1. 家蚕主要疫病综合防治技术 浙江大学蚕蜂研究所 浙江大学农业技术推广中心 鲁 兴 萌 www.lxm3s.com

2. 主要疫病广义：所有传染病 生理和理化因子引起病害（上世纪 60 年代） 生理和理化因子引起病害（上世纪 60 年代）医学、植物保护、预防兽医学（分为三类，法律）农业部 蚕型多角体病（？）和蚕白僵病 蚕型多角体病（？）和蚕白僵病进出境检验检疫局 家蚕微粒子病（蚕桑生产实际强制执行检疫对象） 家蚕微粒子病（蚕桑生产实际强制执行检疫对象）现实 环境中有害化学物质 环境中有害化学物质

3. 家蚕血液型脓病的流行特征 近年流行最为广泛和危害最为严重的传染性病害； 近年流行最为广泛和危害最为严重的传染性病害； 亚急性病害，病程为 3~7 天； 亚急性病害，病程为 3~7 天； 在为及时去除感染病蚕的情况下，蚕座内传染快而严重； 在为及时去除感染病蚕的情况下，蚕座内传染快而严重； 现行蚕品种的抗性差异并不大，但环境因子对抗性的影响极 为严重。 现行蚕品种的抗性差异并不大，但环境因子对抗性的影响极 为严重。

4. 不同蚕品种的抗性差异 不同蚕品种的抗性差异 区 域 试验品种数 LD50 倍数 江浙桂 242600 浙江 1014

5. 1 ～ 3 龄的饲育温度不同，对 4 龄起 蚕感染 NPV 后的发病率影响 21/1.225/1.033/125 1 ～ 4 龄的饲育温度不同，对 5 龄起 蚕感染 NPV 后的发病率影响 21/0.225/1.033/110 5 龄起蚕感染 NPV 后，不同饲育温 度对的发病率影响 21/825/1.033/120 三眠眠中不同温度，对 4 龄起蚕感 染 NPV 的抵抗性影响 25/1.032/8.036/ 上亿倍 4 龄起蚕不同温度下绝食（ 24h ） 后，对 NPV 的抵抗性影响 25/1.031/5.037/2000 高温冲击可引起家蚕对血液型脓病抗性的急剧下降高温冲击可引起家蚕对血液型脓病抗性的急剧下降

6. 其它因子引起或诱导发生血液型脓病爆发不容忽视 微量农药等化学有害物质的微量中毒； 微量农药等化学有害物质的微量中毒； 低温、用叶过嫩、 “ 等等齐 ” 等饲养技术性过失； 低温、用叶过嫩、 “ 等等齐 ” 等饲养技术性过失； …… ……

7. 家蚕中肠型脓病的流行特征 极易发生蚕座内传染的慢性病害； 极易发生蚕座内传染的慢性病害； 近年生产中发生重大危害的案例并不多见。 近年生产中发生重大危害的案例并不多见。

8. 家蚕白僵病的流行特征 时常流行的传染病之一（病原菌的腐生性和外在性）； 时常流行的传染病之一（病原菌的腐生性和外在性）； 与气候条件和区域密切相关。 与气候条件和区域密切相关。

9. 家蚕微粒子病的流行特征 由家蚕微粒子虫引起的慢性传染病，且可通过胚种传染； 由家蚕微粒子虫引起的慢性传染病，且可通过胚种传染； 一种全身性感染的病害，极易污染养蚕环境； 一种全身性感染的病害，极易污染养蚕环境； 具有一定的环境稳定性，但并非难于杀灭的微生物。 具有一定的环境稳定性，但并非难于杀灭的微生物。 家蚕微粒子病曾给个别区域带来毁灭性影响，也是我 省目前蚕种生产规模大幅衰退的重要因素。

