1. د. عمر عبد القادر

2. التقطيع والتحميل للمجهر الإلكتروني مقدمة / أجهزة التقطيع تجهيز وتحميل القطاعات : حوض الماء / تشذيب العينة / معاملة القطاعات في الحوض المائي / تحميل القطاعات على الشبكات / صعوبات التقطيع طريقة نحت المتجمدات وعمل القوالب مقدمة / أجهزة التقطيع تجهيز وتحميل القطاعات : حوض الماء / تشذيب العينة / معاملة القطاعات في الحوض المائي / تحميل القطاعات على الشبكات / صعوبات التقطيع طريقة نحت المتجمدات وعمل القوالب د. عمر عبد القادر

3. التقطيعالتقطيع المقدمة -لابد من مراعاة وسائل السلامة للحفاظ على الشخص والأجهزة -اجهزة التقطيع للمجهر الكتروني عبارة عن تطوير لأجهزة التقطيع المجهر الضوئي. -تختلف أجهزة التقطيع للمجهر الإلكتروني عنها للمجهر الضوئي -الهدف من التقطيع هو الحصول على قطاعات رقيقة جدا وان سمك القطاع يلعب دورا أساسيا في عمليات التبيين (Resolving Power - فالقطاعات للمجهر الضوئي تقريبا (10 ميكرون ) بينما المجهر الإلكتروني تقريبا( 50 نانوميتر= 0.05 ميكرون) المقدمة -لابد من مراعاة وسائل السلامة للحفاظ على الشخص والأجهزة -اجهزة التقطيع للمجهر الكتروني عبارة عن تطوير لأجهزة التقطيع المجهر الضوئي. -تختلف أجهزة التقطيع للمجهر الإلكتروني عنها للمجهر الضوئي -الهدف من التقطيع هو الحصول على قطاعات رقيقة جدا وان سمك القطاع يلعب دورا أساسيا في عمليات التبيين (Resolving Power - فالقطاعات للمجهر الضوئي تقريبا (10 ميكرون ) بينما المجهر الإلكتروني تقريبا( 50 نانوميتر= 0.05 ميكرون) د. عمر عبد القادر

4. أجهزة التقطيع السكاكين :Knives: السكاكين :Knives: في البداية كانت تستخدم السكاكين الفولاذية Steel knives التي تستخدم للمجهر الضوئي ثم استبدلت بالسكاكين الزجاجية والماسية،والزجاجية هي الشائعة لسهولة الصناعة ورخص الثمن في البداية كانت تستخدم السكاكين الفولاذية Steel knives التي تستخدم للمجهر الضوئي ثم استبدلت بالسكاكين الزجاجية والماسية،والزجاجية هي الشائعة لسهولة الصناعة ورخص الثمن الموصفات الخاصة بالسكاكين المجهر الإلكتروني : الموصفات الخاصة بالسكاكين المجهر الإلكتروني : 1 - يجب ان يكون نصف قطر حافتها المستعمل للقطع أصغر من سمك أرق قطاع مطلوب 2 - ان تكون صلبة بدرجة كافية لقطع العينات الصلبة 3 - أن تكون مصنعة من مادة نقية بحيث تكون حافة القطع متجانسة في جميع اجزائها. 4 - أن تكون مقاومتها للتأكل الكيميائي عالية. د. عمر عبد القادر

