1. Možnosti a úskalia laboratórnej diagnostiky bakteriálnych a vírusových infekcií v súvislosti s migráciou
Czirfuszová M.,Perďochová Ľ., Hučková D., Zajacová H., Rosinský J.
HPL spol. s r.o., člen Medirex Group,
NRC pre Vibrionaceae, RÚVZ Komárno
Vaše spoľahlivé laboratórium

3. Pôvod migrantov prichádzajúcich cez západobalkánsku migračnú trasu
63% Sýria 23 % Afganistan 7% Irak 2% Pakistan 5% krajiny Východnej Afriky (Somálsko, Eritrea, Etiópia)
Vaše spoľahlivé laboratórium

4. Zdravotné riziká migračnej vlny
nezmáma/chýbajúca preočkovanosť migrantov
choroby ktoré sa v EÚ nevyskytujú, alebo sú sporadické sa môžu opäť objaviť
nepripravenosť zdravotníckeho personálu na diagnostiku zriedkavých infekcií
vyššia zaťaženosť zdravotníckych zariadení v cieľových štátoch (Nemecko, Švédsko, Dánsko)
ekonomická náročnosť zdravotnej strarostlivosti o migrantov
Vaše spoľahlivé laboratórium

5. Povinne hlásené infekcie u migrantov od 28.9 do 13.12.2015 v Nemecku
Robert Koch - Institut, Nemecko
Celkový počet hlásených prípadov: 1896
w.rki.de/DE/Content/Gesundheitsmonitoring/Gesundheitsberichterstattung/GesundAZ/Content/A/Asylsuchende/Inhalt/meldepflichtige_Infektionskrankheiten_bei_Asylsuchenden.pdf
Ovčie kiahne
544
Giardiáza 46
Tuberkulóza
302
Šigelóza 23
Hepatitída B
232
Salmonelóza 16
Rotavírusová gastroenteritída
218
Kampylobakterióza 15
Norovírusová gastroenteritída
195
Návratná horúčka 11
Influenza 97
Brušný týfus 9
Hepatitída A 83
Osýpky 5
Hepatitída C 68
Diftéria 1

6. Ktoré bakteriálne infekcie môžu ostať nerozpoznané pri rutinnej mikrobiologickej analýze?
Cholera
Brušný týfus
Diftéria
Vaše spoľahlivé laboratórium

7. Cholera
Pôvodca: Vibrio cholerae, séroskupiny O1, O139
Epidémie sa t.č. vyskytujú v Afganistane, Iraku, Somálii.
(ECDC Technical document, Infectious diseases of specific relevance to newly – arrived migrants in the EU/EEA, ).
Zdroj nákazy: voda, kontaminované potraviny, nespracované morské plody, zelenina (umytá v infikovanej vode),
Inkubačná doba: hodín
Vaše spoľahlivé laboratórium

8. Kedy myslieť na choleru?
osoby pochádzajúce z oblastí kde sa
ochorenie vyskytuje
príznaky:
akútna vodnatá hnačka bez kŕčov a tenezmov,
vracanie
akékoľvek hnačkovité ochorenie
teplota v axile je normálna, v rekte zvýšená
stolica bez prímesi krvi alebo hnisu
zápalové markery v norme alebo mierne
zvýšené
Vaše spoľahlivé laboratórium

9. Odber a transport biologického materiálu
Vzorky biologického materiálu:
hnačkovitá stolica do sterilnej nádobky
výter z rekta do Amiesovej transportnej pôdy s aktívnym uhlím
Transport do 2 hodín pri izbovej teplote.
Cielený odber:
Cary- Blairovho transportné médium
Alkalická peptónová voda
Transport do 24 hodín pri izbovej teplote.
Vaše spoľahlivé laboratórium

10. Mikrobiologická diagnostika
Očkovanie vzorky: KA, MC, DC, SAB
Pri cielenom odbere: alkalická peptónová voda, TČZS
Morfológia
Malé, zakrivené gramnegatívne paličky
Pohyb
Svižný, „raketový“ pohyb
Oxidázový test
Pozitívny
„String“ test
Pôda podľa Hajna
Spodná aj šikmá časť žltá, bez plynu, bez sírovodíka
Indol
Urea
Negatívna
Lyzíndekarboxyláza
Pozitívna
MALDI-TOF
Vibrio sp.
Zdroj:Klement C. a spol. : Mimoriadne udalosti vo verejnom zdravotníctve, 2011, kapitola 14. , str.:
NRC pre Vibrionacae

