1. 2010-10-23 蓝塘猪 SIRT6 基因 SNP 分析 姓 名：曾检华 导 师：李加琪 教授

2.  背景  材料与方法  结果  讨论

3. 影响母猪利用年限因素 初情期年龄和首次分娩 营养 后备母猪培育 遗传 泌乳期长度 繁殖障碍与疾病 一、背景

4. WTKO SIRT6 基因敲除小鼠骨密度下降而 出现脊椎弯曲，皮下脂肪减少而造成 皮肤变薄。以淋巴细胞明显减少为特 征的免疫功能下降和血糖严重降低的 代谢功能障碍等使其体积明显减小。 SIRT6 基因敲除小鼠发育到第三周 时就表现出衰老症状，大约 1 个月左右 死亡，比正常小鼠的寿命明显降低。 一、背景

5. SIRT6 抗衰老机制 一、背景 当敲除 SIRT6 时， NF-kappa B 变得 过度活跃，开启同衰老相关的基因， 导致了早熟和衰老。 当敲除 SIRT6 时， NF-kappa B 变得 过度活跃，开启同衰老相关的基因， 导致了早熟和衰老。 SIRT6 的功能缺陷使基因组中的 DNA 损伤修复减少和缺陷增多，从而抑制 细胞的分裂，促进细胞的死亡，最终 使个体出现衰老症状。 SIRT6 的功能缺陷使基因组中的 DNA 损伤修复减少和缺陷增多，从而抑制 细胞的分裂，促进细胞的死亡，最终 使个体出现衰老症状。 SIRT6 缺失导致了端粒的功能丧失， 出现了末端融合及细胞早衰的现象。 SIRT6 缺失导致了端粒的功能丧失， 出现了末端融合及细胞早衰的现象。

6. 猪 SIRT6 基因结构图 （首次获得了猪 SIRT6 基因完整的基因组序列，该序列大小约为 8671 bp, 包含 8 个外显子和 7 个内含子，所有的外显子和内含子的交界均遵 循 GT-AG 规则。） 一、背景

7. 获得的剪切体 SIRT6 V1 （剪切了 Exon7, 斜线部分） 获得的剪切体 SIRT6 V2 （剪切了 Exon2 上 95bp, 斜线部分） 一、背景

8. 细胞 细胞核 胞质和胞膜 SIRT6 V1 K cell SIRT6 V2 一、背景

9. 二、材料与方法 蓝塘猪（ 59 头）大白猪（ 72 头）

10. 引物名称引物序列扩增区域产物长度 (bp) 退火温度 ( ℃ ) P1 F:GGACATGAGGACAAGCTGCC R:AAAGGGACATGCTCCAAAAGG Exon2, Intron2 45461.0 P2 F:TCTGTCTCCCATTCTGTTTCTC R:CTCTGGAAGCATCAACTCACA Exon3, Intron3 Exon4 71055.3 P3 F:AGCACAGTTCCCTGCAAAAA R:CGTTACTACAGCAGAAGCAAGG Exon5, Intron5 Exon6 45763.0 P4 F:TGTGTTGGAGACCACCCTG R:GGGTCATGACCTCATCTACGT Exon7 36457.8 引物信息 二、材料与方法

11. 三、结果 SNPs 筛查引物的 PCR 扩增结果 PCR 产物经 1.5% 的琼脂糖凝胶 检测，均能获得与目标片段大小一 致的特异性条带，其大小分别为 454bp ， 710bp ， 457bp 和 364bp 。 PCR 产物条带清晰且无杂带，稳定 性和特异性好，表明产物可用于测 序分析。

12. 2463 A>G4004 C>T 4339 A>G 4367 G>A 猪 SIRT6 基因部分突变位点测序图 本研究共筛选了 SIRT6 基因约 1985bp 左右的序列，比对分析结果 表明在蓝塘猪中发现 8 个 SNP 位点，其中 5 个位于内含子区， 3 个位于 外显子区，分别是： 2463 A>G, 4004 C>T, 4339 A>C, 4367 G>A, 4411 C>T, 7367 C>T, 7469 C>T, 8282 G>T 。 三、结果

13. 所用引物突变位点突变碱基突变类型区域氨基酸变化 P12463A-G 转换 Intron2 P24004C-T 转换 Exon3Thr-94-Thr P24339A-C 颠换 Intron3 P24367G-A 转换 Intron3 P24411C-T 转换 Exon4Pro-129-Leu P37367C-T 转换 Exon5Thr-167-Thr P37469C-T 转换 Intron5 P48282G-A 转换 Intron7 猪 SIRT6 基因 SNP 筛查结果 三、结果

14. 四 讨论  外显子 4 的突变导致脯氨酸突变为亮氨酸，是 2 个品种共有的突变，该突 变是否会导致其功能上的变化有待于进一步的证实。  SIRT6 内含子的 5 个突变是否影响该基因的表达及活性的发挥还有待于进 一步的验证。  蓝塘猪 8 个位点均发生了突变，大白猪只在其中 3 个位点发生突变，表明 且地方品种的遗传多样性比较丰富。