1. به نام خداوند جان و خرد

2. انستیتو پاستور ایران بخش میکروب شناسی
دکتر فرشته شاهچراغی
انستیتو پاستور ایران بخش میکروب شناسی

3. سياه سرفه (Pertussis, Whooping cough) چیست؟
يكي از بيماريهاي عفوني واگيردار دستگاه تنفسي و
از مهمترين ناخوشیهای مولد سرفه است
اولین شیوع آن در قرن 16
در سراسر جهان منتشر ميباشد
در تمامي سنين به ويژه در كودكان و نوزادان عارض ميگردد
تنها در انسان ایجاد بیماری میکند.
The objectives of this program, as stated in the above slide, are to:
1) Increase awareness and prevention of pertussis in the United States; 2) Educate health care professionals on the epidemiology and diagnosis of pertussis; 3) Discuss the importance of pertussis immunization, and to review efficacy and safety data of pertussis vaccines; and 4) Discuss the implementation of important strategies for improving control of pertussis.

4. سیاه سرفه یکی از موارد مهم و اصلی مرگ و میر در کودکان زیر 1 سال بشمار می رود سالانه 10 میلیون مورد در سراسر جهان گزارش می شود سالانه 400 هزار مرگ و میر ناشی ازسیاه سرفه گزارش می شود 90% در کشورهای در حال توسعه – بیشتر در نوزادان

5. Pertussis—a re-emerging infection
میزان مرگ و میر ناشی از بیماری:
در کشورهای در حال توسعه % (از مشکلات عمده)
در کشورهای توسعه یافته /04 % (طغیان مجدد Re-emerging disease)
در کشورهایی مانند ژاپن، سوئد و انگلیس

6. فاکتورهای موثر بر طغیان مجدد بیماری
کاهش در ایمنی ایجاد شده 5 تا 10 سال
موتاسیون: تفاوت آنتی ژنیک بین سویه های واکسن و سویه های بالینی در بسیاری از کشورها
جدی نگرفتن برنامه واکسیناسیون
افزایش سطح آگاه سازی عمومی
پیشرفت در روشهای تشخیص و نظارت عمومی

7. میزان ابتلا به سیاه سرفه موارد گزارش نشده تحت بررسی
مشکلات برآورد
میزان ابتلا به سیاه سرفه
فقدان دسترسی کامل
به روشهای تشخیصی
تشخیص اشتباه
موارد گزارش نشده تحت بررسی
معیارهای متفاوت در
گزارش موارد ابتلا
به سیاه سرفه در
کشورهای مختلف

8. عامل مولد سياه سرفه چيست؟
باكتري كوكوباسيل گرم منفي
بردتلا پرتوسيس (Bordetella pertussis)
در سال 1906 برای اولین بار شناسايي شد
هوازي، اكسيداز مثبت، غير متحرك
رشد بهينه در 35 درجه سانتيگراد همراه با رطوبت هوا (حساس به خشکی)
پرنیاز (Fastidious)
عدم رشد برروی محیطهای معمولی مانند مک کانکی و شکلات آگار
محيط مناسب رشد باكتري:
برده-ژانگو (Bordet-Gengou)
رگان-لو (Regan-lowe)
بر روی آن كلني شبيه قطره جيوه كه باگرماگذاري طولانيتر سفيدتر مي شوند پديدار مي شود.

9. محيط برده ‍ژانگو اولين محيط براي رشد باكتري بردتلا پرتوسيس در سال 1906
حاوی سفالکسین و بدون سفالکسین
شامل:
عصاره سیب زمینی، 1% گلیسرول
و 15% خون دفيبرينه گوسفندي
كلني هاي كوچك، براق و مرواريد مانند

10. محيط رگان لو (رگان لو شاركل آگار)
محيط مناسب ترانسپورت براي گونه هاي بردتلا
حاوي سفالكسين
شامل:
عصاره گوشت، كازئين هضم شده با آنزيمهاي
پانكراتيك، نشاسته، ذغال فعال، نياسين و 10%
حیوانی دفيبرينه خون