10. 生产或使用 “ 无毒 ” 蚕种是控制家蚕微粒子病的根本措施，而蚕 种检疫制度和技术的实施是其中之关键。 杂交蚕种检疫情况：

11. 生产 “ 无毒 ” 蚕种的两个主要技术过程：蚕种生产与检疫。 蚕种生产过程（基础） 蚕种生产过程（基础） 蚕种检疫过程（关键） 蚕种检疫过程（关键） 袋 蛾？ 现行蚕种检疫的主要方法：集团 + 母蛾 or 成品卵 + 镜检 集团：在保证抽样代表性基础上，提高检测效率。 现行标准： NY/T327-1997 ，包括母蛾与成品卵 现行标准： NY/T327-1997 ，包括母蛾与成品卵 DB33/T217.3-2007 ，仅包括母蛾 DB33/T217.3-2007 ，仅包括母蛾 问题： NY 较 DB 对用户更安全； 母蛾已有长期验证，成品卵检疫？ 母蛾已有长期验证，成品卵检疫？

12. 成品卵检疫（ NY/T327-1997 ）的主要问题 1 、抽样量不足 3 个样点 … 每批 10 盒以上...2x10g → 混匀 → 10g （ 3g+7g ） → 7x1g → 1g → 17-18 个样本，每个约 100 条蚁蚕 … 3 个样点 … 每批 10 盒以上...2x10g → 混匀 → 10g （ 3g+7g ） → 7x1g → 1g → 17-18 个样本，每个约 100 条蚁蚕 … 2 、操作过程难于标准化 100 条蚁蚕计量太耗时；不计量，风险评估无科学性。操作 上无法作为标准。 100 条蚁蚕计量太耗时；不计量，风险评估无科学性。操作 上无法作为标准。 3 、检疫对象不明确 即浸种检测结果滞后，只能作为参考，时间上决定其无法作 为检疫标准。 即浸种检测结果滞后，只能作为参考，时间上决定其无法作 为检疫标准。 4 、判别标准缺乏科学依据

13. 已有研究结果 1 、不同蚕品种的胚传率不同（ 0.5-100% ），平均 30% （三 谷贤三郎， 1929 ）； 2 、不同 Nb 感染剂量和个体母蛾所产一代杂交种（即浸）的 胚传率不同（ 0.1-100% ），平均 28.5% （白玉）和 30.4% （徐杰， 2004 ）。

14. 如果上述结果可靠，实际生产中的不同批次间的胚传率不同， 则： 实际胚传率成品卵检测判定结果相对安全性 大于 30% 合 格 安 全 不合格不一定不安全 等于 30% 与母蛾检疫具有较高的吻合性 小于 30% 合 格 不一定安全 不合格 安 全

15. 有待解明或掌握的基本规律 1 、多少健康蚕卵中混入 1 条感染 Nb 病蚕，可对养蚕成绩造 成显著影响，或对养蚕生态产生明显影响？ 2 、不同感染程度蚕卵（蚁蚕）对蚕座内传染的影响，或养蚕 成绩的影响是否有显著差异？ 3 、抽样技术（代表性、高效性）

16. 家蚕微粒子病 检测 和 检疫 的差异 主要技术参数 灵敏度：从能力上而言目前光镜检高于免疫学或分子生物 学（ PCR ）的方法， PCR 等方法从理论上可能高于光镜检。 灵敏度：从能力上而言目前光镜检高于免疫学或分子生物 学（ PCR ）的方法， PCR 等方法从理论上可能高于光镜检。 特异性：靶病原（ Nb ）检出的唯一性（母蛾要求高，成 品卵要求低），杜绝假阳性（误判）。 特异性：靶病原（ Nb ）检出的唯一性（母蛾要求高，成 品卵要求低），杜绝假阳性（误判）。 可行性（工效）：时间和成本上的可行是基本条件。检测 必须考虑成本，检疫成本因素不是十分重要。 可行性（工效）：时间和成本上的可行是基本条件。检测 必须考虑成本，检疫成本因素不是十分重要。

