1. تقنية المجهر الإلكتروني Electron Microscopy technique
د. عمر عبد القادر

2. قبل أن نتطرق إلى ذكر هذه الطرق يجب التأكيد على بعض النقاط فيما يخص المجهر الإلكتروني
العينة المراد رؤيتها ستفحص تحت تفريغ عالى High vacuum لذا يجب أن لا تحتوى العينة على أية نسبة من الماء حتى لا تعوق مرور تيار الألكترونات .
تعتمد فكرة الرؤية على المنظر المتكون على اللوحة الفوتوغرافية التي يمكن تحميضها .
د. عمر عبد القادر

3. مبدأ هذه الفكرة وتخيلها
1924
لأول مرة بدأ التفكير باستخدام الالكترونات بدل مصدر الضوء لفحص التراكيب الخلوية ومشاهدة الأجسام.
مبدأ هذه الفكرة وتخيلها
عندما نتخيل الضوء الذي نراه من خلال أي لمبه نيون أنه عبارة عن قطبين موجب وسالب صادر عن أشعة كهربائية هي الضوء ذاته فمثلاً اللمبة ذات الضوء الأبيض النيون عبارة عن
( + & - ) يوصل بينهما غاز النيون ليعطي اللون الأبيض بينما اللمبة ذات الضوء الأحمر شبيه بتوصيل سلكين ( + / - ) مع بعضهما فينتج شرارة فتعطي الضوء لكنه غير معالج ومستفاد منه لذلك في هذا الالتماس أستخدم سلك معدني خاص جداً يتحمل الحرارة العالية ومقدار من الفولتات ويلتهب عند مرور الكهرباء فيه ليعطي الحرارة ثم الضوء خاصة في محيط مفرغ
وهذا ما جعل العالم (لويس دي برولي) يفكر بالالكترونات ليرى الأجسام الدقيقة
د. عمر عبد القادر

4. وكان في أول السبعينات بداية استخدام المجهر الالكتروني الماسح .
- بدأ تطور هذا الجهاز يتقدم بسرعة وطرق تحضير العينات له فكشفت لنا الكثير من خبايا التراكيب الحيوية ونتج عنه تغيرات كبيرة في تاريخ العلوم الحيوية.
فاكتشاف ودراسة البكتريا والأوليات والفيروسات ومعرفة الخلية كوحدة بنائية أساسية للنبات والحيوان ومعرفة الكروموسومات ودورها في نقل الصفات الوراثية كان بفضل الله ثم باكتشاف وتطوير هذه المجاهر وبالأخص الالكترونية وبواسطته E.M. أكتشف كثير من التراكيب السيتوبلازمية الخلوية الصغيرة و الدقيقة أكثر من أي وقت مضى.
كانت فترة الاهتمام في تطوير طرق التحضيرات للمجهر النفاذ واستمر العمل والتطوير حتى نهاية الستينات على المجهر الالكتروني النفاذ.
وكان في أول السبعينات بداية استخدام المجهر الالكتروني الماسح .
د. عمر عبد القادر

5. 1980 1986 كان تطور المجهر الالكتروني الماسح
أفضل مجهر الكتروني ماسح (SEM) أستخدم مثل (35JSM)
د. عمر عبد القادر

6. تصنيف المجاهر و أنواعها
L.M
ضوئية
E.M
إلكترونية
د. عمر عبد القادر

7. 1-Transmission Electron Microscopy Compound L.M (TEM)
Simple L.M
(TEM)
Single lenses
1- Inverted L.M
2- Scanning Electron
Microscopy
(SEM)
2- Dark field L.M
3- Phase Contrast
Microscope
3- Energy Dispersive
X-ray Spectroscope.
4- U.V.M.
5- Immune fluorescent
I.F.L.M.
4- Field Emission Scanning
Electron Microscopy
(F E.SEM)
6- Descanting L.M
attaching
5- Electron Probe Micro-
Analyzer.
7- Camera L.M
(EPMA)= (SEM&EDS)
8- Coalesce L.M
د. عمر عبد القادر