11. گونه هاي ديگر Bordetella
B. parapertussis, B. bronchiseptica, B. holmesii, B. avium, B. hinzii, B. trematum
B. parapertussis نيز تنها در انسان يافت مي شود
بيماري تنفسي مشابه سياه سرفه ولي با علائم خفيف تر ايجاد مي كند.
اين گونه از بوردتلا بر خلاف پرتوسيس پرنياز نبوده و در محيطهاي معمولي مانند مك كانكي نيز رشد مي كند.
كلني هاي آن طي 48 ساعت ظاهر شده و خاكستري تا قهوه اي رنگ هستند و ممكن است بتا هموليتيك باشند.

12. چه مواد و عناصري باعث تقويت و یا مهار رشد باكتري می شوند؟
تقويت كننده هاي رشد
مهار كننده هاي رشد
نشاسته Starch
ذغال فعال Charcoal
سرم آلبومين Serum albumin
سايكلودكسترين Cyclodextrin
اسيدهاي چرب Fatty acides
يونهاي فلزي Metal ions
سولفيدها Sulfides
پراكسيدها Peroxides
میزان زیاد دی اکسید کربن CO2

13. فاكتورهاي بيماريزاي B. pertussis كدامند؟
1. ملكولهاي چسبنده سطح سلولي (Adhesions)
2. توكسينهاي باكتري (Toxines)

14. پاتوژنز باکتری شامل چه مراحلي است؟
ورود باکتری از طریق دهان و نازوفارنکس از طریق آئروسولها
اتصال به سلولهای مژه دار مخاط دستگاه تنفسی
تولید ملکولهای چسبنده توسط باکتری که به اتصال باکتری به سلولهای میزبان کمک می کند
تولید توکسینهای باکتری و انتشار آن
فلج کردن مژه های سلولها
التهاب در دستگاه تنفسی همراه با ترشحات ریوی
حمله به لنفوسیتهای سیستم دفاعی و تخریب این سلولها

15. علائم بيماري سیاه سرفه کدام است؟
علائمی شبیه به سرماخوردگی تب
بی حالی
عطسه
بی اشتهایی
سرفه های مداوم
[Note: New slide provided by S. Barone]
موارد بیماری
موارد مشکوک
موارد محتمل
موارد حتمی

16. موارد مشكوك به سياه سرفه
1. سابقه سرفه شدید
2. سابقه یکی از موارد زیر
- داشتن سرفه مداوم ، بمدت 2 هفته یا بیشتر
- سرفه های مخصوص
( whooping cough)
- وجود استفراغ متعاقب سرفه
موارد مشكوك به سياه سرفه

17. موارد محتمل سیاه سرفه
1. در شیرخواران کم سن و سال تر ، وجود سرفه های طولانی بدون هوپ که متعاقب آن اختلالات تنفسي باشد
در کودکان بزرگتر ، حملات غالباً به بروز شوک منتهی میشود و گاهی اوقات نیز استفراغ و ترشحات موکوسی چسبنده ای دیده میشود
2. خونریزی زیر ملتحمه در اثر پاره شدن رگهاي خوني چشم
3. بیماری که 4-2 هفته قبل بعنوان مورد مشکوک به سیاه سرفه تحت نظر بوده باشد
4. زمانی که در محل همه گیری سیاه سرفه وجود داشته باشد
5. زمانی که تعداد WBC بیمار یا بیشتر لنفوسیت در میلی لیتر خون باشد.
توجه: بین حملات سرفه ، معمولاً یک حالت بهبود مشاهده میشود.

