1. Metapneumovirus - greiningaraðferðir
Berglind Aðalsteinsdóttir
18. apríl 2005

2. Metapneumovirus Fyrst uppgötvaður í Hollandi 2001
hefur verið til í áratugi!
Tilheyrir Paramyxoviridae
er náskyld RS veirunni
7-10% af bráðum öndunarfærasýkingum í ungum börnum.
3. algengasta orsök bronchiolitis á eftir RS og rhinovirus
Hefur fundist í frystum sýnum
Ástæðan fyrir því að hefur ekki fundist fyrr er hve erfitt er að rækta veiruna
Einkenni eru svipuð og hjá RS og árstíðarsveiflan svipuð þeas tíðni hæst
Eftir að veiran greindist fyrst hafa margar rannsóknir á mismunandi greiningaraðferðum farið af stað

3. Til eru fjórir hópar A1 A2 og B1 og B2

4. Greining veirusýkingar
Frumuræktun og einangrun veiru
erfitt að rækta og einangra Metapneumovirus, tekur 1-2 vikur, lélegt næmi.
Leit að Antigeni
ELISA, IFA (Immunofluorescent-antibody test)
Fljótlegar og tiltölulega einfaldar greiningaraðferðir
IFA næmi 73% f. metapneumovirus mv. PCR
Leit að RNA og DNA
PCR, næmasta og sértækasta greiningarprófið til að greina metapneumovirus í dag
Serologia
Mikilvæg til að greina á milli frumsýkingar og endursýkingar
Ekki gagnleg í bráðafasa mtt metapneumovirus

5. PCR- Polymerase Chain Reaction
Aðferð til að magna upp DNA
Þarf lítið magn sýnis (1-10ng DNA)
Tekur u.þ.b. 4-6 klst
Þarf sérstakar “græjur”, ekki hægt að framkvæma á öllum rannsóknarstofum

6. Reverse Transcriptase PCR
Aðferð til að magna upp RNA,
notað við greiningu RNA veira og til að meta veirumagn
Næmasta aðferðin til að greina og meta magn mRNA
Reverse transcriptasi er ensím sem retróveirur nota til að umbreyta RNA erfðamengi yfir í DNA copiu (cDNA)
RT- PCR: mRNA er einangrað, Reverse Transcriptasi notaður til að búa til cDNA sem er svo magnað upp með PCR með aðstoð sértækra primera.

7. Til að geta framkvæmt PCR þurfum við að þekkja hluta erfamengis þess er leitum að því við þurfum að nota primera sem eru oligonucleotide (basi, sykra og fosfat) sem þurfa að parast við DNA strenginn sem við ætlum að magna upp.
Primerarnir eru bundnir hitaþolnum poymerasa og er bætt út í sýnið
Fyrst er sýnið hitað upp í ca 90°C til að DNA tvístrendingarnir klofni í sundur, svo kælt niður í ca 60¨C til að primerarnir bindist DNA-einstrendingunum og polymerasinn vinnur vinnu sína
Endurtekið sinnum, fáum þá 2 í veldi
Svo er sýnið rafdregið á agarosagel og litað.

8. Greining metapneumovirus
Hafa í huga að til eru 4 genaafbrigði veirunnar
A1, A2, B1 og B2
Viljum að greiningarprófið nái til þeirra allra
Þarf að finna réttan primer
Real time RT-PCR (NL-N) næmasta og fljótlegasta leiðin sem höfum í dag

9. Skyndigreining Ekki enn búið að þróa fyrir metapneumovirus
Í ljósi þess hve algeng hMPV sýking þykir mikilvægt að hanna einfalda greiningaraðferð til að sjúklingar fái meðferð við hæfi
? Einangrun
? Ribavirin
Byggjast á því að þekkja/merkja viral antigen
Þarf að vera nægilegt magn antigena í sýnum, t.d. nefkokssogi
Rannsóknir hafa sýnt að veirumagn MPV mest í bifhærðu þekju öndunarvegs og að nefkoksslím innhaldi nægilegt magn antigena fyrir ELISA.
Í ljósi þess að -

10. Heimildir
Ebihara T, Endo R. Detection of hMPV antigens in Nasopharyngeal Secretions by an Immunofluorescent-ANtibody Test. J Clin Microbiol; 2005.
Landry ML et al. Detection of hMPV in Clinical Samples by Immunofluorescene Staining. J Clin Microbiol; 2005.
Maertzdorf et al. Real-Time RT- PCR Assay for Detection of hMPV from ALl KNown Genetic Lineages. J Clin Microbiol; 2004.
Bouscambert-Duchamp M et al. Detection of hMPV RNA Sequences in Nasopharyngeal Aspirates of Young French Childrenwith Acute Bronchiolitis. J CLin Microbiol; 2005.
Ishiguro N et al. Immunofluorescene Assy for detection of hMPV-specific Atibodies by Bac-F. Clin Diagn LAb Immunol; 2005.