1. 新癌基因 PPO 的克隆及在卵巢癌治疗中的应用 PPO, A New Putative Oncogene for Ovarian Carcinoma Therapy 河北医科大学第三医院 河北省骨科医院 骨肿瘤科 刘思源 MD.PhD Department of orthopedic, Third Hospital ， HeBei Medical University

2. Genomic Research began with The Human Genome Project (HGP), the international research effort that determined the DNA sequence of the entire human genome, completed in April 2003. Contributors to the HGP included the National Institutes of Health (NIH), which began participation in the HGP in 1988 and created the National Human Genome Research Institute (NHGRI) in 1993; the U.S. Department of Energy (DOE), where discussions of the HGP began as early as 1984; numerous universities throughout the United States; and international partners in the United Kingdom, France, Germany, Japan and China. The HGP also included efforts to characterize and sequence the entire genomes of several other organisms, many of which are used extensively in biological research. Identification of the sequence or function of genes in a model organism is an important approach to finding and elucidating the function of human genes. 二十世纪的人类自然科学史上有三大工程，一个是曼哈顿原子计划，一个是阿波 罗登月计划，另一个是人类基因组计划。 Human Genome Project 人类基因组计划 (HGP)

3. 人类各种各样的 1 号染色体

4. A BAC-based STS-content map spanning a 35-Mb region of human chromosome 1p35-p36.

5. A BAC-based STS-content map spanning a 35-Mb region of human chromosome 1p35-p36. Genomics, 2001 74: 55-70

6. ATG TAA 123456 789101112131415 1617 181920 2122 23 2425 Genomic Structure of PPO SMART RACE (50bps) Hs. 154797 (504bps)

7. exon size intron sequences exon sequences intron sequencesintronsize 1 148 gtggtcccgcggaggcggagCCCGCGGCGG AGTTTGATTGgtgcgtacgtgtggaacata16384 2125ctgtactctttttttctcagGAGACAGCAAGGGGAGATCTgtgagtgaactgagaactgt2890 366ctaactttcatgtctctcagTGTGGCGCCACACGGACAGGgtaagcagagtcctcccgtg3242 494cacgatcttttcttttccagATGTGATCACACAGTGGCAGgtaggggagaaactggattt41140 5129caacctgtacttgtgttcagTTTCCAGGCATCCCAGAAAGgtaaggctgcctgctcacag51202 6127tttcttcttccctctcttagTGACAGCATCTGTTCAGCAGgtacaggagggtgacaggag6596 7150taacgatgacttttctgtagGTTAGGGTTTCCCACTGCAGgtgagaggctgccactgctt7311 8168tcctccttcttgccttccagTCTCTCGACTCTTCCCACAGgtaactgcaggcaacatggt8515 972atgccttgcttttcccccagACTGCCCTAGGAATGAAGTGgtgagtattgagaacaacag9373 1063tgtccttctctttctcatagCAGAAAAGTATAGTTCAAAGgtatggtgtggcactgggca10655 11123cgtgctgtctgtactcctagGACTCTCTGGGCCTGAGCGGgtaaggcagagcctttcttt11778 1297gtcttgactgtggcttatagCTGTATATCCCAGCAGTTGGgtaagtagacctcattcaac121892 13120aaaaatgtttcctgtagcagGGAAGGTGGTAAAAAGGCAGgtatgaacctaagaggttgg131994 14200ttacttttcctttacaccagATGGCTTGCTCTCAGGCAAGgtgagtggggtttaagctcc14162 15150agtatttgtttatcttgcagCTTTTTGGCAGAAGGACAAGgtgaggcatccagctctgac151201 16162tgacagtttgctcattttagGAGTCGGGAATGAATACAAGgtactgtcttcagaggggat16297 17120ggctctctgggtttttcaagGTCACAGCTTGCTTCGAAAGgtaggaaggcatgtcctggc173393 18138cttttttgcccctgccctagGATCTCACCAGCTCTACAAGgtacatacagccagctgtct183743 19174ggttttctctctctctccagAGCCTGAACCGAACTGGGTGgtggtaagcggtcactacca19561 20211gccacctcctatccctgcagTACCAGTACTCACCTGCTGAgtgagtgactggggagcctc201775 2185attcacttcctcctgtgtagTTGGACTACCAACAAAGCAGgtgagaccctcatgggcagt211065 22130tcccggctggtgttttgcagAGAGGAGAACCACTTGTTTGgtgagtagagcccacagctg2286 231949ttattccatctgccttccagGTTGTGGCCTCTCAAAGCAGgtgctttttttttttttgag23815 24908agcctgggcaacagagtgagACCCTGGCTCGTAATCCCAGctacttgggaggctgtgagg24916 25310aagcgaattctctgcctcagCCTCCCGAGTGGTAGACAACatcctgtgctctttcatttt