18. وجود علائم محتمل سیاه سرفه همراه با نتیجه مثبت کشت باکتری یا بررسی ترشحات نازوفارنکس از نظر وجود باکتری Bordetella pertussis با روش ایمونو فلورسانس، ELISA، روشهاي ملكولي مانند Real-Time PCR.
مورد قطعی سیاه سرفه

19. بیماری سیاه سرفه چه مدت طول می کشد و شامل چه مراحلی است؟
سه مرحله بیماری
بيماري در 3 هفته اول بسيار مسري بوده و زمان مناسبي براي نمونه گيري از بيمار است

20. باكتري از چه طریقی انتشارمی یابد؟
از طريق تماس افراد با قطرات آئروسول موجود در هوا از طريق سرفه يا عطسه فرد بيمار
انتقال از طريق افراد ناقل بدون علائم باليني (عفونت بدون علائم باليني 4 تا 22 برابر بيشتر از عفونت همراه با علائم باليني است).
اغلب انتقال باكتري به كودكان از طريق بزرگسالان صورت مي گيرد

21. 75% از موارد انتقال به كودكان از طريق نزديكان صورت مي گيرد
Other
25%
25% Others
Mom
32%
Grandparent 8%
Dad
15%
Sibling
20%
47% Mom or Dad
8% grandparents
20% sibling

22. بیماری سياه سرفه داراي چه عوارضي است؟
مهمترين عارضه عفونت ثانويه باكتريايي است كه از مهمترين آنها پنومونيه (ذات الريه) است.
در هر 20 نفر مبتلا به بيماري 1 نفر
در نوزادان بسيار بالاتر از سنين ديگر
عوارض ديگر بيماري:
استقراغ، پاره شدن رگهای خونی چشم، فتق
کمبود اکسیژن، کاهش فشار خون، تشنج، کما
2-0/6% منجر به ضایعات مغزی می شود

23. مراحل تشخيص آزمايشگاهي بيماري
ارسال نمونه ها به مراکز تشخیصی (پاستور)
نمونه گيري از بیمار توسط پزشک
ارسال محيط ترانسپورت به مراكز درماني
تشخيص آزمايشگاهي
كشت
سرولوژي
PCR
ایمونوفلورسنت

24. اهمیت نمونه برداری کیفیت نمونه بستگی دارد به: جدی گرفتن پرسنل
استفاده از دستورالعملهای مناسب و دقیق
در استفاده از مواد و محیطهای تراسپورت
رعایت زمان مناسب در انتقال نمونه به آزمایشگاه
Specimens of bacterial culture must not be stored for more than 24 hours prior to sending laboratory.

25. کلیه پرسنل مسئول نمونه برداری می بایست با تمامی دستورالعملهای نمونه گیری صحیح شامل موارد ذیل آگاه باشند:
نوع نمونه (type of specimen to be taken)
زمان نمونه برداري (time of specimen collection)
روش نمونه برداری صحیح (the procedure)
مواد و وسایل لازم برای نمونه برداری (collection materials)
حجم و میزان نمونه (specimen volume )
نحوه نقل و انتقال نمونه (the handling)
نگهداری نمونه (storage guidelines)
امحاء نمونه های آلوده (disposal of contaminated specimen and other biological materials)
ایمنی بیمار و اطرافیان و فرد مسئول نمونه برداری (safety of patients and themselves)

26. مقدمات نمونه گيري از بیمار
نمونه گيري از طريق پزشك مربوطه صورت مي گيرد
آماده كردن بيمار با توضيح در خصوص نمونه گيري
كامل كردن پرسش نامه
آماده كردن دستكش و ماسک و دو محیط ترانسپورت و دو عدد سواب داكرون (از سواب پنبه ای نمی توان استفاده کرد)
محيط ترانسپورت رگان- لوحاوی سفالکسین (به صورت در بسته تا دو ماه در یخچال می توان نگه داشت)

27. نمونه گيري از بیمار از کجا باید انجام شود؟
نازوفارنکس
نازال
خلط (بزرگسالان)

28. نحوه نمونه گيري از بیمار
سواب را به انتهايي ترين بخش بيني برده و چند لحظه نگه مي داريم تا ترشحات به آن جذب شود و بلافاصله به محيط ترانسپورت انتقال داده مي شود.
در مورد نوزادان در صورت عدم موفقیت در نمونه گیری از نازوفارنکس یا نازال پليت حاوي محيط كشت (برده- ژانگو) را 3 بار جلو دهان كودك در هنگام سرفه شديد نگه مي داريم. (cough plate)
اين محيط ابتدا بايد 24 ساعت در دماي C°37 انكوبه شده سپس به آزمايشگاه ارسال گردد.