8. مقارنة وتصنيف
مما يساعد على معرفة أهمية المجهر الالكتروني عمل مقارنة بينه
وبين المجهر الضوئي من الناحية الفيزيائية ومن ناحية التركيب
والأجزاء المشتركة.
ومقارنة أخرى للتصنيف وأنواع كل من هذه المجاهر المستخدمة
وفيما تستخدم.
د. عمر عبد القادر

9. أولاً:مقارنة بين قوة التمييز والتكبير بين المجهرين
قوة التكبير عند المجهر الضوئي تتراوح بين:
1500x للمجهر الضوئي عالي الجودة , 25x للمجهر البسيط أو المجهر التشريحي
وهي Magnification power (M.P.)
وتساوي حاصل ضرب العينية × الشيئية
لذلك مهما بلغت قوة التكبير عند الضوئي فلن تصل إلى أن تعطي تفاصيل واضحة داخل
الخلية ومكوناتها خاصة مع الكائنات الدقيقة الحية مثل البكتريا و غيرها
وتعتمد قوة التكبير على قوة التمييز و التبيين
وذلك بسبب ما يعرف بقوة التبيين أو قوة التمييز Resolution power (R.P.)
د. عمر عبد القادر

10. الضوئي وتساوي تقريباً ألف ضعف
أما عن قوة التكبير عند المجهر الالكتروني النفاذ وصلت في ذلك الحين إلى 600,000 مرة
فيمكنه أن يظهر أجساماً تصل من الصفر إلى أقل من جزء من مائتي جزء مما تظهره أحسن
المجاهر الضوئية وذلك بفضل ما يعرف بقوة التمييز وهي أضعاف عن قوة التمييز في المجهر
الضوئي وتساوي تقريباً ألف ضعف
إذن: ما هو السر في قوة التمييز أو قدرة التبيين –الإظهار- ؟
قوة التمييز أو قوة التبيين (Resolution power) أو (Resolving power):
هي أصغر مسافة بين أصغر جسمين متقاربين يمكن أن نراهما بوضوح تام مفصولين تماماً
عن بعضهما من غير أي تداخل
د. عمر عبد القادر

11. كيف حصل ذلك للمجهر الالكتروني....؟
لقد حقق اكتشاف المجهر الالكتروني زيادة كبيرة في قوة الوضوح حيث تغلبت المجاهر الالكترونية على الضوئية في قوة الإظهار والتبيين والتمييز إضافة إلى التكبير العالي الذي يعتمد علي (R.P.) عند تمرير الشعاع الالكتروني خلال الجسم المراد فحصه ( العينة ) لنراها على لوحة تصوير ضوئي حساسة ومن ثم نقلها إلى أفلام أو إلى كمبيوتر متصل بالمجهر الالكتروني
د. عمر عبد القادر

12. مقارنة في المقاييس المستخدمة
1m = 1000mm
1mm = 1000µm ,1mm = 100µm
1nm = 10-3 µm µm = 1000nm ,1µm = 100 nm
1nm = 1000p
د. عمر عبد القادر

13. ثانياً:مقارنة فيزيائية بين المجهرين من ناحية التبيين
قوة التكبير تعتمد اعتمادا كلياً على قوة التمييز و التبيين
لذلك قوة التكبير في المجاهر الضوئية تعتمد على العدسات الشيئية(عدسات زجاجية ملموسة)
- بينما قوة التكبير في المجاهر الالكترونية تعتمد على عدسات الكترونية ( غير ملموسة )
غير موجودة في الواقع وإنما تحصل في مكان تصميمها عندما يمر التيار الكهربائي
د. عمر عبد القادر

14. قوة التبيين لا يحددها نوع العدسة (في الضوئي أو الالكتروني)
وإنما يحددها (الطول الموجي wave length)=(  لندا )
المجهر الضـوئي: الطول الموجي لشعاع الضوء و الذي يساوي ( 500 ) نانومتر تقريباً
(0,5 µm) للضوء العادي أو الأزرق
مثال: قوة التبيين عند الضوئي (0,2 µm)
مثال: عند استخدام الأشعة فوق البنفسجية في بعض المجاهر U.V.M. فيكون الطول الموجي
W.L.=0,3µm و يكون R.P.=0,1µm
نلاحظ من المثالين أنه كلما قل الطول الموجي وقصر كلما كانت قوة التبيين والوضوح أكثر 
R.P
العلاقة عكسية:كلما صغرت الطول الموجي كلما زادت قو التوضيح و التبيين للمجهر
المجهر الالكتروني: الطول الموجي للشعاع الالكتروني و الذي يقاس بالنانومتر وهو قصير جداً
مقارنة بالنانومتر للمجهر الضوئي
د. عمر عبد القادر