17. 主要技术的基本流程 光镜技术 光镜技术 样本制作（拆蛾 → 磨蛾 → 过滤 → 离心） → 观察 样本制作（拆蛾 → 磨蛾 → 过滤 → 离心） → 观察 免疫学技术 免疫学技术 沉淀法： Nb 孢子纯化 → 试管内混合 → 肉眼观察 沉淀法： Nb 孢子纯化 → 试管内混合 → 肉眼观察 ELISA ： Nb 孢子纯化 → 酶标仪读取 ELISA ： Nb 孢子纯化 → 酶标仪读取 胶体金： Nb 孢子纯化 → 肉眼观察 胶体金： Nb 孢子纯化 → 肉眼观察 分子生物学（ PCR ）技术 分子生物学（ PCR ）技术 仪器读取 Nb 孢子纯化 电 泳电 泳电 泳电 泳 扩 增扩 增扩 增扩 增核酸提取试管反映肉眼观察PCRLAMP qPCR 扩 增扩 增扩 增扩 增核酸提取肉眼观察

18. 三类技术的主要参数特点 灵敏度特异性 效 率 （百样 / 人 · 耗时, 分钟） 光镜检 2x10 4 人为 250+50 250+50 免疫技术 沉淀法 10 4 ~ 高 >250+20 >250+20 ELISA 10 3 ~ 高 >250+30 >250+30 胶体金 10 3 ~ 高 >250+20 >250+20 分子技术 PCR 10 2 ~ 高 >250+180+200 >250+180+200 LAMP 10 2 ~ 低 >250+30 >250+30 qPCR 10 2 ~ 高 >250+100+10 >250+100+10

19. 工业与农药污染（有害化学物质） 外源性：企业、大田或农作物 内源性：桑园治虫

20.  大规模养蚕中毒的主要原因 1 桑园使用农药中混有对家蚕剧毒的农药 2 桑园周边农作物大量使用农药 3 蚕区有农药企业 4 蚕区企业排放大量对家蚕有毒的物质

21. 1. 1. 控制养蚕环境污染是蚕病防治的重要基础 2. 2. 做好养蚕消毒工作是蚕病防治的技术关键 3. 精心饲养增强体质是蚕病防治的有效保障 主要疫病综合防治的三项基本原则

22. 1. 控制养蚕环境污染是蚕病防治的重要基础 必然 养蚕发病 --- 必然 有病原微生物或有害物质的存在。 家蚕的病原微生物都是极为微小的生物体，虽然我们肉眼看不见，手也 摸不着，只有借助光学活电子显微镜才能看到，但这些细小的生物体是 养蚕生产的重要潜在危险。 保持养蚕环境中病原微生物尽可能少的状态是蚕病防治的重要基础。 污染是全面的，消毒是局部的，治疗的作用是非常微小的。 污染是全面的，消毒是局部的，治疗的作用是非常微小的。

23. 人  虫  风雨气  动物   用水等     蚕具储藏室 上 蔟 室上 蔟 室上 蔟 室上 蔟 室 储 桑 室储 桑 室储 桑 室储 桑 室 养 蚕 室养 蚕 室养 蚕 室养 蚕 室 蚕 沙 坑蚕 沙 坑蚕 沙 坑蚕 沙 坑 生活区 桑 园 桑 园   

24. 控制桑园害虫是防止病原微生物感染家蚕的重要措施 控制桑园害虫是防止病原微生物感染家蚕的重要措施 “ 桑园里虫多，蚕室里病多 ” 既是我国劳动人民的经验积累，并与被大量科学试验所证实

25. 12.38% 蚕 沙 坑 5.14%蚕室前地面 8.54%蚕室地面 * * 蚕室窗台5.50% 5.42%蚕室墙壁 6.55%蚕室后地面 * * 养蚕环境中不同场所的多角体检出率 桑虫： 26-30%