29. نمونه برداری از نازو فارنکس

30. نمونه های موردنظر بایستی شرایط ذیل را دارا باشند:
نمونه گیری با سواب داکرون انجام شود. ( زیرا سواب مورد نظر توکسیک نبوده ورطوبت لازم برای بقای باکتری را دارا می باشد).
حتما" نمونه های مورد نظردرمحیط ترانسپورت سیاه سرفه (Regan-Lowe Agar) رگان لوآگارحمل گردند.
برای حفظ رطوبت محیط ترانسپورت، نمونه ها باید درکیسه فریزر که حاوی پنبه نم دار باشد حمل گردند.
همراه با سرم و نمونه شرح حال بیمار نیز الزامی است (فرم های آماده که حاوی مشخصات فردی بیمار به انضمام آدرس پستی-استان ارسالی- نام بیمارستان-تاریخچه بیماری-علائم بیماری-مصرف دارو-واکسیناسیون قبلی- موارد تماس فرد بیمار با افراد مشکوک با بیماری و مشخصات نمونه های ارسالی )
نمونه بیمار در زنجیره سرد نگهداری و حمل گردد.

31. شرايط نگهداري نمونه سياه سرفه گرفته شده از بيمار
بين 2 تا 24 ساعت مي توان نمونه ها را درمحيط ترانسپورت حاوي ذغال فعال (رگان لو) در شرايط دماي اتاق نگهداري كرد*
بيش از 24 ساعت بايد نمونه ها را در محيط رگان لو حاوي ذغال فعال در يخچال نگه داري كرد.
به دليل غني بودن محيط ترانسپورت و محيط كشت باكتري و در نتيجه سهولت آلوده شدن اين محيطها بايد در نگهداري محيط و حفظ آن از آلودگي بسيار دقت كرد.

32. نمونه فرم مشخصات بیمار

33. اشتباهات معمول پرسنل در نمونه برداری
خطا در برچسب زدن نمونه ها
خطا در پر کردن صحیح اطلاعات لازم در فرم مربوط به بیمار
مناسب نبودن مقدار نمونه جهت انجام آزمایش و بدست اوردن نتایج قابل قبول
خطا در انتخاب محیط ترانسپورت مناسب (specific, leak proof, unbreakable, sterile)
آماده نکردن و عدم آموزش بیمار قبل از نمونه برداری
محکم نبستن در محیط ترانسپورت که منجر به بیرون ریختن و در نتیجه آلودگی می شود
رعایت نکردن شرایط نگهداری نمونه و ارسال آن در مدت زمان صحیح

34. روشهاي تشخيص
آزمايشگاهي
كشت و
آگلوتيناسيون
سرولوژي
آنتي بادي
فلورسنت مستقيم
DFA
PCR

35. كشت روش استاندارد طلايي در ميان روشهاي آزمايشگاهي است
كشت نمونه هاي ارسالي بر روي محيط برده ژانگو و رگان لو(با سفالكسين و بدون سفالكسين)
انكوباسيون در °C37-35 و كنترل كشت باكتري تا 9 روز در شرايط مناسب همراه با رطوبت
در صورت رشد باكتري بر روي محيط، تهيه اسمير از كلني هاي مشكوك و رنگ آميزي گرم
در صورت مشاهده كوكوباسيلهاي گرم منفي:
انجام تستهاي تشخيصي اكسيداز (+) و حركت (-) و API
5. انجام تست اسلايد آگلوتيناسيون با استفاده از
آنتي سرمهاي پلي كلونال براي تاييد باكتري بوردتلا پرتوسيس و پارا پرتوسيس