5. السكاكين الزجاجية Glass Knives -ادخل استعمال السكاكين الزجاجية العالمان لاتا وهرتمان ( Latta and hartmann) عام 1950م لكن الصالح منها للإستعمال كانت قليلة. -ثم قام العالم فانرنباك ( Farenbach ) بتطوير جهاز لقطع السكاكين الزجاجية يسوق عن طريق الشركة السويدية ( LKB ) -كما يمكن عمل السكاكين الزجاجية يدويا لكن ليس بدقة جهاز القطع. -طريقة عمل السكاكين الزجاجية -يقطع قضيب الزجاج الى مربعات صغيرة - ثم كل مربع يقطع قطريا إلى مثلثين كل مثلث عبارة عن سكين ذات حافة واحدة فقط تصلح للتقطيع -حافة القطع يجب ان تكون مستقيمة ومتساوية وسطحا المقابل للعينة ناعما -جزا من حافة القطع يكون صالحا للتقطيع بينما الباقي يكون مشرشرا. -الجزء الصالح غالبا يكون على يسار السكين عند وضعها في ماسك جهاز القطع. -يحبذ وضع السكين في جهاز التقطيع بشكل مائل بزاوية( 5د) لمحاولة تجنب لمس العينة لحافة السكين الخلفية. د. عمر عبد القادر

7. مقاومة حافة القطع تعتمد على : - نوع الزجاج المستخدم - صلابة العينات التى تقطع - حجم العينة المراد تقطيعها وسمك القطاعات. للإطالة عمر السكين : يفضل استخدام الجزء الأوسط من السكين لتشذيب العينة( Trimming ) أو تعليم العينة عند بدء القطع ثم يستخدم الجزء الأيسر لعمل القطاعات الرقيقة. يجب عمل السكاكين قبل التقطيع مباشرة وحفظها في صندوق نظيف مغلق عن الغبار د. عمر عبد القادر

8. السكاكين الماسية Diamond Knives السكاكين الماسية مرتفعة التكاليف ( 10-20 ألف ريال ). تمتاز بعدم تأثر الحافة وتستخدم لفترة طويلة / وبذلك توفر الوقت لتحضير وتبديل السكاكين الزجاجية / حادة جدا وتستخدم لقطع العينات الصلبة كالأسنان أو العظام. يجب الحذر بعدم ارتطام او وقوع حافة السكين. يجب ان تكون الحافة دائما نظيفة مع إزالة البقايا العالقة عنها ويمكن تنظيفها بحافة عود أسنان معامل بمحلول قلوي ضعيف. - غالبا يتم عمل القطاعات الأولى بواسطة سكين زجاجية ثم لعمل القطاعات الرقيقة تستخدم السكين الماسية. - يمكن ان يتم سنها ( شحذها ) على أن تكون حافتها غيرعميقه الخدوش. د. عمر عبد القادر

9. رؤية القطاعات وسمكها : رؤية القطاعات وسمكها : عادة يكون مثبت على جهاز تقطيع العينات مجهر ضوئي قوة تكبيرة 10×50). ومصدر ضوئي فلورسنتي مثبت خلف السكين لرؤية القطاعات وتحديد سمكها وكذلك لنقل القطاعات على الشبكات النحاسية. عادة يكون مثبت على جهاز تقطيع العينات مجهر ضوئي قوة تكبيرة 10×50). ومصدر ضوئي فلورسنتي مثبت خلف السكين لرؤية القطاعات وتحديد سمكها وكذلك لنقل القطاعات على الشبكات النحاسية. تعطي سمك القطاعات التي تستخدم للمجهر الإلكتروني ألوان ارقها يكون رمادي ( 0.01 ميك ) ثم فضي ( 0.060 ميك ) وذهبي ( 0.090 ميك ) تعطي سمك القطاعات التي تستخدم للمجهر الإلكتروني ألوان ارقها يكون رمادي ( 0.01 ميك ) ثم فضي ( 0.060 ميك ) وذهبي ( 0.090 ميك ) مع العلم ان درجة لألوان تغير قليلا بدرجة الزاوية التى ترى منها القطاعات. مع العلم ان درجة لألوان تغير قليلا بدرجة الزاوية التى ترى منها القطاعات. حوض الماء للسكين : Trough حوض الماء للسكين : Trough يمكن الحصول على قطاعات سميكة (0.5 ميك ) على حوض جاف يمكن الحصول على قطاعات سميكة (0.5 ميك ) على حوض جاف لكن القطاعات الرقيقة تتطلب ان تطفو على سطح مائي. لكن القطاعات الرقيقة تتطلب ان تطفو على سطح مائي. عادة يعمل الحوض المائي للسكاكين الزجاجية عادة يعمل الحوض المائي للسكاكين الزجاجية يمكن عمل الحوض من شريط لاصق معدني لا يتأثر بالماء ثم تغلق الفراغات بالشمع. أو يمكن استخدام الأحواض البلاستيكية جاهزة الصنع. يمكن عمل الحوض من شريط لاصق معدني لا يتأثر بالماء ثم تغلق الفراغات بالشمع. أو يمكن استخدام الأحواض البلاستيكية جاهزة الصنع. يفضل إضافة محلول اسيتون او كحول (20 %) لتقليل الشد السطحي للماء في الحوض. يفضل إضافة محلول اسيتون او كحول (20 %) لتقليل الشد السطحي للماء في الحوض. يجب أن يملئ الحوض بالماء الى حافة السكين لتقليل فقدان القطاعات عند الحافة. يجب أن يملئ الحوض بالماء الى حافة السكين لتقليل فقدان القطاعات عند الحافة. عندما يكون مستوى سطح الماء اعلى من حافة القطع فإن العينة سوف تلقط معها الماء. عندما يكون مستوى سطح الماء اعلى من حافة القطع فإن العينة سوف تلقط معها الماء. وإذا كان مستوى الماء في الحوض اقل من الحافة فإن القطاعات لا تطفو على سطح الماء وإذا كان مستوى الماء في الحوض اقل من الحافة فإن القطاعات لا تطفو على سطح الماء تجهيز وتحميل القطاعات د. عمر عبد القادر

