1. 生物化學實驗 (II)

2. 前言 由於不論在學術研究與生物科技的應用上， 蛋白質一直是一個重要的標的。 本課程乃以純化特定的蛋白質為目標，藉 由專題方式進行蛋白質純化驗實，將各種 不同的純化技術包括實驗原理安排在本課 程中。

3. 教學目標 讓學生了解每個純化策略的原理 讓學生習得蛋白質純的操作技巧。 並教導學生如何將整理分析過的實驗結果 以書面與口頭報告的方式呈現。

4. 實驗課程表 預估時間實驗項目 中午 12:10 Check in( 清理實驗室及藥品配製及流程解釋 ) ( 需 5 小時 ) Protein Extraction (ammonium sulfate salting out and dialysis) 口頭報告 ( 需 13 小時 ) ( 需 14 小時 ) Ion exchanger Chromatography Gel filtration Chromatography 口頭報告 ( 需 5 小時 ) ( 需 7 小時 ) SDS-PAGE Electrophoresis (Coomassie Blue Stainning) Western Blotting Native PAGE Electrophoresis 口頭報告 科學新知介紹、清理實驗室 實驗期末考

5. 實驗儀器

6. 學生數據展現

7. SDS-PAGE 及 Western blotting 顯色結果 A ： SDS-PAGE CBG 染色結果 B ： Western blotting 顯色結果 1.  -Amylase(1μg); 2.Gel filtration 比活性最高 3. Gel filtration 蛋白質量最 高 4. Ion Exchange 比活性最高 ; 5. Ion Exchange 蛋白質量最高 ; 6. 100% 鹽析 (3μg) ; 7. 55% 鹽析 (3μg);8. 原液 (3μg); 9. Marker; 10. 原液 (0.6μg)

8. Native PAGE 及 Starch PAGE 顯色結果 A ： Native PAGE B ： Starch PAGE 1. Marker ； 2. 混合原液 (0.6μg) 3.60% 鹽析 (3μg); 4.100% 鹽 析 (3μg) 5. Ion Exchange 濃縮 (1μg)6.Gel filtration 比活性最 高 7.  -Amylase(0.1μg);

9. 課堂問卷 95 學年度 修課人數 :40 人。 (A 組 20 人、 B 組 :20 人 ) 施做問卷 :40 人

10. 課堂問卷 問題 選項比例 1 我覺得此課程預期的收穫是 (1) 獲得實用的技術 40/40 (2) 學習基本觀念、原理及理論 40/40 (3) 僅為取得學分 2/40 2 我覺得教材內容 (1) 太深奧 3/40 (2) 恰當 36/40 (3) 太簡單 1/40 3 教材與課程設計的目的 (1) 極不合 0/40 (2) 有些相合 0/40 (3) 吻合 40/40 4 我覺得教材份量 (1) 過多 3/40 (2) 適中 33/40 (3) 過少 4/40 5 我覺得教材撰寫方式 (1) 非常不易了解 0/40 (2) 有些不易了解 12/40 (3) 容易了解 28/40 6- 1 我覺得教材中蛋白質的純化與鑑定 有趣考慮增加考慮減少 (a) 硫酸胺沉澱及透析 10/400/40 (a) 層析法一 - 膠體過濾法 25/405/402/40 (a) 層析法二 - 離子交換樹酯 30/405/401/40 (a) 蛋白質聚丙稀醯胺膠體電泳分析 35/4029/400/40 (e) 西方轉漬及抗體呈色法 33/4015/400/40

11. 7 課程的實驗操作步驟 (1) 太複雜 0/40 (2) 有些複雜 9/40 (3) 適當 30/40 (4) 太簡易 1/40 8.1 課程的實驗儀器數目 (1) 相當缺乏 0/40 (2) 有些不夠 40/40 (3) 適當 0/40 9.2 課程所使用的實驗儀器種類與實 驗課程設計的目的 (1) 非常不配合 0/40 (2) 有些不配合 0/40 (3) 配合 40/40 10.3 課程的實驗儀器是否需汰舊換新 (1) 不需要 5/40 (2) 有些需要 30/40 (3) 非常需要 5/40 11 課程的實驗儀器數目 (1) 相當缺乏 0/40 (2) 有些不夠 32/40 (3) 適當 8/40 12 請具體指出哪些儀器需汰舊換新 ( 或增購 ) Spectrophotometer30/40 micropipetman5/40 微量離心機 29/40 高速離心機 10/40 自動收集器 25/40 迷你蛋白質電泳分析裝置 12/40 迷你蛋白質電泳轉印裝置 12/40 平板搖蕩器 9/40