1. Genetika uveálnych melanómov
Furdová Alena, Smolková Božena, Böhmer Daniel, Svetlošáková Zuzana, Horkovičová Kristína, Babál Pavel, Oláh Zoltán

2. Uveálny melanóm
uveálny melanóm ohrozuje pacienta zhoršením videnia, stratou oka a smrťou v dôsledku metastáz
incidencia okolo 0,7 na obyvateľov
rýchly a expanzívny rast, schopnosť infiltrácie a diseminácie
asi 30% pacientov zomiera v dôsledku metastáz
výskyt nad 55 rokov, častejšie u mužov
prežívanie 5 rokov od liečby viac ako 50% pacientov

3. Diagnostika oftalmoskopia + fotografia fundu ultrasonografia
fluoroangiografia
optická koherenčná tomografia CT
MRI
PET
onkomarkery ?
biopsia ?
cytogenetika ?

4. Diagnostika 
Takmer všetky intraokulárne melanómy možno dg. oftalmoskopicky či biomikroskopicky
Niektoré vyžadujú celoživotný monitoring (+fotodokumentácia - podozrivé névy a melanocytómy
Po operácii je prognóza závislá od rôznych faktorov (veľkosť- objem tumoru, štádium, celkový stav pacienta...)

5. Cytogenetika uveálneho melanómu
pokrok v cytogenetike a molekulárnej genetike umožnil lepšie preskúmanie genetických aspektov MMU
samotný gén pre MMU sa zatiaľ nepodarilo identifikovať
najpozoruhodnejšou abnormalitou MMU je strata celého chromozómu 3 - monozómia 3
v súčasnosti sa výsledky výskumu ešte neuplatňujú v klinickej praxi na Slovensku

6. Najnovšie štúdie sa zameriavajú na zisťovanie abnormalít : - monozómiu 3. chromozómu - parciálnu deléciu krátkeho (p) ramena 9. chromozómu - multiplikáciu dlhého (q) ramena 8. chromozómu - komplementárne získanie materiálu chromozómu 6p a redukciu materiálu chromozómu 6q2. Baggetto LG, Gambrelle J, Dayan G, et al. Major cytogenetic aberrations and typical multidrug resistance phenotype of uveal melanoma: current views and new therapeutic prospects. Cancer Treat Rev. 2005;31:361–379. Maat W, Jordanova ES, Zelderen-Bhola SL, et al. The heterogeneous distribution of monosomy 3 in uveal melanomas: implications for prognostication based on fine-needle aspiration biopsies. Arch Pathol Lab Med. 2007;131:91–96. Singh AD, Sisley K, Xu Y, et al. Reduced Expression of autotaxin predicts survival in uveal melanoma. Br J Ophthalmol. 2007;91:1385– Damato B, Duke C, Coupland SE, et al. Cytogenetics of uveal melanoma: a 7-year clinical experience. Ophthalmology. 2007;114:1925–1931.

7. Podľa matematických výpočtov nádor začína metastázovať po dosiahnutí objemu 7 mm3
na základe tohto zistenia môžeme predpokladať, že monozómia 3 nastáva v skorých vývojových štádiách nádoru (MMU)...
Nareyeck G, Zeschnigk M, Bornfeld N, Anastassiou G. Novel cell lines derived by long-term culture of primary uveal melanomas. Ophthalmologica. 2009;223(3): Epub 2009 Feb 12.
Abdel-Rahman MH, Christopher BN, Faramawi MF, Said-Ahmed K, Cole C, McFaddin A, Ray-Chaudhury A, Heerema N, Davidorf FH. Frequency, molecular pathology and potential clinical significance of partial chromosome 3 aberrations in uveal melanoma. Mod Pathol Apr 15. [Epub ahead of print]
Shields CL, Ganguly A, Bianciotto CG, Turaka K, Tavallali A, Shields JA. Prognosis of uveal melanoma in 500 cases using genetic testing of fine-needle aspiration biopsy specimens. Ophthalmology Feb;118(2):

8. Zhodnotenie prvých výsledkov genetickej analýzy
z materiálu nádoru (MMU)
2. limbálnych buniek enukleovaného bulbu
3. buniek periférnej krvi u pacientov po enukleácii pre malígny melanóm

9. Odber materiálu:

10. Odber hneď po enukleácii sterilne – odobratý materiál vložený do špeciálneho média do 15 minút od prerušenia krvného obehu