15. السؤال الآن:
كم الطول الموجي للشعاع الالكتروني لنعرف قوة التمييز والتبيين الذي يعتمد عليها دقة الصورة للجسم المطلوب رؤيته ؟
هذا يعتمد على كم الفولتات الكهربائية المستخدمة لإطلاق شعاع الكتروني ذو أقصر موجة
ويقاس الطول الموجي للشعاع الالكتروني للمجهر الالكتروني بالمعادلة التالية:
حيث  الطول الموجي ( لندا )
V الفولتية الداخلة للمجهر
105 V =
د. عمر عبد القادر

16. فعند استخدام 60,000 فولت (60K.v.) لإطلاق الكتروني طول موجته...........؟
1,5 V =
نحسب:
نحصل على قوة تمييز تساوي (0,5nm) أو (0,05µm)
وعند مقارنة هذه القيمة مع قيمة التبيين مع المجهر الضوئي نرى الفرق الشاسع بين القيمتين
د. عمر عبد القادر

17. عن بعضهما البعض بمسافة يقل قطرها عن نصف الطول الموجي للضوء.
من المعروف أنه باستخدام المجهر العادي فإنه لا يمكن التمييز بين نقطتين تبعدان
عن بعضهما البعض بمسافة يقل قطرها عن نصف الطول الموجي للضوء.
هذا يعني أن المجهر الضوئي لا يميز لنا أي جسمين البعد بين قطريهما يصل إلى
أقل من (250nm)
بعبارة أخرى:
إن أصغر بعد بين نقطتين يمكن تمييزهما باستخدام هذا الضوء هو (250nm)
أي أن العدسة الشيئية للمجهر العادي ليس القدرة على إظهار الأشياء التي تقل
المسافة بين جزيئاتها عن 250 نانومتر
د. عمر عبد القادر

18. لذلك عرف أن العامل المحدد لقوة التكبير في المجهر الضوئي هو
الطول الموجي للضوء ذاته
لذلك الطول الموجي وقوة التبيين للمجهر الضوئي لها حد معين
ذا قيمة محددة مرتبطة بالطول الموجي للضوء وهو ثابت
د. عمر عبد القادر

19. هذه السلبية تغلب عليها المجهر الالكتروني باستغلاله للطول الموجي للشعاع
الالكتروني ذات السرعة العالية كمصدر للإضاءة بدلاً من الضوء المرئي
حيث أن الالكترونات ذات الطول الموجي متغير يعتمد على قوة الفولتات
المستخدمة في إرسال الالكترونات خلال العدسات الالكترونية ،لذلك عادة ما
يستخدم تيار يتراوح بين فولت
أي (60K.V) إلى (180K.V) وهناك بعض المجاهر تستخدم تيار شدته
مليون فولت (1000K.V)
د. عمر عبد القادر

20. ووصلت قوة التكبير ما بين (600,000X) وحتى وصلت إلى (1,600,000X)
والقوة التمييزية لهذه المجاهر الالكترونية تصل ما بين 0,2-0,1nm
أي حوالي ألف ضعف لقدرة التمييز لأقوى المجاهر الضوئية.
ويتركب المجهر الالكتروني من نفس الأجزاء الذي يتركب منها المجهر
العادي إلا أن الاختلاف في مصدر الضوء هو من فتيلة التنجستن
وهو المهبط الذي يمر فيه التيار.
أما المكثفات والعدسات الشيئية والعينية فيحل محلها كل من ملف كهرومغناطيسي
يمر فيه تيار متغير شدته مساوية لشدة المهبط.
ويمكن تغيير هذه الشدة قبل بدء الفحص حتى يتم تركيز بؤرة الالكترونات على الجسم
المفحوص والحصول على صورة واضحة على اللوحة الفلورنسية.
د. عمر عبد القادر