11. * معاملة القطاعات في الحوض المائي : عند عمل القطاعات تلتف بعض القطاعات ولفردها يمكن وضعها في حمام مائي دافئ عند عمل القطاعات تلتف بعض القطاعات ولفردها يمكن وضعها في حمام مائي دافئ او إضافة قطرة من الأسيتون للحوض المائي او إضافة قطرة من الأسيتون للحوض المائي أو وضع طرف ورقة ترشيح مغموسة في الكلوروفورم فوق حوض المائي الذي فيه القطاعات تعمل على تمددها أو وضع طرف ورقة ترشيح مغموسة في الكلوروفورم فوق حوض المائي الذي فيه القطاعات تعمل على تمددها تحميل القطاعات على الشبكات النحاسية : تحميل القطاعات على الشبكات النحاسية : لتحميل القطاعات العائمة في الحوض المائي للسكين لتحميل القطاعات العائمة في الحوض المائي للسكين تقرب القطاعات من بعضها بمساعدة فرشاة مكونة من شعرة واحدة تؤخذ عادة من رمش العين وتثبت بعود اسنان رقيق. تقرب القطاعات من بعضها بمساعدة فرشاة مكونة من شعرة واحدة تؤخذ عادة من رمش العين وتثبت بعود اسنان رقيق. بعدها يمكن إلتقاط القطاعات من حوض الماء كالأتي : بعدها يمكن إلتقاط القطاعات من حوض الماء كالأتي : غمر الشبكة تحت القطاعات في الماء ثم رفعها. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح غمر الشبكة تحت القطاعات في الماء ثم رفعها. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح أو بوضع الشبكة فوق القطاعات ثم قلبها أو بوضع الشبكة فوق القطاعات ثم قلبها ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح للتجفيف موضوعة في طبق بتري. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح للتجفيف موضوعة في طبق بتري. * معاملة القطاعات في الحوض المائي : عند عمل القطاعات تلتف بعض القطاعات ولفردها يمكن وضعها في حمام مائي دافئ عند عمل القطاعات تلتف بعض القطاعات ولفردها يمكن وضعها في حمام مائي دافئ او إضافة قطرة من الأسيتون للحوض المائي او إضافة قطرة من الأسيتون للحوض المائي أو وضع طرف ورقة ترشيح مغموسة في الكلوروفورم فوق حوض المائي الذي فيه القطاعات تعمل على تمددها أو وضع طرف ورقة ترشيح مغموسة في الكلوروفورم فوق حوض المائي الذي فيه القطاعات تعمل على تمددها تحميل القطاعات على الشبكات النحاسية : تحميل القطاعات على الشبكات النحاسية : لتحميل القطاعات العائمة في الحوض المائي للسكين لتحميل القطاعات العائمة في الحوض المائي للسكين تقرب القطاعات من بعضها بمساعدة فرشاة مكونة من شعرة واحدة تؤخذ عادة من رمش العين وتثبت بعود اسنان رقيق. تقرب القطاعات من بعضها بمساعدة فرشاة مكونة من شعرة واحدة تؤخذ عادة من رمش العين وتثبت بعود اسنان رقيق. بعدها يمكن إلتقاط القطاعات من حوض الماء كالأتي : بعدها يمكن إلتقاط القطاعات من حوض الماء كالأتي : غمر الشبكة تحت القطاعات في الماء ثم رفعها. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح غمر الشبكة تحت القطاعات في الماء ثم رفعها. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح أو بوضع الشبكة فوق القطاعات ثم قلبها أو بوضع الشبكة فوق القطاعات ثم قلبها ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح للتجفيف موضوعة في طبق بتري. ثم وضع الشبكات على ورقة ترشيح للتجفيف موضوعة في طبق بتري. تشذيب العينة : Trimming the block تشذيب العينة : Trimming the block يزود جهاز التقطيع بماسك للعينة يزود جهاز التقطيع بماسك للعينة ( Chuck ) تثبت به يتم تشذيب مادة الطمر من حول العينة وترك اقل كمية ممكنة حولها لإبراز العينة للتقطيع. يتم تشذيب مادة الطمر من حول العينة وترك اقل كمية ممكنة حولها لإبراز العينة للتقطيع. حاليا يمكن استخدام جهاز التشذيب للعينات (LKB Trimmer للتشذيب الأولي حاليا يمكن استخدام جهاز التشذيب للعينات (LKB Trimmer للتشذيب الأولي أما التشذيب النهائي فيتم باليد وبشفرات جديدة حادة تحت المجهر لجهاز التقطيع. أما التشذيب النهائي فيتم باليد وبشفرات جديدة حادة تحت المجهر لجهاز التقطيع. تشذيب العينة : Trimming the block تشذيب العينة : Trimming the block يزود جهاز التقطيع بماسك للعينة يزود جهاز التقطيع بماسك للعينة ( Chuck ) تثبت به يتم تشذيب مادة الطمر من حول العينة وترك اقل كمية ممكنة حولها لإبراز العينة للتقطيع. يتم تشذيب مادة الطمر من حول العينة وترك اقل كمية ممكنة حولها لإبراز العينة للتقطيع. حاليا يمكن استخدام جهاز التشذيب للعينات (LKB Trimmer للتشذيب الأولي حاليا يمكن استخدام جهاز التشذيب للعينات (LKB Trimmer للتشذيب الأولي أما التشذيب النهائي فيتم باليد وبشفرات جديدة حادة تحت المجهر لجهاز التقطيع. أما التشذيب النهائي فيتم باليد وبشفرات جديدة حادة تحت المجهر لجهاز التقطيع.

