضدميكروبي Antimicrobial Disks
ذخيره سازي ديسک های ضدميكروبي (Storage of Antimicrobial Disks)
جهت نگهداری ديسک ها توجه به شرايط زير ضروری است:
ديسک ها را تا زمان انقضاء بايد در يخچال (دمای 8 درجه سانتی گراد يا کمتر) يا در فريزر (14- درجه سانتی گراد يا کمتر) نگهداری کنيد. ديسک ها نبايد در فريزرهايي با قابليت ذوب يخ خود به خودی، نگهداری گردند. بسته های باز نشده ديسک های كلاس بتالاکتام بايد در فريزر نگهداری شوند و به مقدار كم و مصرف حداكثر يک هفته، از فريزر درآورده شوند و در يخچال نگهداری گردند. بعضی آنتی بيوتيک های حساس (مانند ايمی پنم، سفاکلر (cefaclor) و ترکيبات حاوی کلاولانيک اسيد) در صورت نگهداری در فريزر تا زمان مصرف، از پايداری بيشتری برخوردار خواهند بود.
بسته هاي باز نشده حاوی ديسک را 2-1 ساعت قبل از مصرف، از يخچال يا فريزر خارج كنيد تا به دمای اتاق برسد. اين کار تماس هوای گرم با ديسک يخ زده و متعاقبا" تغليظ دارو در سطح ديسک را به حداقل مي رساند.

18. پليت را بر روی درپوش آن برگردانده، ظرف مدت 15 دقيقه از ديسک گذاری به انکوباتور co 2 ± 35 منتقل نماييد. دمای انکوباسيون بالاتر ازc o 35 ممکن است مانع از رشد استافيلوکک های مقاوم به متي سيلين گردد به استثنای گونه هموفيلوس، نيسريا مننژيتيديس و استرپتوکک ها از قرار دادن پليت حاوی ديسک در انکوباتور CO2 دار خودداری نماييد، چون CO2 قطر هاله عدم رشد برخی دارو ها را به طور مشخصی تغيير مي دهد

20. كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار
زمان
ارگانيسم‌هاي كنترلي
نتيجه قابل انتظار
بايل اسكولين آگار
24 ساعت
انتروكك
استرپتوكك پيوژن
رشد مثبت و محيط سياهرنگ مي‌شود
رشد منفي
بلاد آگار
استرپتوكك پنومونيه
رشد مثبت و داراي هموليز بتا
رشد مثبت و داراي هموليز آلفا
شكلات آگار
هموفيلوس آنفلوانزا
نايسريا گونوره
رشد مثبت
لايزين دكربوكسيلاز محيط به وسيله روغن استريل پوشانده شود
سالمونلا
شيگلا
مثبت بنفش
منفي زرد
اورنيتين
48 ساعت
كلبسيلا
آرژينين (دي هيدرولاز)
پروتئوس ميرابيليس
محيط KIA و TSI
E. Coli
Shigella
Salmonella
Psudomonas
A/A
AlK/A
ALK/SH2
ALK/ALK

21. كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار
زمان
ارگانيسم‌هاي كنترلي
نتيجه قابل انتظار
مك‌كانگي آگار
24 ساعت
E. Coli
پروتئوس
انتروكك
كلني‌هاي قرمز رنگ
كلني‌هاي بي‌رنگ (بدون سوآرمينگ)
رشد منفي
محيط مالونات
كلبسيلاپنومونيه
منفي (سبز رنگ)
مثبت (آبي رنگ)
مانيتول سالت آگار
استافيلوكوك ارئوس
استافيلوكوك اپيدرميديس
اشريشياكلي
كلني‌هاي زردرنگ
MR VP
48 ساعت
كلبسيلا پنومونيه
MR+ VP-
MR- VP+
DNASE Agar
S. Aureus
S. Epidermidis
زون شفاف بعد از اضافه كردن اسيدكلريدريك 1 N
بدون زون
فنيل الكل بلادآگار
Streptococcus spp
رشد خوب
بدون رشد
نيترات براث يا آگار
Acinetobacter
مثبت قرمز بعد از اضافه كردن معرف
منفي عدم رنگ قرمز
محيط of گلوكز بدون روغن
سودوموناس
اسينتوباكتر نوع Lwoffi
در سطح محيط زرد
بدون تغيير

22. كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار
زمان
ارگانيسم‌هاي كنترلي
نتيجه قابل انتظار
Indol (SIM)
24 ساعت
E. Coli
كلبسيلا
مثبت – قرمز
منفي – بدون رنگ
فنيل آلانين دآميناز
پروتئوس
منفي
مثبت سبز
بعد از اضافه كردن كلرور فريك 10%
سالمونلا - شيگلا آگار
سالمونلا
كلني‌هاي بي‌رنگ با مركز سياه
هكتون انتريك آگار (HE)
شيگلا
كلني سبز به مركز سياه
كلني سبز شفاف
رشد محدود شونده با كلني نارنجي
XLD
كلني در مركز سياه در اطراف كلني هالة‌ قرمز
كلني بي رنگ شفاف (قرمز)
كلني زرد
كريستنسنس اوره آگار
منفي زرد
مثبت صورتي
صورتي در سطح
CTA
Cystine tripticase agar-dextrose
24 تا 48 ساعت
نايسريا گونوره
موراكسلا كاتاراليس
توليد رنگ زرد
بدون تغيير رنگ

23. كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار
زمان
ارگانيسم‌هاي كنترلي
نتيجه قابل انتظار
لايزين آيرون آگار
LIA
24 ساعت
E. Coli
شيگلا
سالمونلا
پروتئوس
سطح و عمق بنفش (مثبت)
سطح بنفش – عمق زرد (منفي)
سطح و عمق بنفش +‌SH2 (مثبت)
سطح قرمز – عمق زرد
سلنيت براث (SF)
بعد از كشت مجدد رشد مي‌كند
بعد از كشت مجدد رشد نمي‌كند
سيمونز سيترات
48 ساعت
كلبسيلا
رشد منفي
رشد مثبت – رنگ آبي
T.C.B.S آگار
Vibrio cholerae
كلني‌هاي زرد رنگ
تتراتيونات براث
Salmonella
رشد مثبت
تاير مارتين آگار
24 ساعت با (CO2)
نايسريا مننژيتيديس
نايسرياگنوره آ
كانديدا آلبيكانس
تايوگليكولات براث
باكتروئيدس فراجيليس
E.M.B
K. Pneumoniae
S. Flexneri
رشد خوب با جلاي فلزي
رشد خوب كلني بنفش
رشد خوب كلني شفاف

28. 1. کهنه بودن لوگل علتهای 2. داغ بودن لوپ خطا در 3. کشت کهنه لام گرم 4
1. کهنه بودن لوگل علتهای 2. داغ بودن لوپ خطا در 3. کشت کهنه لام گرم 4. اثر آنتی بیوتیک 5. ضخیم بودن لام 6. افزایش زمان فیکساسیون و نقش الکل در منافذ پپتیدوگلیکان 7. کافی نبودن زمان رنگ بر

29. كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌ها
محيط
منفي
مثبت
معرف يا رنگ
زمان كنترل BA
انتروكوك فكاليس
استرپتوكوك پيوژن
ديسك باسيتراسين
هر ويال جديد
Typtic soy Agar (T.S.A)
انتروكك
استافيلوكوك ارئوس
كاتالاز
(آب اكسيژنه 3%)
هر بار استفاده
T.S.A
استافيلوكوك اپيدرميديس
كوآگولاز (پلاسما)
كلبسيلا پنومونيه
اشريشياكلي
بتاگلوكورو نيداز
در لام به صورت مخلوط ديده مي‌شود
استافيلوكك
رنگ‌آميزي گرم
هر هفته و هنگام ساخت
T.S.I
سالمونلا
E. Coli
ONPG
B.A
استرپتوكك ويريدنس
استرپتوكك پنومونيه
ديسك اپتوچين
E. coli
Pseudomonas
اكسيداز
هموفيلوس آنفلوانزا
هموفيلوس پارا آنفلوانزا
(ديسك يا نوار)
فاكتور V

30. كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌ها
محيط
منفي
مثبت
معرف يا رنگ
زمان كنترل
T.S.A
هموفيلوس آنفلوانزا
(ديسك يا نوار)
فاكتور XV
هر ويال جديد
گسترش تهيه شده از خلط
باكتريهاي مخلوط با انواع غير اسيدفاست
مايكوباكتريوم توبركلوزيس
رنگ آميزي
Ziehl-neelsen
هر بار استفاده
TSA BA
باكتري مورد نظر
آنتي سرم
هر ويال جديد – ماهيانه و هر 6 ماه
Enteroccus
Group B streptoccus
CAMP
SIM
Klebsiella
E. Coli
كوواكس MR VP
نيترات آگار و يا برات
Acinetobecter
نتيرات

31. نحوة نگهداري باكتري‌ها
الف – طولاني مدت
1 – استفاده از گليسرول در 20- درجه سانتي‌گراد
از كشت خالص باكتري سوسپانسيوني در گليسرول استريل تهيه شده و به ميزان 2-1 ميلي‌ليتر در لوله‌هاي كوچك در پيچ‌دار تقسيم مي‌شود و در 20- درجه سانتي‌گراد نگه‌داري مي‌گردد. تجديد كشت بعد از ماه صورت مي‌گيرد.
2 – استفاده از روغن معدني و نگهداري در دماي آزمايشگاه
محيط تريپتيك سوي‌آگار (TSA) به صورت سطح شيب‌دار كم در لوله تقسيم مي‌شود. در مورد باكتري‌هاي سخت رشد، خون و يا خون حرارت داده شده اضافه مي‌شود. پس از كشت بر روي سطح محيط و رشد باكتري، روغن معدني و يا پارافين كه در170 درجه سانتي‌گراد به مدت يك ساعت استريل شده به ارتفاع يك سانتي‌متر به سطح محيط اضافه مي‌شود. تجديد كشت بعد از 12-6 ماه انجام مي‌گيرد. (كشت در دماي آزمايشگاه نگهداري مي‌شود).
3 – كشت عمقي و نگه‌داري در دماي آزمايشگاه
جهت استافيلوكك‌ و انتروباكترياسه
نوع محيط TSA
نحوه كشت عمقي بدون سطح شيب‌دار (كشت مجدد بعد از يك سال)