21. إذاً فكرة المجهر الإلكتروني
تعتمد تكوين الصورة على أنه يحدث نتيجة لإرتطام الإلكترونات بسطح العينة ومنها تشتت متفاوت للإلكترونات.
أما في المجهر الضوئي فإن تكوين الصورة يرجع لإمتصاص الإختياري للضوء . أى أن التباين يعود إلى غزارة عدد من الفوتونات Photons المختلفة من حيث طولها الموجي Different wavelengths من الشعاع المكون للمنظر
د. عمر عبد القادر

22. إذاً فكرة المجهر الإلكتروني
د. عمر عبد القادر

23. Basic structure Electron microscope divided into the following
Basic components :-
1- Illumination system.
2- Imaging system.
3- Specimen stage.
4- Vacuum pump system.
5- Image recording system.
د. عمر عبد القادر

24. 1- Illumination system. 1- Cathode housing.
Electron gun
Cathode (filament)
Anode
2- Electromagnet Alignment system
د. عمر عبد القادر

25. نظام الإضاءة أو مصدر الشعاع الإلكتروني المسؤول عن تكوين الصورة
أولا:
يتكون من بيت المهبط Cathodeالذي يوجد أعلى الجهاز (العمود) ويحتوي على:-
1- مدفعه الالكترونات Electron gunالتي تحتوي على الفتيل Filament
وهي المهبط Cathode وهو على شكل حرف V .
المهبط / الفتيل يصنع عادة من سلك معدني يمتاز بسهولة تحرير الالكترونات عند تسخينه
( تذكر مبدأ اللمبة عند تسخين سلكها تعطي الضوء )
وهذا خاص بمعدن التنجستين حيث يتحمل درجة حرارة
تصل إلى أكثر من ( 3000 درجة مئوية )
والذي يتحكم بدرجة الحرارة هو قوة التيار المار فيه عند الاستخدام.
فمثلاً في المجال البيولوجي مقدار الفولتية المستخدمة
ما بين 40 K.V وحتى – 40000) K.Vفولت(
وهناك مجاهر حديثة يصل فيها الفولت (شدة التيار ) حتى مليون فولت.
د. عمر عبد القادر

26. نظام الإضاءة أو مصدر الشعاع الإلكتروني المسئول عن تكوين الصورة
2- المصعد(wehneltyl cylinder) Anode وهي قطعة معدنية مخروطية الشكل بها ثقب صغير
في مركزها قطره (1mm Dia.)من خلال هذا الثقب يمر الشعاع الالكتروني
عند مرور تيار فرق جهد عالي في الفتيل تسخن الفتيلة المهبط فتحرر الالكترونات ذات
الشحنة السالبة فتجذب نحو المصعد ذو الشحنة المضادة
د. عمر عبد القادر

27. Electromagnetic Alignment system هو المجال الكهرومغناطيسي
ثانياً:-
Electromagnetic Alignment system
هو المجال الكهرومغناطيسي
ويتكون من ملفات كهربائية عندما يمر فيها التيار يحدث فيها مجال مغناطيسي
يجعل الشعاع الالكتروني يتمركز بالوسط ويمنعه من الانحراف عن مسار الوسط
The electron beam can be focused by passing
trough a magnetic field
د. عمر عبد القادر

28. 2- Imaging system. نظام تكوين الصورة:- Lenses العدسات :-
يتكون المجهر الالكتروني النفاذ من أربع عدسات إلكترونية
تعمل على تكوين الصورة المكبرة
والعدسات هي:
1- العدسة المكثفة Objective lens ( O.L. )
2- العدسة الشيئية Projector lens ( P.L. )
3- العدسة المتوسطة Intermediate lens ( I.L. )
4-العدسة العارضة Condenser lens (C.L. )
د. عمر عبد القادر