12. جهاز تشذيب العيناتTrimmers د. عمر عبد القادر

14. جهاز تقطيع العينات الدقيق: Ultramicrotome د. عمر عبد القادر

15. صعوبات التقطيع صعوبات التقطيع :Difficulties in sectioning 1 - صعوبة الحصول على قطاعات رقيقة : أ - العينة ربما كبيرة الحجم أو تحتوي على نسيج صلب جدا ب - السكين رديئة أو تحتاج الى توجيه مكاني ج - خلل في جهاز القطع وإحكام ربط ماسك العينة وماسك السكين 2 - اختلاف في سمك القطاعات : أ - غالبا خلل في جهاز القطع أو ارتفاع في درجة حرارة للجهاز أو أي اهتزاز. ب - يجب تفادي اشعة اللهب أو الشمس. ج - السكين غير حادة. 3 - حدوث بعض الخدوش على القطاعات عند الزاوية اليمنى لحافة السكين أ - حافة القطع في السكين غير جيدة ب - أو الزاوية بجهاز القطع للسكاكين غير سليمة تماما صعوبات التقطيع صعوبات التقطيع :Difficulties in sectioning 1 - صعوبة الحصول على قطاعات رقيقة : أ - العينة ربما كبيرة الحجم أو تحتوي على نسيج صلب جدا ب - السكين رديئة أو تحتاج الى توجيه مكاني ج - خلل في جهاز القطع وإحكام ربط ماسك العينة وماسك السكين 2 - اختلاف في سمك القطاعات : أ - غالبا خلل في جهاز القطع أو ارتفاع في درجة حرارة للجهاز أو أي اهتزاز. ب - يجب تفادي اشعة اللهب أو الشمس. ج - السكين غير حادة. 3 - حدوث بعض الخدوش على القطاعات عند الزاوية اليمنى لحافة السكين أ - حافة القطع في السكين غير جيدة ب - أو الزاوية بجهاز القطع للسكاكين غير سليمة تماما د. عمر عبد القادر

16. طريقة نحت المتجمداتFreeze Etching طريقة نحت المتجمداتFreeze Etching –أول من استعملها العالم ستير ( Steer ) عام 1957م ثم طورها كل من مور وزملائه عام 1961 م و بوليف وآميز (Bullivant &Ames ) 1966م و بوليف ( Bullivant)1970م واستولنسكي وبريزفاش ( Stolinskki ) 1975م ثم سلير وروبارد و ( Sleylr &Robards ) 1978م.ثم طورها كل من مور وزملائه عام 1961 م و بوليف وآميز (Bullivant &Ames ) 1966م و بوليف ( Bullivant)1970م واستولنسكي وبريزفاش ( Stolinskki ) 1975م ثم سلير وروبارد و ( Sleylr &Robards ) 1978م. تهدف هذه الطريقة الى تحضير قوالب من الأسطح المتجمدة للعينات الطرية (اللينة).