1. 实验九 水质的微生物检测（综合实验） 实验目的  了解水质微生物检验的原理  学习测定水中大肠菌群数量的多管 发酵法

2.  水中细菌总数的测定 —— 平板菌落计数 法  水中大肠菌群数量的测定

3. 水中大肠菌群数量的测定  大肠菌群 —— 能在 37 ℃ 24-48h 内发酵乳糖产 酸与产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽 孢杆菌。  主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌 属、克雷伯氏菌属的细菌。  粪便中存在大量的大肠菌群细菌，在水体中存 活的时间和对氯的抵抗力与肠道致病菌，如沙 门氏菌、志贺氏菌相似。易于培养和观察。

4. 典型菌落 产气 报告为大肠菌群阳性 不产气 报告为大肠菌群阴性 乳糖蛋白胨培养基

5. 乳糖起选择作用；溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用

6. 实验方法和步骤  1 ．水样的采取  自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼 3 min 灭菌，再开 放水龙头使水流 5 min 后，以灭菌三角烧瓶接取水样， 以待分析。  池水、河水或湖水：应取距水面 10- 15 cm 的深层水样， 先将灭菌的带塞玻璃瓶，瓶口向下浸人水中，然后翻 转过来，除去玻璃塞，水即流人瓶中，盛满后，将瓶 塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放人 冰箱中保存。

7. 多管发酵法检测水样中大肠菌群  自来水检查  初发酵试验接种水样总量为 300ml ：在 2 个含有 50 ml 三倍 浓缩的乳糖蛋白脉发酵烧瓶中，各加入 100 ml 水样。在 10 支含有 5 ml 三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管中，各加入 10 ml 水样。混匀后， 37 ℃培养 24h ， 24 h 未产气的继续培养 至 48 h 。通过平板分离、涂片、染色、镜检和复发酵试验 检查各发酵管（瓶）中是否有大肠菌群存在。  证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管 （瓶）数查阅接种水样总量为 300ml 检数表，即得大肠菌 群数。 MPN 法（ Most Probable Number ）最大可能數法

9. 池水、河水或湖水等的检查  (1 ）将水样稀释成 10 -1 与 10 -2 ．  (2) 分别吸取 lml 10 -1 与 10 -2 的稀释水样和 l ml 原 水样，各注入装有 10 ml 普通浓度乳糖蛋白胨发 酵管中。另取 10 ml 和 100 ml 原水样，分别注人 装有 5 ml 和 50 ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的 试管（瓶）中。  （ 3 ）初发酵实验、平板分离和复发酵实验  （ 4 ）发酵结果查阅接种水样总量为 111.11ml 检 索表。

11. 实验内容及安排 实验安排  水样采取  初发酵试验（第 10 周完成）  平板分离 （第 10 周完成）  涂片，革兰氏染色，镜检 （第 11 周完成）  复发酵试验 （第 11 周完成）

12. 综合实验论文 说明多管发酵法检测水样中大肠菌群的原理和操作 过程。 记录并报告实验结果。 结果分析与讨论，经检查，水样是否合乎饮用标准？