29. تصنع كل عدسة من معدن قابل للتمغنط وتتكون من:- 1- ملف كهربائي :
وهو عبارة عن سلك ملفوف آلاف المرات يشبه الأنبوب ويمر فيه تيار كهربائي
تصل قوته إلى واحد أمبير
و المجال المغناطيسي الناتج من مرور التيار الكهربائي يركز بواسطة محفظة حديدية
ناعمة تحيط بهذه اللفات
ويساعد في تركيز هذه الحزم الالكترونية قطع من الحديد تعرف بالقطع القطبية وهما:
2- قطعتين إحداهما عليا يمكن تحريكها والسفلى مبرومة في علبة العدسة
ويعتمد البعد البؤري للعدسة الالكترونية على قوة التيار الكهربائي
الذي يصل لهذه القطع
ويمكن أن نغير البعد البؤري بتغيير شدة التيار وغالباً يصل البعد البؤري للعدسات
الالكترونية إلى عدة ملليمترات (3-5mm)
د. عمر عبد القادر

30. تحديد مواقع العدسات ووظائفها
1- يطلق على العدسة القريبة من الشاشة الفلوروسنتية
العدسة العارضة المجسمة projector lens
وهي التي تقابل العدسة العينية في المجهر الضوئي.
2- يليها العدسة المتوسطة Intermediate lens
3- ثم العدسة الشيئية Projector lens
وهي العدسة المباشرة للعينة والقريبة منها وتشابه الشيئية بالمجهر الضوئي
ولذلك سميت بالعينية/ الشيئية
4- وأخيراً العدسة المكثفة Objective lens
وهي أعلى عدسة في العمود أي أقرب شيء إلى المهبط Cathode
حيث تقوم هذه العدسة بجمع الحزم الالكترونية حين صدورها من الفتيل (المهبط)
تكثف الشعاع الالكتروني في نقطة معينة ومسار معين.
د. عمر عبد القادر

31. ويعرف الحاجز بـ (Aperture)
يوجد حاجزان متحركان من البلاتين يقعان بين العدسة الشيئية والعدسة المتوسطة
ويعرف الحاجز بـ (Aperture)
ويوجد على هذا الحاجز ثلاث فتحات أقطارها على الترتيب:-
Aperture 1=25µm, Aperture 2=50µm & Aperture 3=100µm
يستخدم حاجز العدسة الشيئية (العلوي) لإيقاف الأشعة الالكترونية المائلة والتي تمر من
خلال العدسة الشيئية، وبذلك يمنع التباين في الصورة النهائية
لذلك يطلق عليه بعض الأحيان حاجز التباين (contrast diaphragm)
د. عمر عبد القادر

32. ويستخدم حاجز العدسة الوسطى (السفلي) لإيقاف الأشعة الالكترونية المبعثرة
حافة العدسة الشيئية ويسمح باختيار بعض الأشعة اللازمة لتوضيح الصورة
ولذلك يطلق عليه الحاجز المنتخب (selective diaphragm)
وهو يقع في مستوى الصورة المتوسطة الأولى فوق العدسة المتوسطة I.L.
والعدسة الشيئية مصممة بطريقة تسمح بوضع الجسم المراد فحصه
وكذلك حاجز التباين بين قطعتيها القطبيتين
د. عمر عبد القادر

33. Magnification instrument
تعريف جهاز التكبير
Magnification instrument
جهاز التكبيرMagnification instrument عبارة عن اَداة
علمية لها القدرة على تكبير وتوضيح العينات الصغيرة جداً وبالذات
تلك العينات التي يستحيل رؤيتها بالعين المجردة
د. عمر عبد القادر

34. المجهر الإلكتروني الماسح
د. عمر عبد القادر

35. المجهر الإلكتروني الماسح
الصورة توضح الرسم الخطيطي للمجهر الماسح
يشبة العمود ذلك الموجود في المجهر النافذ
يحتوي على المواد المنتجة لأشعة الإلكترونات فقط والمستعملة لمسح العينة المراد فحصها
تتمثل هذة المواد في المدفعه كما في المجهر النافذ .
كذلك وجود العدسات المكثفة التي تعمل على تكوين حزمة ضيقة من الإلكترونات
يصل القطر الحقيقي لبقعة المسح حوالي 5nm
ومجموعة من الملفات الحارفة مع دائرة تتسبب في جعل الشعاع يمسح العينة
عمود المجهر الماسح مفرغ تماما أم مسرح العينة وملحقاته من أجهزة وإمالة العينة فتوجد عند قاعدة العمود من المجهر .
د. عمر عبد القادر