تهدف هذه الطريقة الى تحضير قوالب من الأسطح المتجمدة للعينات الطرية (اللينة). عملية نحت المتجمدات طريقة طبيعية لتحضير لعينات يتجنب فيها استخدام المواد الكيميائية لما تحدثه من تغيرات للخلايا العينة اثناء التثبيت والتجفيف والتقطيععملية نحت المتجمدات طريقة طبيعية لتحضير لعينات يتجنب فيها استخدام المواد الكيميائية لما تحدثه من تغيرات للخلايا العينة اثناء التثبيت والتجفيف والتقطيع حيث يتم تجميد النسيج في سائل النيتروجين (-198م5 )حيث يتم تجميد النسيج في سائل النيتروجين (-198م5 ) ثم يتم تقطيع العينة بسكين باردة مما ينتج عنه فصل الخلايا (أنظر الشكل 10-8 )ثم يتم تقطيع العينة بسكين باردة مما ينتج عنه فصل الخلايا (أنظر الشكل 10-8 ) أثناء التقطيع تحفظ القطاعات في مكان مفرغ من الهواء وهذا يسمى بالنحت Etchingأثناء التقطيع تحفظ القطاعات في مكان مفرغ من الهواء وهذا يسمى بالنحت Etching أسطح القطاعات الناتجة سميكة وغير متناسقة لذلك يعمل لها قوالب Replica )أسطح القطاعات الناتجة سميكة وغير متناسقة لذلك يعمل لها قوالب Replica ) طريقة نحت المتجمداتFreeze Etching طريقة نحت المتجمداتFreeze Etching –أول من استعملها العالم ستير ( Steer ) عام 1957م ثم طورها كل من مور وزملائه عام 1961 م و بوليف وآميز (Bullivant &Ames ) 1966م و بوليف ( Bullivant)1970م واستولنسكي وبريزفاش ( Stolinskki ) 1975م ثم سلير وروبارد و ( Sleylr &Robards ) 1978م.ثم طورها كل من مور وزملائه عام 1961 م و بوليف وآميز (Bullivant &Ames ) 1966م و بوليف ( Bullivant)1970م واستولنسكي وبريزفاش ( Stolinskki ) 1975م ثم سلير وروبارد و ( Sleylr &Robards ) 1978م. تهدف هذه الطريقة الى تحضير قوالب من الأسطح المتجمدة للعينات الطرية (اللينة).تهدف هذه الطريقة الى تحضير قوالب من الأسطح المتجمدة للعينات الطرية (اللينة). عملية نحت المتجمدات طريقة طبيعية لتحضير لعينات يتجنب فيها استخدام المواد الكيميائية لما تحدثه من تغيرات للخلايا العينة اثناء التثبيت والتجفيف والتقطيععملية نحت المتجمدات طريقة طبيعية لتحضير لعينات يتجنب فيها استخدام المواد الكيميائية لما تحدثه من تغيرات للخلايا العينة اثناء التثبيت والتجفيف والتقطيع حيث يتم تجميد النسيج في سائل النيتروجين (-198م5 )حيث يتم تجميد النسيج في سائل النيتروجين (-198م5 ) ثم يتم تقطيع العينة بسكين باردة مما ينتج عنه فصل الخلايا (أنظر الشكل 10-8 )ثم يتم تقطيع العينة بسكين باردة مما ينتج عنه فصل الخلايا (أنظر الشكل 10-8 ) أثناء التقطيع تحفظ القطاعات في مكان مفرغ من الهواء وهذا يسمى بالنحت Etchingأثناء التقطيع تحفظ القطاعات في مكان مفرغ من الهواء وهذا يسمى بالنحت Etching أسطح القطاعات الناتجة سميكة وغير متناسقة لذلك يعمل لها قوالب Replica )أسطح القطاعات الناتجة سميكة وغير متناسقة لذلك يعمل لها قوالب Replica ) د. عمر عبد القادر