32. 4 – كشت عمقي در محيط CTA
نگهداري نايسريا و استروپتوكك
محيط به صورت عمقي در لوله در پيچ دار
نگهداري نايسريا در 35 درجه سانتي‌گراد
تجديد كشت هر دو هفته يك بار
استرپتوكك در دماي اتاق هر ماه تجديد كشت شود
محيط Cooked meat broth
براي بي‌هوازي‌ها
نگهداري در دماي آزمايشگاه
تجديد كشت هر دو ماه يك بار
ب – روش نگهداري كوتاه مدت
1 - كاربرد جهت باكتريهاي روتين آزمايشگاه (باكتري‌هاي سريع‌الرشد)
نوع محيط TSA با سطح شيبدار
نگهداري در يخچال

33. 2 – استرپتكوكك‌ها
نوع محيط بلادآگار در لوله با سطح شيب‌دار
پس از رشد باكتري نگهداري در يخچال
تجديد كشت هر دو هفته يك بار
3 – نايسريا مينجاتيديس و هموفيلوس
نوع محيط شكلات آگار
تجديد كشت كمتر از يك هفته
نگهداري در دماي آزمايشگاه
4 – نايسريا گونوره
نگهداري در دماي 35 درجه سانتي‌گراد
زمان تجديد كشت هر دو روز يك بار

37. Rapid Catalase Test for Enterobacteriaceae
1-Touch the center of well-isolated young colony (18-24 hrs.) on SBA or MacConkey with a wooden stick to transfer to a clean ,dry glass slide.
Dose not test from Muller-Hinton Agar (MHA)
Place 1 drop of 3% H2O2 and observe immediately bubbles

38. Citrate Utilization Test Simmons
Streak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a well-isolated colony
Place cap loosely on tube , aerobic environment
Incubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 days
Positive : growth + blue
Negative : No growth + green

39. Citrate Utilization Test Simmons
Streak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a well-isolated colony
Place cap loosely on tube , aerobic environment
Incubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 days
Positive : growth + blue
Negative : No growth + green

40. Citrate Utilization Test Simmons
Agar Slant
Bromthymol blue
pH 6.8 green (negative) to blue pH > 7.6 (positive)
Inspect agar for evidance of freezing ,cracks , dehydration , bubbles ,before use and discard any tube that Blue

41. Citrate Utilization Test Simmons
Do not inoculate from broth cultures , due to carryover of media
To avoid false-positive reactions , use a light inoculum to prevent carry over of substance from previous media
Luxuriant growth without color change may indicated a positive test. if agar dose not turn blue on further incubation ,test should be repeated with less inoculum

42. باکتری را در روی سطح شیب دار محیط کشت دهید ودرب لوله را محکم نبندید.
روش کار :
باکتری را در روی سطح شیب دار محیط کشت دهید ودرب لوله را محکم نبندید.
لوله را در 35 درجه سانتی گراد بمدت
24 ساعت تا 4 روز انکوبه کنید.
سیترات منفی
سیترات مثبت

43. Spot Indol Test Colonies from SBA & rub on filter paper
Tryptophanase breaks down tryptophan to realease indole
1% paradimethylaminocinnamaldehyde
Blue color within 30 sec

45. IMViC MR VP Incubate for minimum 48 hrs
If results are equivocal at 48 hrs repeat test for 4 to 5 days
MR : 5 to 6 drop of MR reagent per 5 ml broth
VP : 6 drop alpha naphtol & 2 drop KOH

47. روش کار
الف) در 5 میلی لیتر محیط MR-VP کشت دهید وبمدت 48 ساعت در 35 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.
ب) 5/2 میلی لیتر آن را به لوله باریک منتقل کنید.
ج) 5 قطره از معرف متیل رد را به آن اضافه کنید
.واکنش مثبت با رنگ قرمز
واکنش منفی با رنگ زرد مایل به نارنجی

48. Lysine Iron Agar (LIA)

52. Presumptive report: Gram-Positive Cocci resembling Staphylococci

53. Serotyping / Serogrouping
Typing Should be performed from a non-sugar containing medium ,such as 5% sheep blood agar (BAP) or LIA
Use of sugar containing media , such as MacConkey or TSI agars , can cause the organism to autoagglutinate

54. روش کار: - با استفاده از یک آنس از مرکز یک کلنی ایزوله برداشت کنید.
نوک آنس را درداخل قسمت پائین لوله وارد کنید
و بعد در سطح شیب دار کشت دهید.
درب لوله را محکم نبندید.
در35 درجه بمدت 18تا 24ساعت انکوبه کنید.

56. نکات قابل توجه در مورد ساخت محیط
محیط XLD باید قرمز روشن باشد. اگر محیط موقع ساختن زیاد حرارت ببیند، سبب رسوب سدیم دزاکسی کولات می گردد که باعث می شود کلنی ها کوچکتر، تیره تر ظاهر شوند.