36. قدرة التبيين Resolving
يتكون المجهر الضوئي العادي من مصدر الإضاءة وثلاثة أطقم من العدسات .
فالعدسة المكثفة ( Condenser lens ) تعمل على تجميع الضوء على الشئ المفحوص بينما تكبير الشئ المفحوص يكون عن طريقة التكاتف بين العدستين الشيئية والعينية
( Objective & eye Piece lens ) كما هو موضح .
وقوة التكبيريعبر عنها بأنها النسبة بين طول الصورة وطول الجسم المفحوص , ويتراوح تكبير المجاهر بأنها عادة مابين x25 وx1500
وقدرة المجهر على كشف النقاب عن التفاصيل الدقيقة جداً للجسم المفحوص هى التي تعرف بقدرة التبيين , وتعرف بأنها أصغر مسافة بين جسمين متقاربين يمكن أن تراهما مفصولين عن بعضهما البعض .
د. عمر عبد القادر

37. قدرة التبيين Resolving
وقدرة التبيين هذه لاتحدها انواع العدسات التي تلعب دوراً في التكبير . ولكن الذي يلعب الدور الرئيسي فيها هو طول موجة الضوء المستخدم مصدراً للإضاءة , وكذلك القيمة العددية فتحة العدسة الشيئية .
ولزيادة قدرة تبيين المجهر هو إستخدام ضوء ذو طول موجة قصير .
د. عمر عبد القادر

38. المجهر الإلكتروني الماسح
في هذا النوع من المجاهر أنة تستخدم فيه
حزمة ضيقة من الإلكترونات لتمسح
العينة أى أن الإلكترونات تتحرك للأمام
والخلف ماسحة سطح العينة
كذلك العينة تتسبب في عكس الإلكترونات
يطلق عليها الكترونات ثانوية ويمكن
إستخدامها لإنتاج الصورة
وعلى هذا أستخدم المجهر الماسح على نطاق واسع وتجاري
1965م ومنذ ذلك الوقت أصبح لة دور بارز في عمل الأبحاث
الحيوية والجيولوجية والصناعية . ويعتبر المجهر الماسح
مكمل لعمل النافذ
د. عمر عبد القادر

39. وتعتمد قدرة التبيين في المجهر الماسح
Resolving Power
سرعة المسح. وعدد خطوط
الخيال المتكون
حجم نقطة أشعة
الإلكترونات التي تمسح
العينة
طبيعة العينة المفحوصة
والطريقة التي تتداخل
فيها أشعة الإلكترونات
وعلى العموم بأن قدرة التبيين في الماسح تصل إلى
10nm
د. عمر عبد القادر

40. خطوات معاجة العينة كيميائيا لتحضيرها للفحص بواسطة المجهر الإلكتروني
Tissue Processing
خطوات معاجة العينة كيميائيا لتحضيرها للفحص بواسطة المجهر الإلكتروني
د. عمر عبد القادر

41. Tissue Processing التثبيت Fixation غسيل العينات Washing
نزع الماء Dehydration
التجفيف بالنقطة الحرجة Critical Point drying
عمليات ما بعد التجفيف
Processing Specimens after drying
التحميل على الحوامل العينات Specimen stubs
د. عمر عبد القادر

42. التثبيت Fixation يكون على مرحلتين المثبت الأول Primary Fixation
بمحلول الجولترالدهيد 2-3% Buffered glutraaldhyd
عند درجة حرارة الغرفة لمد 2-3 ساعات – أو ليلة كاملة في الثلاجة.
وهو مهم في تثبيت مادة glycogen & protein في النسيج والخلايا
د. عمر عبد القادر

43. التثبيت Fixation المثبت الثانوي Secondary Fixation
باستخدام حمض الأوزميوم 1% Buffered Osmic acid
Osmium tetroxid –OsO4
عند درجة حرارة الغرفة
وهو مهم في
1- تثبيت المادة الدهنية Lipid في النسيج والخلايا
2- كصبغة أولية لعينات المجهر الإلكتروني وعينات الكيمياء النسيجية
3- يزيد من عملية التوصيل الكهربائي بين العينة وشعاع الحزم الإلكترونية وذلك يؤدي إلى زيادة التباين بسبب زيادة التوصيل الكهربائي
د. عمر عبد القادر