36. Real-Time PCR
عبارت است از تكثير ناحيه خاصي از ژنوم باكتري كه بسيار اختصاصي است
بهترين تست تشخيصي
زمان كوتاه آزمايش
حساسيت بالا (<=1 CFU/ 5 µl sample)
اختصاصيت بالا
عدم نياز به باكتري زنده (مشكلات ناشي از نمونه گيري و طريقه انتقال نمونه را ندارد)

37. معايب PCR نياز به وسايل و تجهيزات دقيق
هزينه بسيار بيشتر از روش كشت و DFA
عدم استاندارد سازي اين روش
بازدارنده هاي PCR
واكنش متقاطع با گونه هاي ديگر باكتري در صورت استفاده از IS481

38. آيا سياه سرفه قابل پيشگيري و درمان است؟
آنتي بيوتيك
واكسيناسيون
ماكروليدها
اريترومايسين
آزيترومايسين
كلاريترومايسين
تري متوپريم-سولفومتوكسازول
سفالوسپورينها
كموپروفيلاكسي

39. واكسناسیون
واكسيناسيون بهترين راه كنترل بيماري سياه سرفه و افزايش ايمن سازي است
واكسن تهيه شده از سلولهاي بوردتلا پرتوسيس (whole cell Pertussis vaccine) کشته شده با حرارت يا فرمالين در اواسط دهه 1930 ساخته شد
واكسن سه گانه DPT (Diphtheria, Pertussis, Tetanus) در اواسط دهه 1940 در سراسر جهان مورد استفاده قرار گرفت (واكسن سياه سرفه به تنهايي استفاده نمي شود و تنها به صورت تركيب با توكسوئيد كزاز و ديفتري مي باشد)
كارايي واكسن پس از سومين دوز 80 تا 90% مي باشد

40. در سال 1981 توسط محققان ژاپنی واكسن آسلولار (acellular) حاوي توكسين پرتوسيس و هماگلوتينين رشته اي معرفي شد
از سال 2005 واكسن آسلولار
Tetanus, Diphtheria, acellular Pertussis) TdaP ( در آمريكا تجويز گرديد
كارايي اين واكسن :
70% بر عليه عفونتهاي تاييد شده با روش كشت
80% بر عليه سرفه هاي شديد

41. سوالاتي در رابطه با واكسيناسيون آسلولار
واكسيناسيون سياه سرفه چه عوارضي مي تواند داشته باشد؟ معمولا در محل تزريق التهاب، قرمزي و خارش به وي‍ژه در نوبت چهارم واكسيناسيون مشاهده مي شود. از عوارض احتمالي ديگر آن نيز تب خفيف، كم اشتهايي، خستگي و حالت تهوع را مي توان نام برد.
آيا واكسيناسيون مي تواند منجر به بيماري سياه سرفه گردد؟ خير
چه كساني نبايد واكسينه شوند؟ كسانيكه واكنش آلرژيك شديدي به دوز قبلي نشان دهند، افراد داراي شرايط خاص عصبي و افرادي كه داراي بيماري خاصي هستند
آيا در دوران بارداري واكسيناسيون صورت مي گيرد؟ در صورتي كه فرد باردار در شرايط پرخطر باشد بايد واكسينه شود اما در غير اين صورت بهتراست تا وضع حمل به تاخير افتد.

44. نحوه برخورد با اطرافیان بیمار چگونه باید باشد؟
واکسیناسیون اولیه یا یاد آور DPT برای کودکان کمتر از 5 سال (چنانچه در 6 ماه گذشته نوبت یادآور دریافت نکرده یاشد ) انجام میشود .
برای افرادی که در معرض تماس بوده اند اریترومایسین وآزيترومايسين به میزان mg/kg 50بمدت 10 روز تجویز میشود.
در صورت دسترسی به فرد در تماس با بیمار ،باید از گلو و بینی فرد فوق با سواپ نمونه برداری شود.
اعضای خانواده بیمار ، باید روزانه از نظر بیماری کنترل شوند .

