1. Reproduction Techniques in Animals
تکنیک های تولید مثلی در دام
Reproduction Techniques in Animals
Presented by: A. Riasi
Ph. D. in animal nutrition and Physiology

3. IVEP (In Vitro Embryo Production)
تکنیک تولید برون تنی رویان
IVEP (In Vitro Embryo Production)

4. اهداف این جلسه 1- اهمیت و تاریخچه تولید برون تنی رویان
2- تهیه ی اووسیت های مناسب برای تولید برون تنی رویان
3- اقدامات لازم برای بلوغ برون تنی اووسیت ها
4- چگونگی ظرفیت دادن به اسپرم ها در شرایط برون تنی
5- مراحل انجام لقاح برون تنی
6- کشت برون تنی رویان
7- محدودیت های اجرای تکنیک تولید برون تنی رویان

5. اهمیت تکنیک تولید برون تنی رویان
جلوگیری از انقراض نسل حیوانات کمیاب
امکان صاحب فرزند شدن در انسان
استفاده بهینه از حیوانات ماده دارای برتری ژنتیکی
امکان سریع تست نتاج یک حیوان ماده
امکان مطالعه تغییرات فیزیولوژیک رویان در مرحله ی قبل از لانه گزینی
استفاده از رویان های تولید شده در تکنیک انتقال رویان
امکان نگهداری طولانی مدت رویان و انتقال آن به نقاط دیگر
کمک به مهندسی ژنتیک و کلونینگ
افزایش نرخ انتخاب برای صفات کمی

6. تاریخچه ی تکنیک تولید برون تنی رویان
سال 1959: استفاده از تکنیک لقاح برون تنی در خرگوش
سال 1968: اولین موفقیت کاربرد تکنیک لقاح برون تنی در موش
سال 1978: استفاده از تکنیک لقاح برون تنی در انسان
سال 1981: استفاده از تکنیک لقاح برون تنی در گاو
سال 1989: مطالعات فوکوئی و اونو در مورد راه های بهبود تکنیک
دهه ی 1990: شکل گیری موسسات تجاری انتقال رویان گاو

7. تاریخچه ی تکنیک تولید برون تنی رویان
Louise Joy Brown
Born
Louise Joy Brown (July 25, 1978 ) (age 30)
Weight
2.608 kg at birth
Known for
First in-vitro baby
Spouse(s)
Wesley Mullinder (2004–present)

9. تاریخچه ی تکنیک تولید برون تنی رویان

10. مراحل اجرای تکنیک تولید برون تنی رویان
تهیه ی اووسیت (Oocyte retrieval)
بلوغ برون تنی اووسیت (In vitro maturation [IVM])
ظرفیت دادن برون تنی اسپرم ها (In vitro sperm capacitation [IVSC])
لقاح برون تنی اووسیت(In vitro fertilization [IVF])
کشت برون تنی رویان(In vitro culture [IVC])

11. تهیه ی اووسیت

12. تهیه ی اووسیت از دام زنده دام های تازه مرده یا تازه کشتار شده
دام نابالغ
دام بالغ و در مراحل تخمک ریزی
دام آبستن
دام پیر
دام های تازه مرده یا تازه کشتار شده

13. تهیه ی اووسیت

14. تهیه ی اووسیت

15. تهیه ی اووسیت

16. تهیه ی اووسیت

17. تهیه ی اووسیت

18. تهیه ی اووسیت
Bovine Ovary

19. تهیه ی اووسیت

20. تهیه ی اووسیت

21. ارزیابی اووسیت های جمع آوری شده
اووسیت های تازه جمع آوری شده از تخمدان های گاو

22. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)
تهیه ی محیط کشت TCM 199
انتقال اووسیت ها به ظرف حاوی محیط کشت TCM 199، گنادوتروپین، سرم جنین گوساله، جنتامایسین، پیرووات و ...
انکوباسیون اووسیت ها و محیط کشت در دمای 5/38 به مدت 24 ساعت و برقراری شرایط بی هوازی (5 درصد گاز دی اکسید کربن)
مشاهده ی پراکندگی سلول های کومولوس از اطراف اووسیت و در این صورت اووسیت ها در مرحله متافاز میوز 2 قرار خواهند داشت

23. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)

24. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)

25. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)

26. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)

27. مراحل بلوغ برون تنی اووسیت (IVM)

28. ظرفیت دادن برون تنی اسپرم ها (IVSC)
انکوباسیون اسپرم ها در محیط کشت ویژه حاوی هپارین
روش شنا به سمت بالا (Swimming up)

29. لقاح برون تنی (IVF) محیط کشت های مناسب برای لقاح برون تنی:
1) محیط کشت TALP
2) محیط کشت SOF
3) محیط کشت های حاوی گلوکز یا پیروات، آلبومین یا سرم خون و هپارین

30. لقاح برون تنی (IVF) مراحل لقاح برون تنی: آماده سازی محیط کشت مناسب
انکوباسیون اووسیت با اسپرم های ظرفیت یافته در دمای 5/38 و 5 درصد گاز CO2 به مدت 18 تا 20 ساعت
البته می توان از روش های SUZI یا ICSI نیز برای انجام لقاح برون تنی استفاده کرد.

31. تزریق اسپرم به داخل سیتوپلاسم اووسیت
لقاح برون تنی (IVF)
تزریق اسپرم به داخل سیتوپلاسم اووسیت

32. لقاح برون تنی (IVF) نشانه های انجام لقاح برون تنی:
1) مشاهده اسپرم در سیتوپلاسم اووسیت
2) متورم شدن سر اسپرم و تشکیل پرونوکلئوس
3) وجود دم اسپرم در سیتوپلاسم اووسیت
4) تجزیه شدن دانه های کورتیکال درون سیتوپلاسم
5) انجام تقسیم سلولی و تشکیل بلاستوسیست

33. لقاح برون تنی (IVF)

34. لقاح برون تنی (IVF)

35. کشت برون تنی رویان (IVC)
روش های کشت برون تنی رویان:
1) استفاده از محیط کشت
2) استفاده از حیوان واسطه (خرگوش، گوسفند و ...)

36. کشت برون تنی رویان (IVC)
مراحل کشت برون تنی رویان در محیط کشت:
1) آماده سازی محیط کشت
2) انکوباسیون کردن زایگوت های
3) بررسی وضعیت بلاستوسیست ها از نظر شکل ظاهری

37. کشت برون تنی رویان (IVC)

38. کشت برون تنی رویان (IVC)

39. محدودیت های تولید برون تنی رویان
افزایش موارد سقط جنین ناشی از تشکیل ناقص آلانتوئیس
مرگ و میرهای جنینی (بویژه پس از 35 روزگی در گاو)
سخت زایی ناشی از بزرگ بودن غیر عادی جنین
ناهنجاری های مادرزادی
مشکلات تنفسی در گوساله ها و نداشتن میل به شیرخوردن