17. تابع طريقة نحت المتجمدات Freeze Etching تابع طريقة نحت المتجمدات Freeze Etching يتم عمل القوالب بتبخير طبقة رقيقة جدا لخليط من البلاتين والكربون ،يتم عمل القوالب بتبخير طبقة رقيقة جدا لخليط من البلاتين والكربون ، ثم يترك النسيج يسخن في ماء مقطر ومن ثم يطفوا القالب على سطح الماءثم يترك النسيج يسخن في ماء مقطر ومن ثم يطفوا القالب على سطح الماء يمكن التخلص من بقايا المواد المتبقية على القالب بواسطة انزيم التربسين يليه حمض الكبريتيك او قلوي قوي.يمكن التخلص من بقايا المواد المتبقية على القالب بواسطة انزيم التربسين يليه حمض الكبريتيك او قلوي قوي. يلقط القالب على شبكة نحاسية وبهذا يكون جاهز للفحص على المجهر الإلكترونييلقط القالب على شبكة نحاسية وبهذا يكون جاهز للفحص على المجهر الإلكتروني غير شائعة الإستعمال لصعوبة تحضير العينة لكنها أصبحت تستخدم على نطاق واسع.غير شائعة الإستعمال لصعوبة تحضير العينة لكنها أصبحت تستخدم على نطاق واسع. تابع طريقة نحت المتجمدات Freeze Etching تابع طريقة نحت المتجمدات Freeze Etching يتم عمل القوالب بتبخير طبقة رقيقة جدا لخليط من البلاتين والكربون ،يتم عمل القوالب بتبخير طبقة رقيقة جدا لخليط من البلاتين والكربون ، ثم يترك النسيج يسخن في ماء مقطر ومن ثم يطفوا القالب على سطح الماءثم يترك النسيج يسخن في ماء مقطر ومن ثم يطفوا القالب على سطح الماء يمكن التخلص من بقايا المواد المتبقية على القالب بواسطة انزيم التربسين يليه حمض الكبريتيك او قلوي قوي.يمكن التخلص من بقايا المواد المتبقية على القالب بواسطة انزيم التربسين يليه حمض الكبريتيك او قلوي قوي. يلقط القالب على شبكة نحاسية وبهذا يكون جاهز للفحص على المجهر الإلكترونييلقط القالب على شبكة نحاسية وبهذا يكون جاهز للفحص على المجهر الإلكتروني غير شائعة الإستعمال لصعوبة تحضير العينة لكنها أصبحت تستخدم على نطاق واسع.غير شائعة الإستعمال لصعوبة تحضير العينة لكنها أصبحت تستخدم على نطاق واسع. د. عمر عبد القادر