11. Metodika cytogenetiky
kultivované nádorové bunky – klasická cytogenetická analýza
vyšetrované chromozómy v c-metafáze
konvenčné farbenie (G-band)
karyotypizácia limbálnych buniek

12. Pacient 1

13. Pacient 1
Histologické vyšetrenie: MM zmiešaný epiteloidný a vretenobunkový typ B, štádium G2
Imunofenotyp: vimentín+, melanA +, HMB45 +, S100 +, cyklín D1 +90%,
p %, Ki %
Nepriaznivá prognóza, hoci nízky index Ki67

14. Pacient 2

15. Pacient 2 Histologické vyšetrenie: MM vretenobunkový typ A, štádium G2
Imunofenotyp:
p53 menej ako 5%, cyklín DL menej ako 5%, Ki 67 10%, S HMB45 +
Imunofenotyp svedčí pre lepšiu prognózu

16. Pacient 3

17. Pacient 3 Histologické vyšetrenie: MM vretenobunkový typ A, štádium G2
Imunofenotyp:
p53 60%, cyklín DL menej 31%,
Ki 67 menej ako 5%, S100 +, HMB45 +
Imunofenotyp svedčí pre priaznivejšiu prognózu

18. Pacient 1 Získaných cca 70 metafáz s nesúrodým cytogenetickým nálezom:
- v 20 prítomná polyplodia (tetraploidia, oktaploidia alebo endoreduplikácia )
- v 50 prítomná diploidia, pričom väčšinou išlo o bunky nesúrodo aneuploidné (počet chromozómov 45 – 48)
V diploidných mitózach predpokladáme prítomnosť štruktúrnych chromozómových aberácií, ktoré sme však vzhľadom na použitú metodiku nemohli identifikovať.
V každej analyzovateľnej metafáze bol však prítomný nadpočetný chromozóm skupiny A (chromozóm č.3) a malý mediocentrický marker chromozóm, pôvod ktorého nevieme identifikovať.

19. Pacient 2 Získaných cca 50 metafáz:
- tetraploidné bunky neboli prítomné
- v diploidných mitózach predpokladáme prítomnosť štruktúrnych chromozómových aberácií, ktoré sme však vzhľadom na použitú metodiku nemohli identifikovať.
V každej analyzovateľnej metafáze bol však prítomný nadpočetný chromozóm skupiny A (chromozóm č.3).

20. Pacient 3 Získaných 5 metafáz: - 1 tetraploidia
- 4 diplodie veľmi nízkej kvality (nie je ani obrázok!!!!) – v nich však boli prítomné hodnotiteľné chromozómové zlomy a prítomné acentrické chromozómové fragmenty, čo svedčí o vplyve mutagénu na vyšetrované bunky (pacient po rádiochirurgii)
- marker chromozóm nebol prítomný

21. Pacient 1
Periférna krv: cytogenetickým vyšetrením stanovený normálny konštitučný karyotyp, numerické ani štruktúrové anomálie chromozómov sa nepozorovali

22. Pacient 2
Periférna krv: cytogenetickým vyšetrením stanovený normálny konštitučný karyotyp, numerické ani štruktúrové anomálie chromozómov sa nepozorovali

23. Pacient 3
Periférna krv: cytogenetickým vyšetrením stanovený normálny konštitučný karyotyp, numerické ani štruktúrové anomálie chromozómov sa nepozorovali

24. Závery 1
klinický význam chromozómových abnormalít ešte nie je docenený, skríning primárneho MMU je len v začiatkoch.
genetické aspekty v budúcnosti ovplyvnia pravdepodobne vo významnej miere aj terapiu primárneho MMU
pokiaľ sa potvrdia predpoklady o nemetastatickom charaktere MMU s dizómiou chromozómu 3, asymptomatické nádory by sa nemuseli liečiť za podmienky, že ich rast neohrozí zrak

25. Závery 2 INTERDISCIPLINÁRNA SPOLUPRÁCA
pacienti s “high-grade” – s vysokým rizikom MMU navyše nemusia súhlasiť s enukleáciou a obetovaním ešte užitočného zraku v situácii, keď by nádej na zlepšenie ich prežívania bola márna
cytogenetické štúdie by mohli byť kľúčom k odhaleniu vzťahu medzi vznikom recidív a metastáz
INTERDISCIPLINÁRNA SPOLUPRÁCA

26. Ďakujem za pozornosť