11. Nadstavbová diagnostika
NRC pre Vibrionacae, RÚVZ Komárno
aglutinačné antiséra na určenie V. cholerae O1,
sérotypy Ogawa, Inaba, Hikojima,
V. cholerae O139
stanovenie produkcie cholerového toxínu –
aglutinačná metóda
PCR v spolupráci s Oddelením imunochémie SAV
Vaše spoľahlivé laboratórium

12. Brušný týfus Pôvodca: Salmonella Typhi
(Salmonella enterica subsp. enterica sérovar Typhi)
23 prípadov v utečeneckom tábore južne od Damasku v auguste 2015, v septembri ďalších 90 prípadov.
(ECDC, Rapid risk assessment, )
Zdroj nákazy: voda, potraviny, predmety kontaminové výkalmi a/alebo močom infikovaného človeka alebo bacilonosiča.
Inkubačná doba: 5-21 dní, bežne 7-14 dní
V prírode je hostiteľom iba človek.
Infekčná dávka je mikroorganizmov
Vaše spoľahlivé laboratórium

13. Kedy myslieť na brušný týfus?
Príznaky:
pozvolne stúpajúca teplota
kontinuálna horúčka (39-41 ºC) s minimálnymi výkyvmi, bez zimníc
bolesti hlavy, nauzea, slabosť, myalgie, dezorientovanosť
suché sliznice, povlečený jazyk
Bradykardia, hypotenzia
palpačne citlivé brucho, hepatosplenomegália
leukopénia, relatívna lymfocytóza, eozinopénia, anémia, trombocytopénia,
známky poškodenia obličiek a pečene, DIC
týfusová roseola
Vaše spoľahlivé laboratórium

14. S akým stavom sa pravdepodobne stretnú zdravotníci u migrantov
prichádzajúcich do EÚ ?
relaps brušného týfusu
vylučovanie S. typhi v stolici – 3 mesiace
bacilonosičstvo – u cca. 3 % osôb
v žlčníku – chronická cholecystitída
v močových cestách
chronická osteomyelitída s fistulou
Vaše spoľahlivé laboratórium

15. Odber vzoriek v akútnom štádiu
1. týždeň hemokultivácia, sternálny punktát 2. týždeň stolica 3. týždeň stolica, sérum (Widalova reakcia)
Vaše spoľahlivé laboratórium

16. Odber vzoriek pri diagnostike bacilonosičstva
Stolica – sterilný kontajner,
transport pri izbovej teplote do 24 h
Výter z rekta – do transportnej pôdy podľa Amiesa s aktívnym uhlím, transport pri izbovej teplote do 24 h
Moč – sterilná skúmavka, transport v chlade do 2 h
Žlč cez duodenálnu sondu – sterilná skúmavka,
transport pri izbovej teplote do 2 h
Vaše spoľahlivé laboratórium

17. Odber vzoriek pri diagnostike bacilonosičstva
Časovanie odberov:
intermitentné vylučovanie S. Typhi
odber vzoriek 3x, 3 dni po sebe
Informovať mikrobiologické laboratórium.
Vaše spoľahlivé laboratórium

18. Mikrobiologická diagnostika
Kultivácia stolice/výteru z rekta
KA, MC, DC, selenitový bujón
Hajnova pôda (TSI), MIU
2. Sérotypizácia
špecifickými antisérami podľa
Kauffmann-White schémy
(NRC pre salmonelózy)
O antigény: 9,12
Vi antigén
H antigén fáza 1: d
fáza 2: neprítomná
Vaše spoľahlivé laboratórium

19. Mikrobiologická diagnostika
3. Nepriama diagnostika
Protilátky proti telovým antigénom
Protilátky proti antigénom bičíka
Protilátky proti antigénom púzdra (Vi)
v nízkych titroch okolo týždňa
pri ťažkom priebehu infekcie
prítomné u bacilonosičov
Vaše spoľahlivé laboratórium

20. Citlivosť S. Typhi na antibiotiká rezistentné na AMP, CHL, COT
Testované antibiotikum
Percento rezistencie
nalidixová kyselina
31,57 %
ampicilín
29,47 %
chloramfenikol
28,42 %
kotrimoxazol
17,89 %
ciprofloxacín
4,21 %
ceftriaxon
6,31 %
MDR kmene – 10%
rezistentné na AMP, CHL, COT
Antimicrobial susceptibility of Salmonella Typhi in India, The Journal of Infection in Developing Countries 4(2):70-3 ·
 March 2010 
Vaše spoľahlivé laboratórium

