1. Received for publication, April 24, 2003 Published, JBC Papers in Press, April 28, 2003, DOI 10.1074/jbc.M304307200 Tommi J. Ahonen ‡ §¶, Jianwu Xie ‡ ¶, Matthew J. LeBaron ‡, Jianqiong Zhu ‡, Martti Nurmi, Kalle Alanen**, Hallgeir Rui ‡, and Marja T. Nevalainen ‡ ‡‡ Inhibition of Transcription Factor Stat5 Induces Cell DeathofHuman Prostate Cancer Cells* 班級 : 生科四甲 學生 : 梁育銘

2. 男性泌尿生殖系統構造圖

3. 症狀 症狀 早期的攝護腺癌是沒有症狀的。當攝護腺 癌侵犯到尿道時, 病患會 有頻尿、夜尿、尿 急、尿流細小、尿道疼痛和血尿等症狀, 和 良性 攝護腺肥大的症狀類似。當攝護腺癌 轉移到骨骼, 如腰椎骨時, 就 會造成腰背疼 痛以神經痛的症狀。 早期的攝護腺癌是沒有症狀的。當攝護腺 癌侵犯到尿道時, 病患會 有頻尿、夜尿、尿 急、尿流細小、尿道疼痛和血尿等症狀, 和 良性 攝護腺肥大的症狀類似。當攝護腺癌 轉移到骨骼, 如腰椎骨時, 就 會造成腰背疼 痛以神經痛的症狀。

4. Introduction攝護腺癌常見於 50 歲以上的男性。在美國僅次於肺癌 及大腸 癌，是男性常見的癌病，美國 的罹患率是每十萬 人口有七千人（或 者說每六個美國男性就有一人， 在一 生當中會罹患此病），以 1995 年為例， 在 所有該年新檢測出的癌症之中，攝 護腺癌就佔了 36% 。每年有 240,000 個新的病例被檢出，並造 成超過四萬人的死亡。 50 歲以上的男性。在美國僅次於肺癌 及大腸 癌，是男性常見的癌病，美國 的罹患率是每十萬 人口有七千人（或 者說每六個美國男性就有一人， 在一 生當中會罹患此病），以 1995 年為例， 在 所有該年新檢測出的癌症之中，攝 護腺癌就佔了 36% 。每年有 240,000 個新的病例被檢出，並造 成超過四萬人的死亡。

5. Abstract 從 40 個病患身上所取得的攝護腺腫 瘤組織切片, 在其樣本中我們發現 大約 26 個人 (65%), 它的 Stat5 有異 常活化的現象, 因此作者大膽假設 異常活化的 Stat5 和攝護腺腫瘤有 一定的關係, 所以它提出阻斷 Stat5 的功能可能是一種治療攝護腺腫瘤 的一個新方法 。 從 40 個病患身上所取得的攝護腺腫 瘤組織切片, 在其樣本中我們發現 大約 26 個人 (65%), 它的 Stat5 有異 常活化的現象, 因此作者大膽假設 異常活化的 Stat5 和攝護腺腫瘤有 一定的關係, 所以它提出阻斷 Stat5 的功能可能是一種治療攝護腺腫瘤 的一個新方法 。

6. STATs 蛋白質簡介 : STATs 蛋白質的發現, 最早是由於 干擾素的研究, 由於 INF 刺激細胞後, 會產生一群特定基因的表現, 而發 現這些基因的表現, 是需要 STATs 蛋白質的參與作用,STATs 蛋白質它擁有兩種生物功能 : 1. 將訊息由細胞表面傳到細胞核內 2. STATs 蛋白質也參與其基因表現調控

7. STATs Family: STATs Family 的成員有七個 : 包括 STAT1. STAT2….. 到 STAT6, 除了 STAT2.STAT6 較大, 大約是 850 個 amino acids, 其它大 約是 700-800 個 amino acids, 然後 STAT5 它有兩個同 源性的基因產物分別是 STAT5a- 94-kDa (Tyr-694) STAT5b- 92-kDa (Tyr-699) JAK2

8. STAT3 Signaling Pathway

9. 名詞介紹 Ad- adenovirus 為一個 DNA 腫瘤病毒, 可做為真核細胞基因表現之研究 DNStat5- dominant-negative Stat5 顯性 - 抑制型的 Stat5, 為 Stat5 的一個 mutant, 喪失其活化功能 AdDNStat5-Adenoviral gene delivery of a dominant-negative Stat5 STAT-Signal transducer and activator of transcription

10. Materials 1.CWR22Rv 2.LNCap 3.Pc-3 cells 從 40 個病人身上所取得的攝護腺腫瘤組識切片

11. Anti-phospho-TyrStat5Anti-pan-Stat5 Human prostate cancer cells

12. Normal human prostate epithelium Anti-phospho-TyrStat5

15. A dose-dependent effect on cell viability of adenoviral gene delivery of a dominant-negative Stat5 mutant (AdDNStat5)

16. Morphology of cell death induced by AdDNStat5 in CWR22Rv and LnCap cells ( 72h, 8 m.o.i) ( 96h, 32 m.o.i)

17. Dose-dependent expression of WTStat5 or DNStat5 in CWR22Rv and LnCap cells

18. DNA fragmentation analyzed by nucleosomal ELISA after exposure to AdDNStat5, AdWTStat5,AdlacZ, AdCtrl, or mock infection in CWR22Rv and LNCap 0.3 2.1 0.4 2.4 ( 48h, 8 m.o.i) ( 72h, 32m.o.i)

20. 用 Flow Cytometry 測量細胞 DNA 含量和細胞 的大小, 來檢測凋亡細胞

21. DNStat5-induced cell apoptosis involved caspase-3 activation ( 36h, 8 m.o.i) ( 48h, 32 m.o.i)

22. DNStat5- induced caspase-3 activation is associated with activation of caspase-9.

26. 結論 用原位偵測法去測定磷酸化和細胞核的 Stat5, 在大部份我 們檢測的攝護腺腫瘤細胞發現它的 Stat5 是活化的, 所以我 們提出如果抑制 Stat5 的活化可以是一種新的基因療法, 它 可以廣泛應用在治療攝護腺腫瘤細胞上, 我們觀察到 CWR22Rv 和 LNCap 這 兩個腫瘤細胞中, 阻斷 Stat5 的活化可以引發一連串的反應, 如 caspase-3caspase-9 和的活化最後誘導整過攝護腺腫瘤細胞 apoptosis, 來達到 治療腫瘤的效果.