45. موارد گزارش شده از CDC از سال 1980 تا 2008 در ایران
موارد گزارش شده از سال تا 2008 در ایران

46. وضعیت موارد ارسالی مشکوک به سياه سرفه به انستیتو پاستور ایران طی چهار سال اخير

48. نمونه هاي ارسالي به انستيتو پاستور در سال 1389به تفكيك استانها

49. اشكالات معمول در موارد ارسالي
يك سواب
سواب پنبه اي
بدون ترانسپورت
بدون سواب
بدون فرم
آ لودگی محیط
فقط سرم ارسال شده است
فرم دیفتری پر شده است
نقص در تکمیل فرم
بی نام وشماره تماس
تاخیر در ارسال نمونه

51. دیفتری

52. ديفتري چیست؟ (Diphtheria)
یکی از بیماریهای عفونی حاد است
میزبان آن فقط انسان است
عفونت حاصله بطور معمول به حلق ، حنجره و حفره های بینی محدود میشود
مشخصه اصلی بیماری: ایجاد يك غشا كاذب خاكستري يا شيري رنگ و انتشار آن در سطح لوزه ها و حلق
گاهی با انتشار توكسين از طريق خون : ايجاد ضايعات هموراژيك و نكروتيك، گرفتاری پوست ، ملتحمه ، گوش و ژنیتال
دو فرم از دیفتری وجود دارد که شامل
بیماری تنفسی و دیفتری زخم می باشد.
Pertussis, or whooping cough, is a highly contagious acute respiratory infection caused by Bordetella pertussis, a gram-negative aerobic bacillus. It is one of the most highly communicable of all infectious diseases, easily transmitted from one person to another via coughed aerosolized droplets.
The disease may occur at any age, but it manifests most severely in infants and young children, in whom it is potentially life-threatening. In adults and adolescents, pertussis is relatively mild; the only symptoms may be those of a minor, nonspecific upper respiratory tract infection, or there may be no symptoms whatsoever. Diagnosis is thus difficult in this age group. Infected adults and adolescents with mild disease constitute the reservoir for infection in infants and young children.
Edwards KM, Decker MD, Mortimer EA Jr. Pertussis vaccine. In: Plotkin SA, Orenstein WA, eds. Vaccines. Philadelphia, PA: WB Saunders; 1999:
Scott PT, Clark JB, Miser WF. Pertussis: an update on primary prevention and outbreak control. Am Fam Physician. 1997;56:

53. چه عاملی منجر به ایجاد بيماري می شود؟
باسيل گرم مثبت با نام کورینه باکتریوم دیفتریه
(Corynebacterium diphtheriae)
هوازي
غير متحرك
اشکال گرزی یا چماقی (علت نام گذاری)
باکتری در حرارت 58 درجه سانتیگراد به مدت ده دقیقه از بین میرود
به UV و نور خورشید حساس
به خشکی مقاوم و در خاک به مدت 5 هفته زنده باقی می ماند
دارای سه بیوتایپ:
Gravis
Intermedius
Mitis

54. عامل اصلی ایجاد کننده عوارض دیفتری: توکسین ناشی از باکتری
توليد توكسين فقط در صورت آلوده شدن باكتري با فاژ حاوي ژن مولد توكسين صورت مي گيرد
در آزمایشگاه این باکتری باید از تعداد زیادی از گونه های کورینه باکتریو م (در مجموع دیفترویید نامیده می شوند) که فلور طبیعی پوست و دستگاه تنفس هستند متمایز شوند
هر دو گونه سم زا و بدون سم باكتري ايجاد بيماري مي كنند ولي گونه هاي توليد كننده توكسين علائم سيستميك نيز ايجاد كرده و بيماري شديد و كشنده مي دهند.

55. علائم بیماری
تب خفیف، گلودرد، سرفه و خشنونت صدا، سردرد، بزرگی لوزه ها و غشای كاذب خاكستری رنگ برروی لوزه ها اگر دیفتری به طور مناسب درمان نشود ممكن است عفونت گسترش یابد، همچنین در صورت انتشار سم به بدن سم میكروب روی قلب و اعصاب اثر گذاشته سبب نارسایی قلبی و فلج عضلات اندام ها می شود.