21. Diftéria Pôvodca: Corynebacterium diphteriae
Výskyt prípadov hlásených WHO: sporadicky Irak, Eritrea, Somálsko.
(ECDC Technical document, Infectious diseases of specific relevance to newly – arrived migrants in the EU/EEA, ).
V júli 2015 evidovali 7 prípadov kožnej diftérie spôsobenej toxigénnym kmeňom u migrantov z Eritrei, Lýbie, Etiópie, Sýrie.
(ECDC Rapid risk assesment, )
Zdroj nákazy: chorý človek alebo bacilonosič
Prenos infekcie: aerosol, kontaminované predmety, priamy kontakt
Inkubačná doba: 2-4 dni
Vaše spoľahlivé laboratórium

22. Diftéria Patogenitu podmieňuje toxín. Klinické formy:
Faryngeálna forma
Laryngeálna forma
Nosová forma
Kožná forma
Malígna diftéria
Komplikácie:
srdcové – AV bloky, arytmie, dilatácia srdca
neurologické- obrny mäkkého podnebia, parézy okohybných svalov, paréza končatín
Vaše spoľahlivé laboratórium

23. Odber vzoriek Informovať mikrobiologické laboratórium
ster z ložiska, výter z hrdla po odstránení pablán
odber do transportnej pôdy podľa Amiesa s
aktívnym uhlím
transport pri izbovej teplote do 24 h
Informovať mikrobiologické laboratórium
pri podozrení na diftériu.
Vaše spoľahlivé laboratórium

24. Diftéria- laboratórna diagnostika
C. diphteriae dobre rastie aj na krvnom agare po h pri ºC, s 5 % CO2
Rastové typy:
gravis
mitis
intermedius
minimus
Identifikácia:
Biochemické testy – API Coryne
MALDI-TOF
Selektívne kultivačné médiá:
Claubergova pôda
Tinsdaleov agar
Vaše spoľahlivé laboratórium

25. Diftéria- nadstavbová diagnostika, dôkaz toxigenicity kmeňa
Vykonáva NRC pre diftériu, RÚVZ Košice
Test na dôkaz toxigenicity z kultúry kmeňa:
in vitro Elekov imunodifúzny test
imunochromatografický test
Real-time PCR: rýchly dôkaz prítomnosti diftéria toxín-kódujúceho génu tox
v izoláte
v biologickej vzorke
Vaše spoľahlivé laboratórium

26. Tuberkulóza Pôvodca: Mycobacterium tuberculosis Incidencia:
(ECDC Technical document, Infectious diseases of specific relevance to newly – arrived migrants in the EU/EEA, ).
Incidencia v SR v r. 2014: 6,2/
Košický kraj 8,05/ , Prešovský kraj 13,07/
46 prípadov u detí (r.2013 – 38 prípadov)
Vzhľadom na nízku incidenciu v SR bolo povinné pravidelné očkovanie novorodencov a preočkovanie tuberkulín negatívnych detí v 11. r zrušené od
(vyhláška MZSR 544/2011 Z.z. ktorou sa mení a dopĺňa vyhláška č. 585/2008 Z.z.)
Sýria
nízka
17/
Afganistan
vysoká
189/
Irak
25/
Eritrea
40-499/
Somálsko
285/
Vaše spoľahlivé laboratórium

27. Biologický materiál vhodný na mykobakteriologickú analýzu
spútum, indukované spútum
BAL, aspirát z dolných dýchacích ciest
pleurálny punktát
laryngeálny výter
likvor
punktáty, hnis, tkanivo
moč
gynekologický materiál
Vaše spoľahlivé laboratórium

28. Odber a transport sterilná odberová skúmavka/nádobka
sterilný vatový tampón na drôte bez
transportného média v sterilnej skúmavke
transport pri 4 ºC do 24 h
Vaše spoľahlivé laboratórium

29. Mikroskopická analýza
Detekčný limit:
105 mykobaktérií v 1ml
zlatý štandard
rýchla, jednoduchá
nízka citlivosť
neurčenie druhu
interpretácia – nález ART
Vaše spoľahlivé laboratórium

30. Kultivačná analýza Detekčný limit: 105 v 1 ml doba kultivácie
6 – 9 týždňov
priama izolácia
kmeňa
identifikácia, stanovenie citlivosti
Vaše spoľahlivé laboratórium

31. PCR amplifikácia DNA
Detekčný limit: 1 baktéria v 1ml citlivosť metódy 83,9 %
špecificita metódy 98,9 %
interval spoľahlivosti 95 %
výsledok do 24 hodín
vhodné sú najmä vzorky z dolných dýchacích ciest
Vaše spoľahlivé laboratórium

