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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定 技术方法。 一、目的
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行, 鉴定周期短,不受自然环境影响,适于对大量材 料的筛选。 另据初步研究,苗期菌丝接种鉴定表现抗菌 材料,在花期仍表现抗病。 在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴 定法。 二、内容说明
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 (一) 用品 油菜不同品种种子(包括抗病品种如中油 821 ,感病品种如 84039 的种子)、生长室、平底 塑料盘( 60×30×4cm )、园土、绿高一号液(北 京北农绿高科技发展有限公司出产)、马铃薯、 纱布、葡萄糖、琼脂胶、试管、三角瓶、解剖刀 、接种环等。 三、所需用品和操作方法
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 1 )土壤准备:取较肥沃的菜园土,清除石块,晒干 敲碎,然后装入塑料盘中(需装满)。 (二)、主要作法-- 1. 供试苗的种植
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 2 )油菜播种:保证出苗后能保留生长一致苗 30 株。 每 10 个品种设对照。 (二)、主要作法-- 1. 供试苗的种植
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 3 )土壤消毒:播种后用 2000—3000 倍的绿亨一号溶 液浇透土壤进行消毒。 (二)、主要作法-- 1. 供试苗的种植
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 4 )播后管理: 播后将塑料盘放于生长室内,在出苗期间,室内 温度控制在 20 ℃以下,在出真叶后,控制 20—24 ℃ 左右,每 2 天喷水一次。 (二)、主要作法-- 1. 供试苗的种植
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 生 长 室
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生长室外管理
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( 1 ) PDA 培养基的制作: 取马铃薯 200g ,洗净去皮切碎,加水 1000mL ,煮沸 30min ,用纱布过滤,将滤液加水补足到 1000mL ,加葡萄糖 10—20g 和琼脂胶 17—20g ,加 热溶化,用纱布过滤。然后依需要,分别装入试管 (用作贮藏菌种),或装入培养皿(用作培养菌丝 接种菌),然后在高压灭菌锅内进行灭菌。 (二)、主要作法-- 2. 菌丝的培养
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 2 )菌丝的培养: 取贮存平板菌核病的菌丝,在无菌条件下移下装 有 PDA 培养基的培养皿上,每皿一小块,放在培养 皿中间,在 22—25 ℃下培养 3—4 天,以菌丝长满, 而又没有结核为宜。 (二)、主要作法-- 2. 菌丝的培养
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 1 )接种: 待油菜苗 3—5 片真叶时,将菌丝平板以无菌解 剖刀切成 0.5×0.5cm 小块,将有菌丝的一面贴于叶片 上(注意不要贴在叶脉上),每株接种 1 片叶,每 叶接种 1 小块。 见下图 (二)、主要作法-- 3. 菌丝块的接种与管理
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定
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( 2 )管理:接种后在 23—26 ℃温度和 85%—95% 相对 湿度下培养 5—7 天后即可调查(注意接种后前 2 天 相对湿度应保持 95% 以上,以确保发病,后 3—5 天 保持 85% 左右,使接种菌不致于腐烂)。 (二)、主要作法-- 3. 菌丝块的接种与管理
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定
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在试验中当感病品种的发病率超过 40% 以上方为 有效鉴定。 一般将病害等级分为 5 个等级,即: 0 级:无病。 1 级:病斑面积占接种叶面积 10% 以下。 2 级:病斑面积占接种叶面积 10—30% 。 3 级:病斑面积占接种叶面积 30—50% 。 4 级:病斑面积占接种叶面积 50% 以上。 (二)、主要作法-- 4. 病害等级调查
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 1 )计算发病率 (二)、主要作法-- 5. 统计方法和抗性分级标准
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 2 )计算病情指数 式中: Gi 为病害级别; Ni 为调查株数; i 为 0 、 1 、 2…k,GK 为最高级别。 (二)、主要作法-- 5. 统计方法和抗性分级标准
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 3 )计算相对抗性指数( RRI ) 式中: m 为供试材料; CK 为对照。 RRI ,即 Relative resistant index (二)、主要作法-- 5. 统计方法和抗性分级标准
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 ( 4 )抗性分级标准: RRI ≤-1.2≤-0.7 <0≥0>0.9>2.0 抗性 分数 高抗中抗低抗低感中感高感 代号 HRMRLRLSMSHS (二)、主要作法-- 5. 统计方法和抗性分级标准
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实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 1 、供试苗的种植、菌丝的培养和接种后管理中应如 何掌握好温湿度条件? 2 、供试品种抗性属于哪个等级? 3 、你认为这种接种鉴定方法有何优缺点? 四、 作业
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