56. طریقه انتقال باکتری به افراد
دستگاه تنفس
پوست (بندرت)
شیوع بیماری در زمستان وبهار

57. موارد بیماری
مورد مظنون دیفتری : انواع فارنژیت حاد، نازوفارنژیت حاد با غشاءکاذب و لارنژیت حاد در تشخیص افتراقی آن قرار میگیرند .
مورد محتمل دیفتری : با وجود غشاء چسبنده در لوزه ها ، حلق و یا بینی و متعاقب هر یک از موارد لارنژیت ، فارنژیت و یا تونسیلیت مشخص میشود.
مورد قطعی دیفتری : یک مورد محتمل که از طریق آزمایشگاه تایید شود و یا با یک مورد قطعی آزمایشگاهی از نظر همه گیری ارتباط داشته باشد

58. نمونه گیری نمونه گيري از طريق پرسنل آموزش ديده صورت مي گيرد
آماده كردن بيمار با توضيح در خصوص نمونه گيري
كامل كردن پرسش نامه
آماده كردن دستكش و ماسک و 6 عدد لام و 6 عدد سواب
استفاده از آبسلانگ چوبی استریل جهت پایین نگه داشتن زبان در حین نمونه گیری
محيط كشت ترانسپورت دیفتری Amies (به صورت در بسته تا دو ماه در یخچال می توان نگه داشت)
( به ازاي هر بيمار 3 محيط ترانسپورت ، 6 سواب استریل و6 عدد لام فرم مشخصات بيمار داده مي شود)

59. موضع نمونه گیری الف- نمونه گیری از بینی : ب- نمونه گیری ازگلو:
بوسیله 2 سواب پنبه ای نمونه از بینی گرفته شده، یکی از آن دو
را روی ترانسپورت دیفتری برده و سواپ دوم را روی 2 لام کشیده
تا اسمیر مناسب جهت رنگ آمیزی آلبرت تهیه شود.
ب- نمونه گیری ازگلو:
بوسیله 2 سواپ پنبه ای نمونه از گلو گرفته شده، یکی از آن دو را روی ترانسپورت دیفتری برده و سواپ دوم را روی 2 لام کشیده تا اسمیر مناسب جهت رنگ آمیزی گرم و آلبرت تهیه شود.
ج- نمونه گیری ازغشای کاذب:
بوسیله 2 سواب پنبه ای نمونه از غشای کاذب گرفته شود (غشای کاذب را بلند کرده از زیر غشای کاذب نمونه گیری می کنیم)،یکی از آن دو را روی ترانسپورت دیفتری برده و سواب دوم را روی 2 لام کشیده تا اسمیر مناسب جهت رنگ آمیزی گرم و آلبرت تهیه شود.

60. مراحل تشخيص آزمايشگاهي بيماري
ارسال نمونه ها به مراکز تشخیصی (پاستور)
نمونه گيري از بیمار
ارسال محيط ترانسپورت به مراكز درماني
تشخيص آزمايشگاهي
كشت و انجام آزمایشات بیوشیمیایی
رنگ آمیزی گرم و آلبرت
آزمایش الکToxigenicity

61. رنگ آمیزی البرت: برای دیدن دانه ها متاکروماتیک و دیدن آرایش آنها
مراحل آزمایش دیفتری
1- رنگ آمیزی نمونه ها از ترشحات گلو، بینی وغشای کاذب
رنگ آمیزی گرم: برای دیدن آرایش باسیل ها (کورینه باکتریوم ها) یا مشاهده فوزوباکتریوم ها واسپیروکت ها برای تشخیص آنژین ونسان.
رنگ آمیزی البرت: برای دیدن دانه ها متاکروماتیک و دیدن آرایش آنها
Black particles in the ends.