8. Kpn I EcoR I Xba I pcDNA3.1/ V5-His 5.5 kb 1.5 kb V5 Antisense sequence

9. Stop codon TAA-TCT XbaI site EcoRI site.

10. Dr. Western PPO 82 KD 68 KD 55 KD 42KD

11. V5 DAPI MERGE

15. Vector Plasmid

16. PPO Vector

17. In vivo assay Days Volume PPO plasmid transfected NIH/3T3 cells vector transfected NIH/3T3 cells

18. MEMO I PPO 基因和增殖有关

19. vector PPO MAPK

20. vector PPO

21. MEMO II PPO 基因和磷酸化有关

22. EGF EGFR P Grb2 Try1068 Sos1 Ras+ GTP membrane U0126PD98059 c-myc,c-fos c-jun expression nucleus Cytoplasm MAPK Signaling Pathway Ras+ GDP GDPs Sos PPO P P P P P activated Ras MAPK MAPKK MAPKKK MAPKKKK PI3K AKT P P CRAF ARAFBRAF MEK1/2 MAPK

23. 结论 1.PPO 位于 1p36.13 。 2.PPO 蛋白位于细胞质内。 3.PPO 和增殖有关。 4.PPO 和磷酸化有关。 5.PPO 是 MAPK 通路中新的癌基因。 我把该基因命名为： PPO (Proliferation and Phosphorylation Oncogene 110 KD) 。

24. RT-PCR 结果

25. PPO/beta2 MG 定量 RT-PCR 结果

26. PPO

27. 卵巢单纯性囊肿上皮 HE 染色 X200 卵巢单纯性囊肿上皮免疫组化染色 X200

28. 卵巢粘液性囊腺瘤 HE 染色 X200 卵巢粘液性囊腺瘤免疫组化染色 X200

29. 卵巢交界性粘液性乳头状囊腺瘤免疫组化染色 X200

30. 卵巢粘液性囊腺癌 HE 染色 X200 粘液性囊腺癌免疫组化染色 X200

31. 卵巢浆乳癌 HE 染色 X200 卵巢浆乳癌免疫组化染色 X200

32. PPO sense RNA 5`-UAUGUUGGGAAGGUCAAGUdTdT-3` (159nt to 187nt) antisense RNA, 3`-dTdTAUACAACCCUUCCAGUUCA-5` Lamin sense RNA, 5’-CUGGACUUCCAGAAGAACAdTdT-3’ antisense RNA, 5’-UGUUCUUCUGGAAGUCCAGdTdT-3’

33. Vector PPO V5 p-MAPK MAPK Vector PPO beta-actin PCNA p-MEK1/2 MEK1/2 Vector PPO

34. days Volu me A C B 利用 RNA 干扰抑制卵巢癌细胞在裸鼠皮下生长的试验 A 是相同大小的肿瘤，左侧注射 Lamin 控制基因的 RNAi 试剂， 右侧注射 PPO 的 RNAi 试剂。 B 是切取的标本。图 C 为生长曲线。 PPO Lamin Volume

35. 利用 RNA 干扰抑制卵巢癌细胞在裸鼠皮下生长的试验 A 是相同大小的肿瘤，左侧注射 vector ， 右侧注射 PPO 的 RNAi 试剂。 B 是切取的标本。图 C 为生长曲线。 days A B PPO Lamin Volume

39. 1 2 3 4 5 6 7 8 Beta-actin PPO-RNAi 1: 未转染。 2-8 ：转染后。 2-7 ： PPO 基因被 Knockdown 8 ： PPO 基因被 Knockout

40. 现在正做的工作 12 PPO 基因用于癌症临床诊断的试剂盒。 PPO 基因用于癌症病理诊断的试剂盒。 PPO 基因用于腺癌治疗的试剂的初步研究。 3

41. 现在国际上几乎每克隆出一个与疾病相关的基因都会立刻被专利化。如果哪位专家 对 PPO 基因感兴趣，可以和我联系，共同进行临床转化研究。

42. 感谢国家自然基金委员会对本项目的支持。 感谢我所有的研究生对这项工作的支持。 感谢河北医科大学第四医院病理科王小玲主 任对这项工作的帮助。感谢所有帮助过我的人。

43. www.themegallery.com 联系方式： 网址：三院骨科网： sanyuanguke.org 邮箱： liusiyaun2004@yahoo.com liusiyaun2004@yahoo.com 电话： 13930139260