2. تشخيص سندرم‌هاي تالاسمي و الكتروفورزيس
تشخيص سندرم‌هاي تالاسمي و الكتروفورزيس

3. تعريف سندرم‌هاي تالاسمي
ژنوتيپ انواع تالاسمي :
ژن α – كروموزوم 16
ژن β – كروموزوم 11 γ δ

4. Normal Hemoglobins
HbA α2β2
HbA α2δ 2
HbF α2γ 2

5. HbF (α2γ 2) Procedure : alkali denaturation
Reference value: 1 mon : 50-75%
2 mon : %
3 mon : 10-35%
6 mon : 8%
over 2 y: <2%

6. Increased HbF in Various Hemoglobinopathies HPFH
Nonhereditary Refractory Anemia
Pernicious Anemia
Leukemia
Multiple Myeloma
Pregnancy
Trisomy 13, 15, 21
Acquired aplastic anemia
Sideroblastic anemia
Myelofibrosis
PNH

7. ↑ HbF → ↑ HbA1C
↑ HbS, G, D → ↓ HbA1C
Decreased HbF in:
Multiple Chromosome abnormalities

8. HbA2 (α2 δ2) Reference value: 0-30d < 1% over 1y 1.5-3.5%
Increased in : β Thala
megaloblastic anemia
* hyperthyroidism
Wilson Disease
sickle cell anemia
sickle + α thal
unstable hemoglobin (HbE)

9. HbA (α2 β2)
Reference value d %
over 6m >95%

10. Lab. Finding in minor β Thala
↓ Hb
↑ RBC (5-7)
↓ MCV (55-70)
↓ MCH <22
N يا ↓ MCHC
retic ×2
↓ osmotic fragility
↑ HbA %
↑ HbF 1-3%
N RDW
PBS (hypo, micro, target cell, basophilic stippling)

11. Screening for hemoglobinopathies
CBC (RBC, MCV, MCH)
PBS (crystal, target cell, inclusion bodies)
Osmotic fragility test
Sickle cell test
Hb electrophoresis
Alkali denaturation for HbF
HbA2

12. In pregnancy
↓ RBC
↑ MCV to 6 fl
↑ HbF to 6%

13. Before 4 month age PBS N (MCV < 94 → α Thala) HbA > 20% normal
9-10% minor β Thala
< 2% major β Thala

14. Formula for diffrention minor β Thala from IDA
Mentzner index : MCV/RBC <13
DF : MCV-RBC-5× Hb <0
Green & king : (MCV)2× RDW/Hb × <65
Shine & lal formula: (MCV)2 ×MCH/RBC <1530
Srivastava formula : MCH/RBC < 3.8
Kerman index -1 formula: MCV ×MCH/RBC <300

15. Minor β Thalassemia HbA2 HbF Β+/ β ↑ 2.1-5 β◦/ β ↑ 2.1-5
Β+/ β ↑
β◦/ β ↑
(δ β)◦/ δβ Nيا ↓
Hb lepore/ β (δβ)+/ β) ↓ ↑
Minima β thala ↓ N
Pathophysiology

16. Normal HbA2 β - Thala
نرموكروم، silent carrier، عدم تعادل خفيف بين سنتز α و β
هيپوميكرو، وراثت همزمان ژن‌هاي معيوب σ و β و يا حذف ژن هاي β γδ شبيه به آلفا تالاسمي مينور
HbA2 (α2δ2)

17. Minor β Thala + minor α Thala
MCV N, ↓
MCH N ↓
A N↑
PBS N
Phenotype N
HbA (α2β2)

18. Minor β Thala & severe clinical manifestation
همراه با وراثت ژن‌هاي α اضافي بصورت سه تايي يا چهارتايي α α α/ α α α α
Dominant β Thala موتاسيون در اگزون شماره 3 ژن بتا ← ساخت زنجيره ناپايدار β

19. Minor γδβ Thala
MCV, MCH ↓
HbA2 ↓
Phenotype minor β Thala

20. Minor β Thala & normal Gene
MCV – MCH ↓
HbA2 ↑
PBS typic
ژن سالم و بدون موتاسيون،
اختلال درعملكرد عوامل كنترل كننده ژن بتا

21. Intermedia β thalassemia
وراثت دوژن معيوب β
Hb 9-10
ترانسفيوژن + / -
بعضي ژنوتيپ‌هاي رايج: هموزيگوت + β/ + β
هترو β + هترو α
هموزيگوت δβ (HbF 100%)
هموزيگوت لپور(HbF 75% + Hb lepore 25%)
هتروزيگوت β + ژن‌هاي سه تايي α (HbF 10-15% HbA2 ↑)

22. δ-Thlassemia
فقدان يا كاهش سنتز زنجيره دلتا كه منجربه فقدان يا كاهش HbA2 مي‌شود.
اگر با ژن β تالاسمي همراه نباشد در هردوفرم هموزيگوت و هتروزيگوت بدون علامت است. اهميت‌ شناسايي آن از اين نظراست كه در همراهي با بتاتالاسمي باعث كاهش A2 مي‌شود.
HbA2 (α2 δ2)

23. Hypo micro anemia A2>3.5 minor β thala A2<3.5 * IDA α thala
HbH Disease
δ variant + minor β thala
Hb lepore
HPFH
Hb variant (HbE)

24. Hypo micro anemia →A2 < 3.5 → Iron therapy:
HbA2 > minor β thala
HbA normal RBC IDA
HbA hypo micro minor α thala
minor β + minor α
minor γδβ thala
minor δ + minor β

25. Normal CBC and HbA2 A2<3.5 Hemoglobin variant HPFH syndrome
A2> minor β thalas
minor β + minor α
hyperthyroidism
unstable Hb
Heterozygous sickle cell
Megaloblastic anemia (early stage)
liver Disease + β thala
wilson disease

26. α thalassemia حذف ژن α حذف يك ژن : حامل خاموش
حذف سه ژن: HbH Disease
حذف چهارژن: مرگ داخل رحمي

27. HbS موتاسيون درژن β در الكتروفورز : باند S ، بدون A HbSS
باند A, S HbAS S<A نرموكروم – نرموسيتيك
باند A, S S>A minor β thala+HbAS هيپوميكرو

28. (H.I←Bart’s←J←K←A← F← L.P.G.Lepole← G.D.S← O.E.C.A2)
Hb Electrophoresis
از قطب منفي به قطب مثبت
PH=8.6 بر روي استات سلولز
نمونه
نگه‌داري نمونه
نگه‌داري بافر، در يخچال
آماده‌سازي غشاي استات سلولز
مدت زمان الكتروفورز
آلودگي با پلاسما
سرعت حركت
(H.I←Bart’s←J←K←A← F← L.P.G.Lepole← G.D.S← O.E.C.A2)
باند A2 بيشتر از 10%: HbC, E, O
باند S 10-15% : Hb Lepore

29. HbA2 Result <1.6 - α thala (- -/αα) - HbH Disease
- minor β thala + δ variant
normal
- δβ thala
- minor β thala
- α+ thala (-α/ αα)
minor β thala + IDA
- minor β thala + minor α thala
-HbS
- HbS + α thala
- error
minor β thala
- unstable Hemoglobin
> minor β thala (rare)
- Hb variant

30. HbF (α2γ2) 1-5% - 30-50% of minor β thala - Hb variant (minor & major)
- minor β thala + minor Hb variant
- non thalassemic disorder
5-20% - minor β thala
- homozygout Hb variant
- heteroaygous HPFH
- δβ thala
15-45% - hetro HPFH
- Intermedia thala
>45% - major β thala
- homozygous HPFH
- newborn