32. Stanovenie citlivosti
Kultivačná metóda - 4 týždne
Základná zostava antituberkulotík:
streptomycin, izoniazid, pyrazinamid, etambutol, rifampicin
Rozšírená zostava: ofloxacin, cykloserin, ethionamid, kanamicin,  linkomicín
MDR – rezistentný na izoniazid a rifampicin
XDR – MDR + rezistencia na 2 skupiny liekov druhej línie (cca. 9% MDR je XDR)
MDR v r celosvetovo ,
v EÚ ,
v SR 7
Vaše spoľahlivé laboratórium

33. Vírusové infekcie preventabilné očkovaním
Poliomyelitída, osýpky, rubeola, parotitída
Diagnostiku vykonávajú NRC pri ÚVZSR
HPL zabezpečuje transport vzoriek
Dostupná diagnostika:
Priamy dôkaz – na bunkových kultúrach, PCR
Nepriama diagnostika – stanovenie protilátok IgM a IgG
Vaše spoľahlivé laboratórium

34. Poliomyelitída Priamy dôkaz:
Vzorky: stolica, výter z nosohltana, prípadne krv, likvor
odber stolice - 2 vzorky s odstupom min. 24 h max. 14 dní od vzniku parézy, 1-2 ml alebo 1-2 g stolice, uchovávať pri 2-8 ºC,
výter z nosohltana - dakrónový tampón vložiť do virologického transportného média, uchovávanie do 4 ºC 48 h, potom zamraziť pri -70 ºC
Nepriamy dôkaz:
sérum - stanovenie vírusneutralizačných protilátok
Vzorka odobratá v akútnej fáze a rekonvalescentná vzorka za min. 3 týždne.
Vaše spoľahlivé laboratórium

35. Osýpky Priamy dôkaz: Nepriamy dôkaz:
výter z nazofaryngu, krv – počas prodromálneho štádia, do 1-2 dní po nástupe kožných príznakov
moč – týždeň a viac po nástupe kožných príznakov
likvor – izolácia vírusu je problematická, PCR je vhodná
Nepriamy dôkaz:
IgM – najvyššia senzitivita 2-3 dni po nástupe kožných príznakov, pretrvávanie príležitostne viac ako 12 mesiacov po infekcii/imunizácii
IgG – prekonaná infekcia, postvakcinačná imunita sérum, pri podozrení na SSPE aj likvor, ELISA
Vaše spoľahlivé laboratórium

36. Rubeola Priamy dôkaz: výter z hrdla, alebo výplach nazofaryngu -
dakrónový tampón do virologického transportného média, odobrať ihneď po nástupe kožných príznakov maximálne však do 4. dňa, transport pri 4 ºC do 48 h, pre dlhší transport zamraziť na -70 ºC
moč ml do sterilnej skúmavky, prvý ranný moč, do 2 týždňov od nástupu kožných príznakov
likvor - pri podozrení na encefalitídu spôsobenú vírusom rubeoly
Vaše spoľahlivé laboratórium

37. Rubeola Nepriamy dôkaz:
IgM – detegovateľné 5-30 dní po nástupe príznakov, často falošne pozitívne
IgG – detegovateľné od 8. dňa po nástupe kožných príznakov, druhá vzorka za 3 týždne, testovanie postvakcinačnej imunity
Avidita IgG – nízka – infekcia recentná, vysoká- prekonaná infekcia
Vaše spoľahlivé laboratórium

38. Parotitída Priamy dôkaz Nepriamy dôkaz:
bukálny ster po masáži príušnej žľazy-
masáž cca. 30 s, tampón umiestniť k vyústeniu príušnej žľazy, do 9 dní po nástupe príznakov
výter z hrdla – do 9 dní po nástupe príznakov
moč – do 14 dní po nástupe príznakov, min. 5 ml, sterilná skúmavka
likvor – pri podozrení na meningitídu spôsobenú vírusom, min. 1 ml, sterilná skúmavka
Nepriamy dôkaz:
IgM – v akútnej fáze sa deteguje vo vzorkách sér odobratých 5- 7 dní po nástupe príznakov
IgG – postvakcinačný status, 4x vzostup medzi akútnou a rekonvalescentnou vzorkou – susp. recentná infekcia
Vaše spoľahlivé laboratórium

39. Ďakujem za pozornosť www.hpl.sk
Vaše spoľahlivé laboratórium