62. 2- کشت نمونه ها الف: کشت سوآب های ترانسپورت دیفتری روی محیط لفلر
دانه های متاکروماتیک درگسترشی که از این محیط تهیه می شود بخوبی نمایان است
بعضی از انواع گراویس روی این محیط رشد نمی کنند
کلنی های تیپ های سه گانه باسیل دیفتری را نمی توان روی این
محیط ازیکدیگر تشخیص داد
ب: کشت برروی تلوریت پتاسیم: کلنی سیاه رنگ با هاله ای دراطراف آن
ج: کشت برروی محیط الک
برای تسریع در جواب دهی وپی بردن به توکسین زایی
باکتری

63. 3- جداسازی
برای تفکیک یا جداسازی باکتری از میکروفلورگلو یا سوشهای همراه، کشت بر روی محیط تلوریت پتاسیم انجام می شود. بواسطه وجود تلوریت پتاسیم، از رشد عده زیادی از میکروبهای دیگر ممانعت بعمل می آید، و محیط برای دیفتری محیط اختصاصی می شود.
کلنی تیپ های سه گانه میکروب دیفتری روی این محیط بخوبی از یکدیگر قابل تمیز می باشد.
کلنی گراویس به بزرگی 3-2 میلیمتر و شبیه گل مینا می باشد.کلنی انترمدیوس به بزرگی 1میلیمتر و شبیه تخم قورباغه و کلنی می تیس به بزرگی 2-1 میلیمتر و شبیه تخم مرغ نیمرو شده می باشد.
بعضی از انواع می تیس روی این محیط رشد نمی کند
رشد باسیل دیفتری روی این محیط کند است و بین ساعت طول می کشد تا کلنی تشخیص داد ه شود.

64. 4- تشخیص تولید توکسین در باکتری (Elek test)
دراین روش آنس آغشته به باکتری را عمود بر نوار آنتی توکسین کشت می دهیم. درصورت وجود کورینه باکتریوم که واجد توکسین می باشد، خط رسوبی با زاویه 45 درجه نسبت به نوار آنتی توکسین تشکیل می شود.

65. طریقه درمان استفاده از آنتی توکسین دیفتری استفاده از آنتی بیوتیکها
واکسیناسیون
Produced in horses
First used in the U.S. in 1891
Used only for treatment of diphtheria
Neutralizes only unbound toxin

66. واکسیناسیون
واکسن دیفتری شامل توکسویئید دیفتری غیر فعال شده با فرمالین است
شامل واکسن سه گانه دیفتری-کزاز-سیاه سرفه (DTP)
4 نوبت:
2 و4 و 6 ماهگي و ماهگي
(هر بار 0/5 ميلي ليتر داخل عضلاني)
نوبت پنجم: يادآوري 4-6 سالگي (0/5 ميلي ليتر)

67. اقدامات لازم برای موارد تماس با بیمار
وضعیت واکسیناسیون افراد تماس داشته با بیمار بررسی شود و واکسن اول یا یاد آور مطابق جدول واکسیناسیون تلقیح شود .
بر اساس دسترسی به امکانات آزمایشگاهی ، قبل از اقدام به درمان تهیه کشت از بینی و گلوی افراد در معرض تماس با بیمار اهمیت دارد (موارد تماس بایستی در شروع بیماری ایزوله گردند )
·برای همه موارد تماس در افراد کمتر از 6 سال سن ، یک درز واکسن ثلاث تزریق شود و چنانچه با بیماری در تماس بوده اند که بیماری اش 7 روز طول کشیده و تحت درمان نیز قرار نگرفته است باید از پنی سیلین بنزاتین بمیزان واحد نیز استفاده شود.
در مورد تماس افراد با بیش از 6 سال سن، تزریق یک دز واکسن توام بالغین و پنی سیلین بنزاتین بمیزان واحد ضروری است.

68. موارد گزارش شده از CDC از سال 1980 تا 2008 در ایران
موارد گزارش شده از سال تا 2008 در ایران

69. نمونه فرم مشخصات بیمار

70. وضعیت موارد ارسالی مشکوک به دیفتری به انستیتو پاستور ایران طی چهار سال اخير

73. Questions