26. 养蚕过程中的检出率 - 1

27. 养蚕过程中的检出率 - 2 养蚕前

28. 良好的隔离设置（养蚕设施间、人员和动物的有效隔离 … ） 良好的隔离操作次序与习惯（先净后脏、勤洗手 … ） 分批提青 良好的养蚕隔离技术（分批提青、勤除沙等 … ） 洁净的污染物处理操作（蚕沙、病死蚕等 … ） ……

29. 家蚕是一种对农药和部分环境污染物极为敏感的小动物！ 家蚕是一种对农药和部分环境污染物极为敏感的小动物！ 桑园用农药的选择 中国农药信息网（ www.chinapesticide.gov.cn ） 稳定的购销渠道

30. 养蚕前养蚕中养蚕后 2. 做好养蚕消毒工作是蚕病防治的技术关键 养蚕前消毒 养蚕中消毒 养蚕后消毒 病原微生物积累增长规律

31. 认真做好养蚕前的清洗工作是提高消毒效果的有效途径 ! 认真做好养蚕前的清洗工作是提高消毒效果的有效途径 ! 国家 ( 农业部 )--- 中国兽药信息网（ www.ivdc.gov.cn ）

32. 3. 精心饲养增强体质是蚕病防治的有效保障 个体高度密集与防御能力十分有限 个体高度密集与防御能力十分有限 没有系统的免疫体系。 蚕座面积规定收蚁当天约为 0.15 m 2 / 张（ 25000 头）， 5 龄盛食期约 为 26 m 2 / 张。按照大蚕个体平面面积（体长 × 体幅）约为 6 cm 2 计算，蚕 座面积至少 60% 被蚕体自身所占有。 半开放和人为控制作用 半开放和人为控制作用 室内饲养。 不能简单套用害虫（或野外昆虫）和畜禽养殖的理论和技术。

33. 合理布局，做好规划 严控养蚕温湿度 加强眠起处理 良 桑 饱 食良 桑 饱 食 大小蚕分育，小蚕共育 合理催青保护 选 用 良 种选 用 良 种 防除敌害 …… 增 强 蚕的体质

34. 严格按照饲养标准进行饲养与操作。 严格按照饲养标准进行饲养与操作。 给桑（次数、用叶老嫩与均匀、数量 …… ） 眠起处理（发育整齐度、创伤、过度饥饿或口器损 坏 …… ） 温度（根据家蚕生长发育规律和外界气温变化，避免家蚕 接触过低和过高温度）。 ……

35. 有效控制湿度是防控僵病的基础条件低温高湿可采用熏烟等简易方法。 白僵菌分生孢子侵入蚕体的最适温度是 25 ℃（ 24-28 ℃）。 绿僵菌分生孢子侵入蚕体的最适温度是 22 - 24 ℃。 绿僵菌分生孢子侵入蚕体的最适温度是 22 - 24 ℃。 曲霉菌分生孢子侵入蚕体的最适温度是 30 - 35 ℃。 曲霉菌分生孢子侵入蚕体的最适温度是 30 - 35 ℃。 湿度都为 80 ％（ RH ）以上，湿度越高越易发芽侵入。  温度和湿度与侵入直接有关，侵入后的温度影响现对较小。

36. 养蚕期间零星发生细菌性败血病是不可避免的事情，一旦 出现发生程度加剧的势头，可适当使用抗生素。 养蚕期间零星发生细菌性败血病是不可避免的事情，一旦 出现发生程度加剧的势头，可适当使用抗生素。 避免蚕座内滥用水剂。 避免蚕座内滥用水剂。

37. 区分传染性蚕病与非传染性蚕病。 区分传染性蚕病与非传染性蚕病。 非传染性蚕病在去除死蚕和落小蚕以后，通过精心饲养可 以挽回部分损失。 非传染性蚕病在去除死蚕和落小蚕以后，通过精心饲养可 以挽回部分损失。 养蚕安全工作站WWW.lxm3s.com

38. 蚕 蜂 研 究 所 Institute of Sericulture and Apiculture 农业技术推广中心 Agricultural Technology Extension and Service Center