19. ميزات طريقة نحت المتجمدات تتيح هذه التقنية دراسة التفاصيل للسطوح التي لا يمكن الحصول عليها بطرق التحضير الأخرى. فهي تعمل على فصل للوحدات المكونة للأنسجة دراسة سطوح العضيات السيتوبلازمية من نواة وميتوكوندريا وغيرها، بشكل ثلاثي الأبعاد فهي مزيج بين القطاعات الرقيقة والقوالب يمكن الحصول على قوة تبين أو تحليل ( Resolution ) جيدة بإستعمال قالب من الكربون والبلاتين وجد أن قوة التحليل تصل إلى 2-3 نانوميتر. أن التحضير بإستخدام طريقة نحت المتجمدات قد اثبت ما سبق الحصول علية بإستخدام طرق التثبيت وغيرها فالصور التي شوهدت بهذه الطريقة أكدت ما تم مشاهدته بالمجهر الإلكتروني لقطاعات رقيقة. التقطيع للمجهر الضوئى يحتاج التحضير لقطاعات المجهر الإلكتروني اخذ قطاعات سميكة 0.5-2 ميكرون بواسطة جهاز التقطيع الدقيق (Ultramicrotome ) وتنقل على شريحة زجاجية ، ثم صبغها بأزرق التلودين بعدها توضع نقاط من مادة الطمر المستعملة للمجهر الإلكتروني ثم تغطيتها. حيث يتم فحصها وتصويرها بالمجهر الضوئي وذلك لمتابعة ومعرفة موقع العينة فيما بعد بالقطاعات الرقيقة. تتيح هذه التقنية دراسة التفاصيل للسطوح التي لا يمكن الحصول عليها بطرق التحضير الأخرى. فهي تعمل على فصل للوحدات المكونة للأنسجة دراسة سطوح العضيات السيتوبلازمية من نواة وميتوكوندريا وغيرها، بشكل ثلاثي الأبعاد فهي مزيج بين القطاعات الرقيقة والقوالب يمكن الحصول على قوة تبين أو تحليل ( Resolution ) جيدة بإستعمال قالب من الكربون والبلاتين وجد أن قوة التحليل تصل إلى 2-3 نانوميتر. أن التحضير بإستخدام طريقة نحت المتجمدات قد اثبت ما سبق الحصول علية بإستخدام طرق التثبيت وغيرها فالصور التي شوهدت بهذه الطريقة أكدت ما تم مشاهدته بالمجهر الإلكتروني لقطاعات رقيقة. التقطيع للمجهر الضوئى يحتاج التحضير لقطاعات المجهر الإلكتروني اخذ قطاعات سميكة 0.5-2 ميكرون بواسطة جهاز التقطيع الدقيق (Ultramicrotome ) وتنقل على شريحة زجاجية ، ثم صبغها بأزرق التلودين بعدها توضع نقاط من مادة الطمر المستعملة للمجهر الإلكتروني ثم تغطيتها. حيث يتم فحصها وتصويرها بالمجهر الضوئي وذلك لمتابعة ومعرفة موقع العينة فيما بعد بالقطاعات الرقيقة. د. عمر عبد القادر

20. د. عمر عبد القادر