44. أهمية التثبيت العامة : الحفاظ على العينة من التفتت والتفسخ .
الحفاظ على العينة من التحلل الذاتي بفعل الإنزيمات والبكتيريا .
إعطاء العينة شئ من الصلابة والقسوة وتحويل محتوى النسيج السائل إلى صلب .
حماية النسيج من عيوب الانكماش .
يعمل كوسيط بين المثبتات والكحول .
بقاء النسيج على طبيعتة وحالته في مصدرة .
د. عمر عبد القادر

45. عوامل هامة تؤثر على التثبيت
تركيز المثبت الأولي قبل أخذ العينة
حجم العينة ( تكون صغيرة )
سرعة نقل العينة من مصدرها
مدة التثبيت يجب أن تتناسب مع حجم العينة
كمية التثبيت
جودة المثبت ( جديد – قديم – متأكسد أم لا – بدون لون – أصفر –أسود )
نوع المحلول المنظم
درجة الحموضة
الإسموزية
د. عمر عبد القادر

46. غسيل العينات Washing
غسيل العينة بين المثبتات وبعدها أمر هام خاصة بعد المثبت الثاني O.A , حيث بقائه أو آثاره لفترة طويلة يؤثر على النسيج
وكذلك قد تتغلغل مكونات المثبت مع المادة التي تليها فينتج عن هذا التفاعل تغيرات في مكونات النسيج والخلية .
لذلك نحتاج إلى الغسيل بأحد الطرق التالية:
د. عمر عبد القادر

47. التجفيف dehydration عملية نزع الماء من العينة
هي عملية التخلص من جزيئات الماء H2O من النسيج والخلايا الحيوانية والنباتية وذلك بواسطة احد انواع الكحولات فقط الميثا نول والإيثا نول
أو بواسطة مادة الاسيتون بشرط التدرج بالتركيز من الأقل للأعلى
وهذا مهم من اجل تقبل النسيج للخطوة اللاحقة للمادة ذات الكثافة العالية المتصلبة
وحسب الجدول التالي كلما زاد وقت تعرض العينة لمادة نزع الماء كلما زادت الصلابة
وكلما قلت مدة نزع الماء كلما زادت سلبية الانكماش
د. عمر عبد القادر

48. حلول الفترة عدد المرات تركيز الكحول المستخدم 10 MIN 2X 30% ETHANOL
د. عمر عبد القادر

49. عوامل هامة لعملية نزع الماء
التدرج الخفيف تعريض العينة للكحولات والبداية من 30% للعينة الحيوانية بل في بعض عينات النباتات نبدأ من 5% ثم 10% وحتى 100% حيث ان مكونات السيتوبلازم لها القابلية للانفصال عن خدران الخلية وكذلك عدم التدرج قد يؤدي الى الإنكماش والتشوه للخلية
التتابع- الالتزام بالترتيب
الاستقرار على احد الكحولات الذي يتم تحضيره مع الماء المقطر
الوقت والفترة (تعتمد علي نوع العينة)
الخلايا← أقل وقت
الانسجة (كبيرة-طرية-قاسية) اكثر وقت.
د. عمر عبد القادر

50. هناك بعض الإحتياطات الواجب أخذه عند تحضير العينات بالمجهر
الإلكتروني
تنظيف العينة
وذلك بغمرها في المحاليل
فسيولوجية مناسبة
حجم العينة
أن لا تكون كبيرة
زمن أطول في التثبيت
صعوبة نزع السوائل
التثبيت
لابد أن تتم التثبيت مباشرة
بعد تنظيفها
د. عمر عبد القادر

51. مجموعة من المسطبة الخاصة بحمل العينات النعدة للفحص بالمجهر الإلكتروني
الماسح
د. عمر عبد القادر

52. د. عمر عبد القادر

53. د. عمر عبد القادر

54. د. عمر عبد القادر

55. د. عمر عبد القادر