1. نگهداری واستفاده از سویه های باکتریایی
نگهداری طولانی مدت نگهداری کوتاه مدت

2. ۱- نگهداري در ديپ فريزر و یا نیتروژن مایع)
نگهداری طولانی مدت
۱- نگهداري در ديپ فريزر و یا نیتروژن مایع)
حاوي ۵% خونTSAکشت باکتري مورد نظر روي محيط مغذي
گوسفند و در مورد ميکروارگانيسمهاي سخت رشد روي محيط شکلات آگار
پليتها را به مدت ۲۴- ۱۸ ساعت در دماي 2± 35 درجه سانتيگراد و در صورت نياز تحت شرايط CO2براي هر باکتري انکوبه نمائيد.
سپس از باکتري رشد يافته ، سوسپانسيون غليظي درmL100 _50در محيط محافظ كننده از سرما تهيه نمائيد

3. محيط محافظت کننده از سرما ميتواند خون گوسفند يا خرگوش دفيبرينه ، Skim milk- Tryptic Soy Broth (TSB) حاوي گليسرول استريل با غلظت نهايي ۱۵ _۱۰ % باشد
سپس از سوسپانسيون باکتريايي فوق به مقدار 0.5_1mlدر ويالهاي شيشهاي يا پلاستيکي کوچک استريل توزيع کنيد .
تعداد ويال ذخيره خود را براي مصرف يکسال آماده نمائيد.
سويه ها را ميتوان در برودت ۵۰ - تا ۷۰ - درجه سانتيگراد به مدت يکسال نگهداري نمود در صورت عدم دسترسي به فريزر ۷۰ – درجه
مي توان سويه هاي با رشد سريع را در فريزر ۲۰ - درجه نيز نگهداري نمود.

4. :در اين شرايط توجه به نکات زير ضروري است سويه هاي سخت رشد مانند هموفيلوس انفلوآنزا و نيسريا گنوره در اين دما قابل نگهداری نمی باشند و باید در 70- نگهداری شوند

5. سويه هاي بارشد سريع در اين دما عمر کمي دارند و تعداد زيادتري از آنها از بين ميروند. بنابراين توصيه يشود براي اطمينان از حيات سويه ها هر چند ماه ، طبق روش زير کشت داده شوند.

6. working control
عبارتست ازکشت مجدد از کشت ذخيره فريز شده که براي کنترل کيفيت کشتهاي محيط كشت و... استفاده مي شود. یک ویال را از فریزر خارج کرده و بلا فاصله زیر شیر آب
ولرم محتويات آنرا ذوب نمائيد. نمونه را روي محيط آگار خوندار يا شکلاته ( در مورد باکتريهاي سخت رشد)
تلقيح کرده و به مدت ۲۴انکوبه نماييد. ودر صورت نياز در شرايط 2 Coقرار میدهیم.

7. براي تهيه وركينگ كنترل از کشت ذخيره فريز شده ، روي پليت يا آگار شيبدار تلقيح و آنرا به مدت يک شبانه روز تا زماني که رشد مناسبي بدست آيد، انکوبه نمائيد. در مورد ارگانيسم هاي با رشد سريع اين پليت ياآگار شيبدار را مي توان در 8-2 درجه سانتيگراد يا در دماي اتاق تا مدت ۴ هفته نگهداري نمود بعد از هر پاساژخالص بودن و مورفولوژي کلنيها را بررسي نمائيد

8. از کشت ذخيره تا ۳ پاساژ پشت سر هم ميتوان انجام داد
از کشت ذخيره تا ۳ پاساژ پشت سر هم ميتوان انجام داد . پس از آن ، نمونه بايد دور انداخته شده واز يك وركينگ كنترل استفاده شود. پاساژهاي مکرر( بيش از ۳ پاساژ)، احتمال تغيير فنوتيپي سويه ها را افزايش ميدهد

9. استفاده از روغن معدني در دماي اتاق
Brain Heart Infusion Agar (BHIA) ۱- محيط کشت باکتريهاي مشکل پسند مانند گونوکک ، مننگوکک ، استرپتوکک پنومونيه و هموفيلوس آنفلوانزا . شکلات آگار را با افزودن ۵% خون گوسفند به محيط فوق پس از خروج از اتوکلاو و رسيدن به دمای ۵۰ درجه سانتیگراد و قرار دادن در بن ماري ۸۰ درجه سانتيگراد به مدت ۱۵ دقيقه تهيه نمود. ۲- روغن معدني ( يا پارافين مايع ) را در حرارت خشک ( ۱۷۰ درجه سانتيگراد به مدت يکساعت ) استريل نماييد. ۳- ميکروب مورد نظر را روي محيط کشت دهيد. ۱ روي سطح محيط بريزيد. cc ۴- بعد از بدست آوردن کشت کافي ، روغن استريل را به مقدار ۵- در صورت نياز به کشت مجدد ، نمونه از سطح آگار (زير روغن ) برداشته ميشود. ماه تجديد کشت نماييد. 6-بعد از 12-6 ماه تجديد كشت نماييد.

10. نگهداري کوتاه مدت
کشتهاي وركينگ كنترل که براي کارهاي روتين روزانه استفاده ميشوند ، به روشهاي زير تهيه ميشوند: باکتريهاي با رشد سريع لوله ای درپیچ دار کشت دهید TSA سوش مورد نظر را در سطح محيط را بمدت ۲۴ ساعت در اتو 2±35 درجه سانتيگراد انکوبه نماييد. پس از رشد کامل، لوله را در يخچال نگهداري کنيد وهر ماه کشت را تجديد نمائيد.

11. استرپتوككها
1- سوش مورد نظر را در سطح آگار خوندار شيبدار( لولهاي درپيچدار) کشت دهيد.
۲- محيط را بمدت ۲۴ ساعت در اتو 2±35 درجه سانتيگراد انکوبه نماييد.
۳- پس از رشد کامل، لوله را در يخچال نگهداري کنيد. ( جهت استرپتوکک پنومونيه ، محيط را در دماي
اتاق نگهداري کنيد.)
۴- هر ماه کشت را تجديد نمائيد.
مننگو کک و هموفيلوس
۱- سوش مورد نظر را در سطح محيط آگار شکلاته لوله اي يا پليت کشت دهيد.
۳- پس از رشد کامل، لوله را در حرارت اتاق نگهداري کنيد
۴- هر ۲ هفته کشت را تجديد نمائيد.
گونوکک
۱- سوش مورد نظر را در سطح محيط آگار شکلاته کشت دهيد.
۳- نمونه را در دماي ۳۵ درجه نگهداري نماييد.
۴- هر ۲ روز يکبار کشت را تجديد نمائيد.